Elizabeth Jannin rivera Pérez Pedro salgado fitz

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1 Elizabeth Jannin rivera Pérez Pedro salgado fitz
northern Blot Elizabeth Jannin rivera Pérez Pedro salgado fitz

2 Es una tecnica de detección de moleculas de acido ribonucleico ARN PROCEDIMIENTO El procedimiento general comienza  Los sistemas de capilaridad iónica se con la extracción del RNA total de utilizan para transferir el ARN desde una muestra de tejido un gel de electroforesis a una homogenizado. membrana de Northern blot.  Después del marcaje de la sonda, Las muestras de ARN son entonces ésta se hibrida con el RNA en la separadas por electroforesis en gel. membrana. Dada la fragilidad de los geles y la  Finalmente, la membrana debe de incapacidad de las sondas para lavarse para asegurar que la sonda se penetrar en la matriz, las muestras de ha unido de forma específica y para RNA, separadas por tamaño tras la evitar ruido de fondo en las señales electroforesis, serán transferidas a emitidas por la misma. una membrana de Nailon por medio de capilaridad o un sistema de transferencia al vacío.

3 APLICACIONES El northern Blot permite observar un patrón particular de expresión Los patrones de expresión obtenidos genética entre tejidos, órganos, nos ayudan a conocer las funciones estadios del desarrollo, niveles de los genes. Desde que el RNA se estrés ambiental, infecciones separó por su tamaño, las sondas causadas por patógenos y durante el contra el mismo pueden darnos una curso del tratamiento de las mismas. idea de su tamaño, sugerir ayuste alternativo, o motivos repetidos en la secuencia. La variación en el tamaño delEsta técnica se ha utilizado para producto de un gen puede además mostrar la sobreexpresión de indicarnos delecciones o errores en el oncogenes y la desregulación de proceso de transcripción. genes supresores tumorales en células cancerosas cuando son  Alterando la sonda podemos conocer comparadas con tejidos normales. la secuencia e incluso determinar que región del RNA ha sido deleccionada.

4 La técnica de Northern Blot fue desarrollada por Alwine y colaboradores, en 1977, y es análoga al Southern Blot. Permite determinar la cantidad y tamaño de ARNs específicos presentes en preparaciones de ARN total, mensajero, o ribosómico.  El método se basa en la hibridación de secuencias complementarias de ácidos nucleicos de cadena simple. Permite estudiar la expresión de secuencias específicas de ADN, y posteriormente correlacionarla con las características morfológicas y fisiológicas de la planta. De este modo, se emplea frecuentemente en estudios de expresión génica, en los cuales se pueden detectar los genes transcriptos en los diferentes tejidos (expresión espacial) y/o en las diferentes etapas del desarrollo (expresión temporal). También es empleada para monitorear la expresión génica del ADN exógeno en plantas transgénicas. 

5 En esta técnica se aísla el ARN total, luego se separan los diferentes tipos de ARN por medio de una electroforesis en gel, el ARN separado es transferido desde el gel, hacia un soporte sólido (membrana), y luego hibridado con una sonda específica de ADN ó ARN, marcada mediante radiactividad ó por métodos no radiactivos. Se produce un híbrido ADN:ARN, dado que son moléculas complementarias y allí donde esta el RNAm complementario a la secuencia del gen foráneo, se detectará la señal en el papel fotográfico sensible a la radiación. En las muestras derivadas de la planta control no debe presentarse la señal de hibridación. cin__12_la_tcnica_de_northern_blot.html

6 Northern blot una técnica de laboratorio que se utiliza para identificar y localizar las secuencias de ARNm que son complementarias a un fragmento de ADN o ARN llamado sonda.Northern blot o análisis Northern es básicamente una prueba para detectar la presencia del ARNmensajero en un tejido en particular y la cual permite también determinar el tamaño de la trascripciónde ese ARN mensajero. El procedimiento se hace transfiriendo todo el ARN mensajero de un tipo determinado de tejido desde un gel a una membrana de nylon o nitrocelulosa. La presencia de un ARN en particular se detecta hibridizando esta membrana con una sonda de ácido nucleico, generalmente de cADN o rARN del gen de interés

7 Northertn Blot: Es similar a la técnica anterior, pero permite detectar RNA en vez de DNA (Innis yGelfand, 1990). En síntesis la técnica consiste en extraer el RNA de las células pertinentes y suposterior separación por tamaño mediante electroforesis en gel. Las moléculas de RNA sontransferidas y unidas al filtro, al igual que en el Southern blot. Después de la hibridación con unasonda marcada (y posterior a la detección según el método de marcaje utilizado), las bandas en elgel indican la ubicación de los tipos de RNA que sean complementarios a la sonda. Teniendomarcadores de RNA de tamaño adecuado, se puede conocer el tamaño de los RNA que se hanidentificado. Así, la técnica permite conocer el tamaño preciso de un mRNA, luego del empalmetranscripcional. Además, sirve para identificar diferentes tipos de mRNA codificados por un mismogen y para determinar la cantidad y el tejido específico (o tipo de células) en que se encuentra unmRNA específico. Así, será posible determinar los niveles de actividad génica, por ejemplodurante el desarrollo, o bien en distintos tejidos (o tipos celulares) durante un período definido dela vida, o después de haber sido sometido a los organismos a diferentes estímulos fisiológicos(Russel, 1998).

8 El Northern Blot es una técnica muy similar al Southern Blot que permite la identificación desecuencias específicas de RNA. La muestra de RNA a analizar no requiere fragmentación y se somete a electroforesis en geles deagarosa, donde las moléculas de RNA se separan desde mayor a menor tamaño.Una vez terminada la electroforesis, y sin teñir el gel, los fragmentos se traspasan a un filtro denitrocelulosa ó a una membrana nylon, luego el filtro se incuba con una sonda marcada, específicapara la secuencia que se desea identificar.Esta sonda es una secuencia de ácido nucleico, por ejemplo cDNA, que reconocerá a la secuencia deRNA inmovilizada en el filtro, a través del reconocimiento de secuencias complementarias de ácidosnucleicos.