AGENTES ANTIMICROBIANOS. LIMPIEZA, DESINFECCIÓN, ESTERILIZACIÓN DEL MATERIAL DE VIDRIO E INSTRUMENTOS

TÉCNICAS DE DESCONTAMINACIÓN MÉTODOS FÍSICOS MÉTODOS QUÍMICOS OTROS AGENTES MICROBIOSTÁTICOS TRABAJO EN AMBIENTE ESTÉRIL APLICACIÓN DE DICHAS TÉCNICAS: MATERIAL DE VIDRIO EQUIPOS Y MUESTRAS

TRABAJO EN AUSENCIA DE MICROORGANISMOS LABORATORIO TRABAJO EN AUSENCIA DE MICROORGANISMOS DESCONTAMINACIÓN Limpieza previa a la esterilización. Esterilización del material que estará en contacto con los microorganismos. Desinfección periódica: reduce nº microorganismos ambientales e índices de descontaminación

IMPORTANTE: la expansión de microorganismos dará lugar a errores. MATERIAL UTILIZADO: a.- Desechable incineración b.- Reutilizable descontaminación

Conceptos DESCONTAMINACIÓN: eliminación de los microorganismos patógenos que se encuentran en el material utilizado para el estudio de una muestra antes de su manejo. DESINFECCIÓN: destrucción de todas las formas de vida patógenas, en proporciones causantes de enfermedades. ESTERILIZACIÓN: destrucción de todas las formas de vida microbiana y de las formas de resistencia. ANTISEPSIA: eliminación de microorganismos de la piel y otros tejidos vivos.

PRINCIPIOS BÁSICOS DE DESCONTAMINACIÓN 1º- Destrucción del germen por esterilización o desinfección. 2º- Limpieza DESINFECCIÓN: para superficies inertes para materiales ANTISESIA: para mucosas, piel, mano ESTERILIZACIÓN: para reutilización del material Desinfectantes Antisépticos

MÉTODOS DE DESCONTAMINACIÓN Métodos físicos: modifican la actividad fisiológica de los microorganismos, influyendo en su desarrollo. (esterilizantes y microbiostáticos) Métodos químicos: se utilizan sustancias químicas que actúan sobre los microorganismos. (desinfectantes y microbiostáticos)

MÉTODOS FÍSICOS Térmicos Calor directo flameado incineración Calor seco Horno Pasteur o estufa Poupinel Calor húmedo Ebullición Tindalización Métodos que utilizan vapor de agua Autoclave Vapor fluente Pasteurización Uperización No térmicos Filtración Radiaciones No ionizantes: luz solar, rayos UV,.. Ionizantes: rayos X, rayos,..  Sedimentación

FLAMEADO: agujas, espátulas, asas tubos de ensayo… INCINERACIÓN: hornos crematorios. Guantes, jeringas, catéteres….

FLAMEAR

FLAMEAR UN ASA DE SIEMBRA

FLAMEAR LA BOCA DEL TUBO DE ENSAYO

HORNOS DE CALOR SECO Material que se oxida en el autoclave :vidrio, porcelana. Nunca líquidos, telas, medios de cultivo. Carboniza la materia orgánica Tª elevada (160-180ºC), de 1 a 2h y media Esterilizan: desnaturalización de proteinas Horno Pasteur: fuente de calor, gas Horno Poupinel: fuente de calor eléctrica

CALOR HÚMEDO EBULLICIÓN: no esteriliza. TINDALIZACIÓN: esterilizaciones discontinuas. AUTOCLAVE: vapor saturado a presión. Esteriliza VAPOR FLUENTE UPERIZACIÓN PASTEURIZACIÓN

Ebullición: No esteriliza No mata las esporas Tª 100ºC BAÑO MARIA

1 at - 120º - 20´ 2 at – 134º - 10´ 3 at – 144º - 4´ El vapor penetra por osmosis a través de la membrana, coagulando el protoplasma

Vapor fluente: autoclave, 30´ a 100ºC. Llave de purga abierta. Pasteurización: 30´ a 62,8ºC. No esteriliza. Mata sólo a algunos micro. Uperización: 1 a 20´´ a 150ºC. Esteriliza. Tindalización: tres días a Tª entre 55º y 95º

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA MUERTE DE LOS MICROORGANISMOS POR EL CALOR Nº de microorganismos. Naturaleza de los microorganismos Temperatura Tiempo de actuación: - Tiempo de penetración - Tiempo de calefacción - Tiempo de seguridad - Tiempo de enfriamiento Método empleado: tiempo de muerte térmica. El calor húmedo es más eficaz.

GRÁFICA DE LA EVOLUCIÓN DE LA Tª EN EL INTERIOR DE LA CÁMARA B A: tiempo de penetración B: tiempo de calefacción C: tiempo de seguridad D: tiempo de enfriamiento Temperatura del producto Temperatura de la cámara

Q seco Q húmedo Con Q húmedo, menos Tª. Log. TIEMPO DE MUERTE TÉRMICA 4---- 3---- 2---- 1---- Q seco Q húmedo Con Q húmedo, menos Tª. 100º 140º temperatura 300º

MÉTODOS NO TÉRMICOS FILTRACIÓN: para líquidos y gases. No destruyen, sólo separan. RADIACIONES: - Rayos UV: actúan sobre la Timina. - Rayos X ionizan el protoplasma - Rayos gamma SEDIMENTACIÓN: en plantas potabilizadoras de agua.

Filtros: de VERKELFELD: tierra de diatomeas de CHAMBERLAND: porcelana porosa de FLUJO LAMINAR: campanas de SEITZ: discos de amianto de MEMBRANA: de esteres de celulosa ULTRAFILTROS: membrana coloidal

RAMPA DE FILTRACIÓN

FILTROS DE MEMBRANA

INDICADORES DE ESTERILIZACIÓN FÍSICA MÉTODOS TÉRMICOS: Del proceso de esterilización: 1.- Químicos: Tiras reactivas. Tubos de Brown Otros: anhídrido succínico , acetanilina. 2.- Biológicos: tubos con esporas. Bacillus stearothermophillus. Del producto esterilizado: cultivar muestras. DE FILTRACIÓN

TIRAS REACTIVAS

MÉTODOS QUÍMICOS Se utilizan para la desinfección. Se basan en la acción de ciertas sustancias químicas sobre los microbios. A.- Germicidas B.- Bactericidas C.- Viricidas D.- Fungicidas E.- Amebicidas.

Los desinfectantes: caracteísticas. Poder germicida No tóxicos Alto poder de penetración Económicos Inertes al material a tratar Estables y homogéneos en su composición

Los desinfectantes: actuación Oxidación de la célula Hidrólisis Coagulación de proteinas Alteración de la permeabilidad de la membrana Inactivación de los enzimas Lisis de las células En su acción influye la concentración y el modo de aplicación.

DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS Clorofenoles Compuestos clorados Ácido fénico Detergentes catiónicos ANTISÉPTICOS Alcoholes Mercurio cromo Derivados yodados

ESTERILIZANTES Óxido de etileno: gas. Mezclado con CO2, a 40ºC, 5h. Instalaciones Glutaraldehído activado: líquido. Diluido, durante 3 horas. Material quirúrgico Vapores de formol: desde 17º hasta 50ºC, de 48 a 2 h

OTROS AGENTES MICROBIOSTÁTICOS Presión osmótica Frío Ondas sonoras Humedad pH

TRABAJO EN AMBIENTE ESTÉRIL Mechero Cámara de flujo laminar Esterilizantes: a.- óxido de etileno: con CO2. A 40º, 6h b.-Glutaraldehido: diluido. 12 h. c.- Vapores de formol: 17º 48h, 50º 2h

APLICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DESCONTAMINACIÓN PREPARACIÓN DEL MATERIAL PARA LA ESTERILIZACIÓN TRATAMIENTO DEL MATERIAL UNA VEZ USADO MANIPULACIÓN DEL MATERIAL Y LAS MUESTRAS DE MICROBIOLOGÍA

PREPARACIÓN DEL MATERIAL PARA SU ESTERILIZACIÓN Limpiar el material Envolver (así se mantendrá estéril) Papel de aluminio , poroso no inflamable (hornos) poroso para vapor para óxido de etileno. Cajas metálicas Elección de método de esterilización.

¿Cómo se prepara el material? Pipetas: algodón en boquilla. Horno. Envueltas. Placas de petri de vidrio: envolver, separando la tapa de la base y marcarlas. Tubos: tapar las bocas (algodón, tapones) Material irregular: envolver. Material de cirugía: en cajas metálicas.

Autoclave Tapa Válvula de seguridad Llave de purga: tres posiciones: - vapor: para vapor fluente - cerrada: uso normal - desagüe: para vaciado Selector de presión Manómetro Temporizador Tubo de purga de desagüe

AUTOCLAVE Funcionamiento: comprobaciones Material: vidrio, metal no oxidable, porcelana, goma, tela, medios de cultivo. Ventajas: barato, no tóxico, útil para gran cantidad de materiales. Desventajas: no seca, deteriora el material, menos poder de penetración. Duración: tres meses

HORNOS DE CALOR SECO 160º a 180º Material: vidrio, porcelana, metal. Seco Nunca para líquidos ni material inflamable. Ventajas: barato, fácil manejo, mayor poder de penetración. Desventajas: estropea el material, lento Duración de la esterilización: tres meses.

TRATAMIENTO DEL MATERIAL USADO Todo material que haya estado en contacto con los microorganismos debe esterilizarse en el autoclave. Después se sigue su tratamiento habitual: Vidrio: quitar tapones y otros ajustes. Lavar, aclarar, agua destilada, secar. Si han tenido vaselina o parafinar lavar aparte. Pipetas: recipientes con desinfectantes. Muy útiles en ocasiones las desechables. Material desechable: tras el autoclave, basura.

MANIPULACIÓN DE MUESTRAS Y MATERIAL Material estéril Manipulación en cabina o alrededor del mechero (10 -15 cm de radio) Todo el material cerca Rapidez al trabajar

MATERIAL Asas: flamear Pipetas: siempre de seguridad o automáticas. Flamear si son de vidrio. Nunca en posición horizontal. Recipientes de vidrio (tapados): abrir, flamear, coger muestra, flamear, cerrar. Placas: manipular semiabiertas y cerca de la llama. Si hay que abrirla totalmente, la tapa en la mesa, boca abajo.

Muestras líquidas: asas o pipetas estériles. Recordar como se toma la muestra del tubo. Muestras sólidas: con asa. Coger del extremo de la colonia. Precaución al abrir el tubo o la placa.