Enzimas de restricción tipo II

Presentación del tema: "Enzimas de restricción tipo II"— Transcripción de la presentación:

1 Enzimas de restricción tipo II
Las enzimas de restricción son generadas naturalmente por muchas especies bacterianas Protegen a las bacterias de invasión de DNA extraño, especialmente por bacteriofagos. Muchos cientos de enzimas están disponibles comercialmente. Enzimas de restricción tipo II

2 Estas enzimas se unen a secuencias específicas
Estas son típicamente palindrómicas Por ejemplo , el reconocimiento de EcoRI es 5’ GAATTC 3’ 3’ CTTAAG 5’ Algunas enzimas digieren el DNA en “fragmentos pegajosos” Otras generan extremos romos.

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4 Pasos para la clonación de un Gen 1. seleccionar el vector
Figure 19-6 A diagram of the plasmid pUC18 showing the polylinker region, located within a lacZ gene. DNA inserted into the polylinker region disrupts the lacZ gene, resulting in white colonies that allow direct identification of bacterial colonies carrying cloned DNA inserts.

5 2. Digerir el vector y el DNA blanco con la misma
enzima de restricción DNA recombinante

6 Transformación Bacteriana.
3. Transformar células bacterianas Transformación Bacteriana. Células competentes

7 DNA copia (cDNA) Cola de poli A

8 Electroforesis en gel La electroforesis de ácidos nucleicos separa a los fragmentos de acuerdo a su tamaño. Fragmentos pequeños migran más rápido que fragmentos grandes.

9 Separación del DNA por geles de agarosa
Figure Electrophoretic separation of a mixture of DNA fragments that vary in length. The photograph shows an agarose gel with DNA bands corresponding to the diagram.

10 Geles de agarosa teñidos con bromuro de etidio

11 Hibridación y reconocimiento de secuencias con alta homología

12 Marcaje de un fragmento de ADN

13 Southern y Northern blot

14 Western blot

15 Bibliotecas genómicas

16 Bibliotecas de cDNA

17 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

18 La amplificación es exponencial

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20 Para poder amplificar este segmento de ADN, diseñar los primers o cebadores
que son necesarios para la amplificación

21 Usos del PCR

22 Secuenciación del DNA

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25 Microarreglos para diferenciar
la expresión de los genes

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27 Proteómica