Enzimas de restricción tipo II

Presentación del tema: "Enzimas de restricción tipo II"— Transcripción de la presentación:

1 Enzimas de restricción tipo II
Las enzimas de restricción son generadas naturalmente por muchas especies bacterianas Protegen a las bacterias de invasión de DNA extraño, especialmente por bacteriofagos. Muchos cientos de enzimas están disponibles comercialmente. Enzimas de restricción tipo II

2 Estas enzimas se unen a secuencias específicas
Estas son típicamente palindrómicas Por ejemplo , el reconocimiento de EcoRI es 5’ GAATTC 3’ 3’ CTTAAG 5’ Algunas enzimas digieren el DNA en “fragmentos pegajosos” Otras generan extremos romos.

3 Figure 19-2 Some common restriction enzymes, with their recognition sequences, cleavage patterns, and sources.

4 DNA Recombinante Add DNA ligase which covalently links the DNA backbones

5 Pasos para la clonación de un Gen 1. seleccionar el vector
Figure 19-6 A diagram of the plasmid pUC18 showing the polylinker region, located within a lacZ gene. DNA inserted into the polylinker region disrupts the lacZ gene, resulting in white colonies that allow direct identification of bacterial colonies carrying cloned DNA inserts.

6 2. Digerir el vector y el DNA blanco con la misma
enzima de restricción DNA recombinante

7 Transformación Bacteriana.
3. Transformar células bacterianas Transformación Bacteriana. Células competentes

8 DNA copia (cDNA) Cola de poli A

9 Electroforesis en gel La electroforesis de ácidos nucleicos separa a los fragmentos de acuerdo a su tamaño. Fragmentos pequeños migran más rápido que fragmentos grandes.

10 Figure Electrophoretic separation of a mixture of DNA fragments that vary in length. The photograph shows an agarose gel with DNA bands corresponding to the diagram.

11 Hibridación y reconocimiento de secuencias con alta homología

12 Marcaje de un fragmento de ADN

13 Southern y Northern blot

14 Western blot

15 Bibliotecas genómicas

16 Bibliotecas de cDNA

17 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

18 La amplificación es exponencial

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20 Usos del PCR

21 Para poder amplificar este segmento de ADN, diseñar los primers o cebadores
que son necesarios para la amplificación

22 Secuenciación del DNA

23 Microarreglos

24 Proteómica

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