EXPERIMENTO 1.OBTENCION Y ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA SACARASA

Presentación del tema: "EXPERIMENTO 1.OBTENCION Y ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA SACARASA"— Transcripción de la presentación:

1 EXPERIMENTO 1.OBTENCION Y ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA SACARASA
La sacarasa es una enzima que convierte la sacarosa (azúcar común) en glucosa y fructosa. Está presente en intestino delgado, en el borde de cepillo de las vellosidades intestinales: DISACARIDO: SACAROSA compuesto por glucosa más fructosa. ENZIMA: LEVADURA GRANULADA, hidroliza ( corta) el enlace glucosídico para dar : PRUEBA QUE RECONOZCA ESTOS AZUCARES: FEHLING. fructuosa

2 EXPERIMENTO 1.OBTENCION Y ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA SACARASA
PRUEBA DE FEHLING Solución de Fehling A + Solución Feling B + 5 ml de agua destilada + agitación+ solución problema Ebullición interna 10 minutos Si la enzima sacarasa esta activa y ha degradado los enlace de la sacarosa se produce glucosa y frutuosa. En el tubo de ensayo da la siguiente coloración( prueba positiva), que indica que en la muestra hay azúcares del tipo glucosa y fructosa.

3 EXPERIMENTO 2. DETERMINACIÓN Y ESTABILIDAD DE LA ENZIMA ALFA- AMILASA
Mediante esta experiencia, vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina, presente en la saliva. Esta enzima actúa sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace glucosídico alfa (1,4), por lo que el almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa . 1 4 Enlace alfa- 1,4: 1 por el carbono en posición 1 de la glucosa y 4 por el carbono en la posición 4 de otra glucosa.

4 EXPERIMENTO 2. DETERMINACIÓN Y ESTABILIDAD DE LA ENZIMA ALFA- AMILASA
El almidón químicamente esta compuesto por: amilosa Molécula de amilosa lineal: esta formada por moléculas de glucosa por enlaces llamados alfa (1-4) ENZIMA: alfa-amilasa presente en la saliva, hidroliza los enlaces para dar moléculas de maltosa, que a la vez son hidrolizadas a moléculas de glucosa libres: amilopectina prueba que reconozca la liberación de la glucosa y maltosa del almidón: Fehling. Si hay hidrólisis del almidón la prueba de color es café. Si no hay hidrólisis del almidón, la prueba de lugol es azul oscuro . Molécula de amilopectina ramificada : esta formada por moléculas de glucosa por enlaces llamados alfa (1-4)

5 EXPERIMENTO 2. DETERMINACIÓN Y ESTABILIDAD DE LA ENZIMA ALFA- AMILASA
Dentro del grano de almidón, la amilosa esta en forma de espiral. El lugol es una solución de yodo metálico y yoduro de potasio que sirve para identificar polisacáridos. Cuando se agrega una sustancia que lleva almidón a una solución de yodo (lugol), esta se tieñe de un color azul intenso. Esto es debido a que los átomos de yodo se introducen en las espirales (amilosa), dándoles esa coloración. Cuando la amilosa se degrada por medios químicos o enzimáticos, la espiral desaparece y los átomos de yodo no tiene con quien reaccionar para dar la coloración azul intenso.

6 EXPERIMENTO 2. DETERMINACIÓN Y ESTABILIDAD DE LA ENZIMA ALFA- AMILASA
Prueba de lugol: La amilosa es la fracción del almidón que da una coloración azul intensa al reaccionar con el yodo presente en el reactivo de lugol. La hidrólisis de la amilosa origina moléculas de maltosa y moléculas de α-glucosas que dan una coloración rojiza parda con el lugol. Prueba positiva para lugol: el almidón no ha sido hidrolizada por la enzima amilasa Prueba negativa para lugol: el almidón ha sido hidrolizada por la enzima amilasa Prueba de Fehling

7 EXPERIMENTO 2. DETERMINACIÓN Y ESTABILIDAD DE LA ENZIMA ALFA- AMILASA
La prueba de lugol dependerá de las condiciones a que se someta la enzima: La actividad de la enzima (alfa-amilasa) cambiara cuando se someta: cambios de temperatura Cambios de pH Por lo tanto cuando se mezcle con el almidón, está no hidrolizara los enlaces glucosídicos del almidón y la prueba de lugol será azul. La actividad de la enzima dependerá de: Variar la cantidad de enzima y dejar constante el sustrato. Si la cantidad es mínima y no es la adecuada de igual forma la del sustrato, cuando se mezcle con el almidón, está no hidrolizara los enlaces glucosídicos del almidón y la prueba de lugol será azul.