Grolamys Castillo1, G. Michelena1, C. Nogueiras2, J.S. Bravo3, M. Acosta3, J. A. del Río3, F Torrella3 E- mail: grolamys.castillo@icidca.edu.cu Caracterización por LC-MS de metabolitos obtenidos a partir del Biojas, biofertilizante de origen microbiano Universidad de Murcia Universidad de la Habana Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caña de Azúcar (ICIDCA). Vía Blanca No. 804 Carretera Central. San Miguel del Padrón. La Habana. Cuba. 2. Facultad de Química. Universidad de la Habana, Cuba 3. Facultad de Biología. Universidad de Murcia, España Preparación de la muestra para Fitohormonas El BIOJAS® es un biofertilizante obtenido a partir de la producción por vía fermentativa con una cepa autóctona de Botryodiplodia sp., cuyo principio activo es el Acido Jasmónico (AJ), un regulador del crecimiento vegetal con un elevado costo en el mercado mundial. Este producto con marca registrada ha demostrado su factibilidad agronómica, como regulador del crecimiento vegetal y en el control biológico de diferentes microorganismos como la Chinche harinosa que ataca a la Piña Cayena lisa y en el control de los pulgones que atacan al cultivo de Habichuela “Escambray”. Además, ha demostrado acción protectora contra el hongo Fusarium oxysporum f. sp cubense raza 2 y el Sclerotium rolfsii, entre otras acciones. Este producto contiene además del AJ, otras fitohormonas y metabolitos entre los que se encuentra un pigmento de color rojo. En este producto se realizó la identificación y cuantificación del ácido jasmónico extraído en la fracción de acetato de etilo por LC-MS, además de otras fitohormonas como el Acido Indol Acetico (AIA), Acido Indol Propiónico (AIP) y Acido Indol Butírico (AIB). Se realizó también la caracterización por LC-MS del pigmento rojo, el cual fue purificado por extracción en fase sólida (Sep-pak C18). RESUMEN extracción con acetato de etilo (1:1) (3 veces consecutivas) Caldo de fermentación (5 ml) (filtrado y centrifugado) ajustar el pH entre 2.5 y 3 HCl (1 N) rotoevaporar a sequedad resuspender en fase móvil Fase orgánica Fase acuosa LC-MS Caracterización por LC-MS del pigmento presente en los caldos fermentados Identificación y cuantificación de fitohormonas por LC-MS Los análisis se realizaron en un sistema con un equipo de HPLC Agilent Serie 1100 equipado con un automuestreador termostatado y una bomba cuaternaria conectada a un espectrómetro de Masas: Agilent Ion Trap XCT Plus Mass Spectrometer con una interfase electrospray (ESI). Las muestras y patrones se inyectaron en una columna de HPLC C18 de fase reversa: Zorbax SB-C18, 2.1 150 mm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) termostada a 40C y se utilizó un flujo de 200ul/min durante la separación. Se utilizó cartuchos Sep-Pak C18 para la preparación de muestra. La fracción con el pigmento se eluye con Metanol y se rotoevapora a sequedad para su análisis por LC-MS. Los análisis se realizaron en un sistema con un equipo de HPLC Agilent Serie 1100 equipado con un automuestreador termostatado y una bomba cuaternaria conectada a un detector de longitud de onda múltiple y a un espectrómetro de Masas de tiempo de vuelo Agilent Series 6100, con una interfase electrospray (ESI). Las muestras se inyectaron en una columna de HPLC C18 de fase reversa: Zorbax Eclipse XDB-C18, 4.6 150 mm utilizando un gradiente de polaridad. Patrón MS MS/MS TR (min) AIA 176 130 24 AIP 190 130/172 32 AIB 204 186 37 AJ 211 193 39 Patrón Recta calibrado R2 AIA y = 1E+07x + 1E+06 0,9995 AIP y = 8E+06x + 436955 0,9997 AIB y = 5E+06x + 365342 0,9996 AJ y = 1E+07x + 6E+06 Cromatograma de masas del Pigmento Color (Abs a 500 nm) Fitohormonas en caldos fermentados y biomasas Muestra Concentración (mg/L) AIA AIP AIB AJ Caldo C3 0,0471 0,0093 0,0249 99,84 Biomasa C3 0,1108 0,0438 0,6637 15,56 Caldo C4 0,0506 _ 0,0258 46,17 Biomasa C4 0,2705 0,0251 2,75 Caldo C83 0,0168 0,0118 0,0179 65,50 Biomasa C83 0,0405 0,0320 18,58 Relación de MS(+) asociadas al Pigmento Serie Serie +14 uma 344 358 388 402 432 446 476 490 520 534 564 578 608 622 652 666 CONCLUSIONES Se logró caracterizar por LC-MS la fracción asociada al pigmento presente en el caldo. Se logró identificar y cuantificar las fitohormonas presentes tanto en el caldo como en la biomasa a partir de la fermentación de Botryodiplodia theobromae.