Características de la Familia ENTEROBACTERIACEAE Bacilos gramnegativos Fermentadores de la Glucosa NO presentan actividad de Citocromo Oxidasa Reductores del Nitrato

ENSAYO DE REDUCCIÒN DE NITRATO Turbio (con desarrollo) A = Ácido Sulfanílico B = a-Naftilamida Rvo de Griess A y B Agregamos Cinc Rvo de Griess A y B Caldo NO3- Reacción Negativo (-) Ensayo Incierto (?) NO2- Reacción Positiva (+) Ensayo Positivo (+) Reacción Negativa (-) Ensayo Positivo (+) Reacción Positivo (+) Ensayo Negativo (-) (Presuntiva enterobacteria) (Presuntiva enterobacteria)

ENSAYO DE REDUCCIÒN DE NITRATO ¿Cómo se interpreta? El caldo tiene Nitrato, el cuál será utilizado por las enterobacterias que desarrollen el. Si estas reducen el Nitrato a Nitrito, el Reactivo de Griess que se agregue virará a un color rojizo. Si no vemos viraje puede deberse a dos motivos: 1) La bacteria que desarrolló en el medio no es reductora del Nitrato 2) Es reductora del Nitrato, pero lo redujo a N2 gaseoso y este no reacciona con el Rvo de Griess. En este último caso, agregamos al tubo granallas de Zn metálico, el cuál reducirá Nitrato en el caso de encontrarse presente y nos dará un color rojo el cual indica que la bacteria NO era reductora. En cambio, de no virar el color la prueba se interpreta como positiva, concluyendo que el Nitrato original SI fue reducido, pero en este caso a N2 gaseoso

OXIDASA Esta prueba pone de manifiesto la presencia de esta enzima. Las enterobacterias carecen de la misma, por lo que el ensayo debería dar negativo. Esta es una prueba característicamente positiva de Bacilos gramnegativos No Fermentadores de Glucosa (BNNF). En un tubo de ensayo se coloca un mililitro de solución fisiológica estéril y se resuspende una colonia de la bacteria a estudiar. NO utilizar nunca una colonia coloreada, como las provenientes de Agar Levine, XLD, Mc Conkey, VRBGA, etc., ya que puede obtenerse un resultado falso positivo. Se agrega un disco de OXIDASA y si al cabo de 2 minutos este se torna fucsia o rosado el resultado es positivo OX OX (-) (+) (Resultado esperado en una enterobacteria)

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) Composición: Extracto de Levadura 0.3% (% = grams/100 mL) Extracto de Carne 0.3% Peptona 1.5% Proteosa de peptona 0.5% Total Proteinas = 2.6% Lactosa 1.0% Sacarosa 1.0% Glucosa 0.1% Carbohidratos = 2.1% Observar que hay 10 veces menos de Glucosa que de los otros azúcares

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) Composición: El tiosulfato funciona como fuente de azufre para ciertas bacterias, y estas producen SH2 (g), el cual en presencia de iones férricos forman un precipitado negro, pero sólo en condiciones ácidas. Citrato Amónico Férrico Tiosulfato de Sodio Cloruro de Sodio Agar (1.2%) Rojo Fenol pH = 7.4 El Rojo Fenol vira a amarillo en medio ácido y a un rojo borravino en condiciones alcalinas.

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) POSIBLES RESULTADOS TSI sin cambios Puede deberse a una incorrecta siembra o desarrollo de cocos positivos. Recordar no sembrar hasta el fondo para no partir el agar, y estriar al salir con el ansa recta.

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) POSIBLES RESULTADOS TSI A/A (Ácido / Ácido)  (Recordar que se informa Pico / Fondo) El medio vira del rojo al amarillo por la fermentación, no solo de la glucosa (fondo del tubo, en anaerobiosis) sino por la utilización de la lactosa (pico de flauta amarillo)

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) POSIBLES RESULTADOS TSI K/A (Alcalino / Ácido)  (Recordar que se informa Pico / Fondo) El medio vira del rojo al amarillo por la fermentación de la glucosa (fondo del tubo, en anaerobiosis), pero si la bacteria fue incapaz de utilizar la lactosa, comienza a utilizar las proteínas como fuente de carbono, lo cual solo ocurre en condiciones aeróbicas (pico de flauta rojo borravino)

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) POSIBLES RESULTADOS TSI K/K (Alcalino / Alcalino)  (Recordar que se informa Pico / Fondo) En este caso la bacteria fue incapaz de fermentar la glucosa (no se trata de una enterobacteria entonces), por eso el fondo no se acidifica, y utiliza las proteínas como única fuente de carbono, lo cual alcaliniza el medio. Esta coloración suele alcanzar el fondo del tubo solo por difusión de los metabolitos y no por alcalinización en anaerobiosis.

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) POSIBLES RESULTADOS TSI A/A – SH2 (Ácido / Ácido con producción de sulfhídrico) El medio describe el comportamiento metabólico de una bacteria fermentadora de la glucosa y de la lactosa y además productora de SH2, el cuál se evidencia por el color negro del fondo. Este color puede llegar a enmascarar completamente el color amarillo del fondo del tubo, pero debe interpretarse como fondo ácido, ya que es la única condición en la que se forma este gas.

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) POSIBLES RESULTADOS TSI K/A – SH2 (Alcalino / Ácido con producción de sulfhídrico) En este caso se trata de una bacteria fermentadora de la glucosa pero no de la lactosa, que además produce SH2, el cuál se evidencia por el color negro del fondo.

(Agar Hierro Triple Azúcar) TSI TRIPLE SUGAR IRON (Agar Hierro Triple Azúcar) POSIBLES RESULTADOS TSI A/A – Gas (Ácido / Ácido con producción gas) En este caso se ve la ruptura del agar, o el desplazamiento del mismo por el tubo de ensayo, debido a la masiva producción de gases. Este fenómeno se puede dar en cualquiera de las combinaciones de acidez alcalinidad anteriores.

Control, Sin inocular A/A gas K/A (se desestima ese precipitado negro que se ve sobre el pico de flauta) K/A SH2 A/A SH2 K/A Notar el cambio de color o intensidad del rojo cuando se alcaliniza el medio Notar la formación parcial o total de SH2 en el fondo del tubo Notar la formación de gas, el cual desplaza o rompe el medio de la Prueba Bioquímica