TRANSFORMACIÓN.

Presentación del tema: "TRANSFORMACIÓN."— Transcripción de la presentación:

1 TRANSFORMACIÓN

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3 Fred Griffith 1928, estudió Streptococcus pneumoniae
Conclusión: Las células R “absorbieron” “algo” de las células S “principio transformante”

4 El Principio transformante es DNA!

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6 TRANSFORMACIÓN Puede ser:
CAMBIO HEREDABLE EN UNA CÉLULA U ORGANISMO PRODUCIDO POR LA INTRODUCCIÓN DE DNA EXÓGENO Puede ser: NATURAL (se han encontrado aproximadamente 40 especies que pueden realizar este proceso) ARTIFICIAL (INDUCIDA)

7 Algunas hipótesis que no son excluyentes…..
TRANSFORMACIÓN ¿Para qué tomar DNA exógeno?.... Grandes maquinarias proteícas intervienen en el proceso de transformación Algunas hipótesis que no son excluyentes….. Para la diversidad genética (por ejemplo: obtener resistencia a antibióticos) II. Para la reparación de DNA III. Como nutrientes: El DNA es fuente de carbono, nitrógeno y fósforo

8 SEMEJANZAS Y DIFERENCIAS TRANSFORMACIÓN vs CONJUGACIÓN
¿existe DNA libre en todos los ambientes, es estable?

9 TRANSFORMACIÓN NATURAL, las bacterias más estudiadas son
GRAM + Streptococcus pneumoniae Bacillus subtilis GRAM - Neisseria gonorrhoeae Haemophilus influenzae El proceso de transformación se puede dividir en 2 ETAPAS ETAPA 1: Desarrollo de un estado competente ETAPA 2: Procesamiento del DNA Unión Importe Recombinación

10 Velocidad de transferencia: 90-100 nucleótidos/segundo a 30°C
Etapa 1: Desarrollo de un estado competente ¿Qué es una célula competente? Estado fisiológico inducible Factores que inducen el estado de competencia en la transformación natural: Limitación en los nutrientes Mitomicina C Alta densidad celular Temperatura, pH La transcripción de los genes com se inducen durante el estado de competencia Velocidad de transferencia: nucleótidos/segundo a 30°C

11 La transcripción de los genes com se inducen durante el estado de competencia

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14 TRANSFORMACIÓN ARTIFICIAL
El “caballito de batalla” es la bacteria Escherichia coli Es una técnica fundamental en biología molecular: clonación y generación de organismos transgénicos

15 PLÁSMIDOS

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17 OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: OBTENER BACTERIAS RESISTENTES A KANAMICINA
Escherichia coli Medio LB + KANAMICINA

18 En la transformación artificial ¿cómo se induce el estado competente de una bacteria?
1. Tratamiento químico 2. Electroporación

19 Preparar células competentes de E. coli
A= de 0.2 a 0.4 a 600 nm

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21 LA TRANSFORMACIÓN SE REALIZARÁ POR CHOQUE TÉRMICO

22 A nivel molecular

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24 Electroporación

25 Utilizaremos el plásmido pET-TEM
Sitio múltiple de restricción Gen que confiere resistencia a kanamicina: kanamicina fosfotransferasa Origen de replicación

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27 Enzimas inactivadoras de aminoglucósidos:
La resistencia de las cepas se hace por síntesis de enzimas generalmente codificadas por plásmidos. La inactivación de los aminoglucósidos se hace por: Adenilación de grupos hidroxilo. Fosforilación de grupos hidroxilo. Acetilación de grupos amino. ENZIMA INACTIVADORA AMINOGLUCÓSIDO INACTIVADO: Gentamicina adeniltransferasa Gentamicinas, Sisomicina, Kanamicinas, Tobramicina. Gentamicina acetiltransferasa Netilmicina, Tobramicina, Gentamicinas, Sisomicina. Kanamicina acetiltransferasa Netilmicina, Amikacina, Neomicina, Kanamicinas, Tobramicina, Gentamicinas, Sisomicina. Neomicina, Kanamicina fosfotransferasa Gentamicina A, Neomicina, Kanamicina

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29 TRANSFORMACIÓN: HERRAMIENTA ÚTIL EN EL CAMPO DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR
VECORES GENÉTICOS: molécula de DNA que es usada como vehículo para transportar segmentos de DNA foráneo en una célula huésped,

30 ESQUEMA GENERAL SESIÓN I: TRANSFORMAR cepas de E. coli con un plásmido para que adquieran resistencia a un antibiótico SESIÓN 2: AISLAR el plásmido mediante la técnica de Lisis alcalina SESIÓN 3: FUNCIóN DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Cortar el plásmido aislado con enzimas de restricción y visualizarlo en un gel de agarosa teñido con bromuro de etidio

31 Medio Luiria + KANAMICINA
Células no transformantes Células transformantes Medio Luiria + KANAMICINA

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