UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CUENCA Pruebas diagnosticas de cocos Gram positivos y Gram negativos Integrantes: Stefany Morales Karen Montalván.

Presentación del tema: "UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CUENCA Pruebas diagnosticas de cocos Gram positivos y Gram negativos Integrantes: Stefany Morales Karen Montalván."— Transcripción de la presentación:

1 UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CUENCA Pruebas diagnosticas de cocos Gram positivos y Gram negativos Integrantes: Stefany Morales Karen Montalván

2 Colonias de Staphylococcus colonias en agar sangre: Medianas Redondas, Lisas brillantes Miden de 1 a 3 mm en 24 h

3 S.Aureus S.epidermidis Colonias grises a dorada - colonias grises a blancas

4 Prueba de la catalasa determinar la enzima de la catalasa descompone el peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno. Procedimiento 1.Con el asa de siembra, recoger el centro de una colonia pura (18 a 24 horas) y colocarla sobre un portaobjetos limpio. 2. Agregar una gota H2O2 al 3%. 3.Observar la efervescencia –Control positivo: S. aureus. –Control negativo: Streptococcusspp

5 Prueba de la coagulasa Coagulasa enzima producida por S.Aures Procedimiento 1.- en un tubo de ensayo de vidrio esterilizado. 2.- agregar 0.5 ml de un cultivo en caldo puro de 8 a 24 h, recoger con el asa una buena colonia para de na placa de agar. 3.-hacer girar el tubo suavemente para lograr la suspensión del organismo( no agitar) 4.-Incubar la mezcla a 35–37 °C (en baño maría de preferencia)por 4 horas; observar si hay formación de coágulo inclinando lentamente el tubo.

6 Sensibilidad a la Novobiocina Se basa en la resistencia que presentan algunas especies del género Staphylococcus a la novobiocina. Procedimiento: Se siembra mediante agotamiento de estrias en placa de agar sangre. En la zona donde se ha realizado la primera descarga se coloca el disco de novobiocina, se deja incubar 24h a 37ºC Resultado: El microorganismo presenta resistencia a la novobiocina ya que no hay halo de inhibición.

7 DNAsa Estudia la capacidad que tienen algunas bacterias para producir la enzima DNAsa, que produce la degradación del DNA que contiene el medio de cultivo. Procedimiento: En la placa se siembra la muestra haciendo una estría de unos 2cm, se incuba 24h a 37ºC y se hace la lectura añadiendo HCl Resultado: En mi caso no aparece aclaramiento alrededor de la estría por lo que la prueba es negativa.

8 PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE COCOS GRAM NEGATIVOS

9 OXIDASA Se basa en la capacidad que tienen algunos microorganismos, aerobios o anaerobios facultativos, de producir una enzima “citocromo oxidasa”, que cataliza, en la cadena respiratoria, la transferencia de electrones desde el sustrato orgánico hasta el oxígeno.

10 OXIDASA Procedimiento: Colocar un trozo de papel de filtro en un porta. Agregar 2-3 gotas de Reactivo de Kovacs en el centro del papel de filtro. Coger una colonia con el asa de platino y extender sobre el reactivo puesto anteriormente sobre el papel de filtro.

11 OXIDASA Obtención de resultados: La prueba da positivo al aparecer de inmediato un color violeta en la zona del papel de filtro donde estamos depositando la muestra (NEISSERIAS)

12 FERMENTACIÓN DE AZÚCARES Las bacterias aerobias y anaerobias facultativas fermentan los carbohidratos produciendo ácidos orgánicos y gas los cuales pueden detectarse mediante un indicador de PH y un tubo de ensayo. Detectar si la bacteria fermenta la carbohidratos y si produce gases. En este caso ambas muestras han virado de color a amarillo por lo que se considera fermentador de carbohidratos, en cambio en cuanto a la producción de gases observamos como en el tubo de la izquierda se ha producido producción de gases y en el de la derecha no.

13 FERMENTACIÓN DE AZÚCARES Procedimiento: Preparación de caldo de azúcares y nitrato: se prepara mezclando 300mL de Agua destilada y 4,5 gramos de glucosa y repartir en tubos. Inocular una colonia en el medio líquido (medio base para caldo rojo fenol) que contenga peptonas, un indicador de pH y una fuente de Ca fermentable. Se coloca dentro el tubo de ensayo Se incuba 24h a 37ºC

14 BETA GALACTOSIDASA (ONPG) El sustrato artificial ortonitrofenil galactósido al ser hidrolizado por la B-galactosidasa origina un compuesto de color amarillo. Determinar la capacidad que presentan algunas bacterias, que poseen la enzima beta galactosidasa, para fermentar la lactosa originando glucosa y galactosa. Es útil para diferenciar a Nisseria lactámica de otras especies de Nisseria. También permite diferenciar a enterobacterias como E.coli, Klebsiella, Aerobacter y Enterobacter, que dan positiva en la prueba resultado fue positivo

15 BETA GALACTOSIDASA (ONPG) Procedimiento: Con pinzas estériles, se deposita un disco en un tubo de ensayo con 1mL de NaCl esteril. Con asa se inocula una colonia y se incuba 24h a 37ºC