MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO INTRODUCCIÓN FUNCIONES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO REQUERIMIENTOS DE LOS MEDIOS CONDICIONES NECESARIAS DE LOS MEDIOS CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS ELIMINACIÓN DE LOS MEDIOS

SOLUCIONES CON NUTRIENTES. UTILIDAD: crecimiento bacteriano 1.- MEDIOS DE CULTIVO SOLUCIONES CON NUTRIENTES. UTILIDAD: crecimiento bacteriano LOS MEDIOS NECESITAN ADEMÁS CONDICIONES FISICO- QUÍMICAS Y AMBIENTALES CONCRETAS Estudio de las características Presencia o ausencia de bacterias

2.- FUNCIONES DE LOS MEDIOS Separar y aislar especies microbianas Identificación de “ “ “ Conocer el metabolismo de los microorganismos. Estudios macroscópicos (colonias y UFC) Conservar especies microbianas. Realización de antibiogramas. Realización de pruebas de CMI (concentración mínima inhibitoria) para antibióticos.

FASES DE CRECIMIENTO BACTERIANO Fase de latencia o adaptación: apenas aumenta el nº de individuos. Fase exponencial: aumento muy rápido en el nº de individuos. Fase estacionaria: se mantiene constante el nº de individuos. Fase de muerte: disminuye el nº de individuos por acumulación de productos tóxicos.

GRÁFICA DE CRECIMIENTO BACTERIANO

3.- REQUERIMIENTOS DE LOS MEDIOS Requerimientos energéticos: Fuente de carbono Fuente de nitrógeno Requerimientos no energéticos Fuente de azufre y fósforo Iones metálicos Factores de arranque, de crecimiento, inhibidores. Buffers, soluciones reguladoras, soluciones tamponadas. Requerimientos excepcionales: Ácidos nucleicos Esteroles.

REQUERIMIENTOS ENERGÉTICOS Son los nutrientes usados por los microorganismos. Por lo menos una fuente de C y otra de N. Carbono: a. sustancias sencillas: etanol.. b. mono o disacáridos c. Metano, benceno… d. Polisacáridos: almidón,.. e. CO2: bacterias fotosintéticas

Nitrógeno: Proteinas completas: gelatina, extracto de carne, Peptonas: péptidos o polipéptidos: Bio-Thione ; caseina; peptona de soja. Fuentes simples de nitrógeno: nitritos, aminoácidos…

REQUERIMIENTOS NO ENERGÉTICOS Fuente de azufre: sulfatos, tiosulfatos.. Fuente de fósforo: fosfatos. Iones metálicos: Na, K, Fe (III), Zn. Factores de crecimiento: aminoácidos, vitaminas, bases nitrogenadas, factor X o factor V.

Factores de arranque: glucosa, iones. Factores inhibidores: antibióticos, azul de metileno (gram +), ázida sódica (gram - ) Buffers, soluciones tamponadas, reguladoras: estabilizan el pH

REQUERIMIENTOS EXCEPCIONALES Ácidos nucleicos: se añaden raras veces. (en pruebas de identificación bioquímica). Esteroles: se emplean como precursores de pigmentos bacterianos.

4.- CONDICIONES NECESARIAS DE UN MEDIO DE CULTIVO Composición nutricional adecuada (requerimientos anteriores). Condiciones fisico-químicas adecuadas: - Temperatura - Presión osmótica - Humedad - Oxígeno - pH - CO2

Temperatura: ha de ser la óptima. Psicrófilos: Tª < 20º Mesófilos: Tª ente 18º y 45º Termófilos: Tª > 45º A: Temperatura mínima B: Temperatura óptima C: Temperatura máxima C A B

Humedad: imprescindible para el crecimiento. pH: todos los medios llevan sustancias tampon. Presión osmótica: en general medios isotónicos. Oxígeno: el medio estará en contacto con él en función de las bacterias que queramos que crezcan: aerobias, anaerobias estrictas o facultativas, microaerófilas. CO2: adecuado para los cocos gram (-)

5.- CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Por contenido en agua: Sólidos Líquidos o caldos Semisólidos Por su utilización: De preenriquecimiento De crecimiento general Enriquecidos De enriquecimiento Selectivos o de aislamiento Diferenciales De identificación De mantenimiento de cepas Especiales

Por su composición: Por su presentación: Naturales Sintéticos Semisintéticos Complejos Por su presentación: Deshidratados Medios ya preparados Sólidos en placa de Petri Sólidos en tubo Semisólidos en tubo Líquidos en tubo De doble fase en frasco o tubo

MEDIOS SEGÚN CONTENIDO EN AGUA Sólidos: contenido en agar > = 15% También los naturales sólidos. Aislamiento, purificación, recuento. Líquidos: sin agar. Pruebas bioquímicas, recuento. Semisólidos: < 5% de agar. Pruebas bioquímicas.

MEDIOS SEGÚN SU UTILIZACIÓN Preenriquecimiento:diluyentes. Líquidos. Agua de triptona (TW), de peptona tamponada (BPW), caldo de triptona soja (TSB). De crecimiento general: agar de recuento general (PCA), agar CLED. Enriquecidos: agar sangre. De enriquecimiento: caldo selenito (C-S), caldo verde brillante (BGB)

Selectivos o de aislamiento: agar Salmonella – Shigella (S-S), Chapman, Glucosa sabouraud cloranfenicol. Diferenciales: agar Hektoen, XLD, Endo, McConkey. De identificación: medio de Clark y Lubs, SPS, Agar hierro Kliger. De mantenimiento de cepas: Caldo cerebro corazón (BHI)

MEDIOS SEGÚN SU PREPARACIÓN Naturales: componentes de la naturaleza. Artesanales. Semisintéticos: con extractos naturales, además de sintéticos. Sintéticos: estructuras sintéticas más o menos puras. Complejos: se preparan en el momento a partir de tejidos animales o vegetales.

SEGÚN SU PRESENTACIÓN Deshidratados o liofilizados: se les añade agua destilada. Ya preparados. Tanto unos u otros pueden ser: Sólido en placa de petri o en tubo. Líquidos o semisólidos en tubo Medios de doble fase en frasco Petrifilm

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Pesada Hidratación Ajuste de pH Distribución Esterilización Vertido Enfriamiento

CONSERVACIÓN 4 – 6 semanas. Guardar a 4 º C Proteger de la luz Antes de su empleo, atemperar. Los medios para verter a placa se guardan en el frasco original. Los medios guardados en estado sólido, se refunden para su distribución.

ELIMINACIÓN Se deben descontaminar tras la utilización. Posibilidades: Inundación con solución desinfectante (de 12 a 24 horas) Autoclave Incineración