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APLICACIONES CLÍNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS Mª Jesús Maza Castillo Residente 1º Análisis Clínicos Hospital Universitario de Guadalajara 25 Abril.

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1 APLICACIONES CLÍNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS Mª Jesús Maza Castillo Residente 1º Análisis Clínicos Hospital Universitario de Guadalajara 25 Abril 2007

2 - 1.Detección de Helicobacter pylori - 2.Evaluación de la función pancreática exocrina

3 DETECCIÓN DE Helicobacter pylori 1.¿QUÉ ES? -Bacilo gram negativo que se encuentra en la mucosa gástrica asociado a distintas enfermedades digestivas

4 -Catalasa y oxidasa positivo -Vive en mucosa gástrica antral -Libre en mucus, en la superfície de las células epiteliales o en el intersticio celular -NO es invasivo -NO se ha aislado en hemocultivos -MÓVIL -FORMA ESPIRAL -UREASA POSITIVA CARACTERISTICAS

5 2. HISTORIA Robin Warren y Barry Marshall – Demuestran que la principal causa de la úlcera péptica y gástrica es Helicobacter pylori La bacteria que destronó al estrés Premio Nobel. La bacteria que destronó al estrés

6 3. EL POR QUÉ SE SU IMPORTANCIA TRATAMIENTO Las infecciones por H.pylori afectan aproximadamente a la mitad de la población mundial DOS RAZONES PATOLOGÍA

7 Helicobacter pylori Infiltrado inflamatorio Gastritis atrófica autoinmune (tipo A) Gastritis atrófica multifocal (tipo B) MALT PMN prominentes Linfoma Gastritis central difusa Ulcera duodenal Gastritis central superficial Cáncer difuso Cáncer intestinal Úlcera gástrica Vasculares Autoinmune Dermatológicas Encefalopatias Diabaetes mellitus Extradigestivas RR=3.8

8 MECANISMOS POR LOS CUALES H. Pylori LESIONA LA MUCOSA GÁSTRICA Sustancias externas Lipopolisacárido Ureasa Induce apoptosis Endotoxina Actividad citotóxica Urea+ H 2 O CO 2 + 2NH 4 + Daña la microcirculación

9 4. DIAGNÓSTICO INVASIVOS NO INVASIVOS DIRECTOS INDIRECTOS -CULTIVO -HISTOLOGÍA -TÉC.MOLECULARES (PCR) -TÉC.MOLECULARES.( Jugo pancreático, saliva o heces) -ANTÍGENO EN HECES -UREASA RÁPIDA -PRUEBA DEL ALIENTO (con urea *C13) -SEROLOGÍA

10 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD S(%) E(%) UREASA RÁPIDA HISTOLOGÍA CULTIVO TEST DE ALIENTO SEROLOGÍA- ELISA ANTÍGENOS EN HECES

11 PRUEBA DEL ALIENTO. DETERMINACIÓN DE 13 CO2 EN EL ALIENTO Prueba estándar entre las pruebas diagnósticas no invasivas de infección por Helicobacter pylori

12 Test de la urea marcada Test de la urea marcada O NH 2 UREASA *CO 2 + 2NH 4 + O NH 2 UREASA *C

13 1.PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACIÓN DEL TEST Sobre de ácido cítrico Comprimido de urea (*C) Tubos de recogida de muestra 2 tapones verde (basal) 2 tapones blanco (post)

14 200ml AGUA + AC.CÍTRICO 10 MIN 2.Muestra Posterior 125 ml AGUA + UREA (Comprimido) 1.Muestra Basal 30 MIN + 2 tubos

15 2.ANÁLISIS DE LA MUESTRA -Los valores corresponden a la relacción 13 CO 2 /CO 2 en el aire espirado y el resultado se expresa como enriquecimiento isotópico ( 13 CO 2 /CO 2 )m - ( 13 CO 2 /CO 2 )c ( 13 CO 2 /CO 2 )c = x 1000 o / oo 1. δ Basal o / oo 2. δ Post o / oo o0 / oo Post Basal o / oo

16 RESULTADOS Paciente 1 o / oo < 5 Negativo Si o / oo > 5 Positivo Si 1. Basal Post < 5 o / oo Negativo Paciente Basal Post > 5 Positivo

17 Falsos negativos -Realización de la prueba antes de 4 semanas de finalizar el tratamiento erradicador Tratamiento con inhibidores de la bomba de protones o sales de Bismuto en el momento de la prueba o dias previos Vaciamiento gátrico rápido Realización de la prueba en las 4 h después de la endoscopia Falsos positivos Producción de ureasa por otros bacterias en pacientes aclohídricos.(gastritis crónica atrófica) Recoger las muestras antes de tiempo. Recoger las muestras demasiado tarde. Elevación por la acción hidrolítica sobre la urea de la flora bacteriana.

18 Fisiología del páncreas Digestión de carbohidratros, proteínas, lípidos conversión en moléculas absorbibles EVALUACIÓN DE LA FUNCIÓN PANCREÁTICA EXOCRINA PÁNCREAS 1. Endocrino 2. Exocrino - Porción enzimática - Porción acuosa

19 Pancreatitis crónica - Proceso inflamatorio progresivo e irreversible caracterizado por la fibrosis de la glándula con destrucción del parénquima exocrino en la primera fase y en una segunda fase del parénquima endocrino -Malabsorsión por afectación del páncreas exocrino, (esteatorrea, creatorrea), y en fases avanzadas, diabetes mellitus

20 1.Clasificación: ( Marseille –Rome) 1. Pancreatitis Crónica calcificante 2. Pancreatitis crónica obstructiva Obstrucción del conducto pancreático principal 3.Pancreatits inflamatoria Fibrosis densa e infiltrado inflamatorio mononuclear Alcohol

21 3. Sintomatología: 1.Dolor crónico (80%): 1.Dolor crónico (80%): Dolor continuo abdominal de intensidad moderada. 2.Diarrea y pérdida de peso 2.Diarrea y pérdida de peso: Inadecuada digestión de los alimentos y la imposibilidad del organismo para asimilarlos. Desnutricion progresiva

22 4. Diagnóstico: -Pruebas de imagen: Radriografía, Ecografía, Ultrasonidos,... -Pruebas de función pancreática exocrina. -Métodos con intubación duodenal: Jugo pancreático -Métodos sin intubación duodenal: - Niveles de enzimas en suero - CUANTIFICACIÓN DE LA GRASA FECAL(VAN DE KAMER) ( S y E) - Cuantificación de quimiotripsina fecal - Cuantificación de elastasa fecal - Prueba del pancreolauril - Prueba de bentiromina - TEST DE TRIGLICÉRIDOS MIXTOS.TEST DE ALIENTO

23 APLICACIONES CLÍNICAS -Detectar decrementos en la actividad de la lipasa intraduodenal. -Seguimiento de la evolución de la enfermedad pancreática ( este test es más sensible que el estudio de esteatorrea, ya que esta no se produce hasta que la producción de lipasa es menor del 10%. -Monitorización del efecto del tratamiento

24 Fundamento: Se basa en marcar con 13 C distintos sustratos que requieren la participación de enzimas pancreáticas para su escisión y absorción. Los niveles de 13 CO 2 en aire espirado nos permitirán valorar la actividad enzimática del páncreas.

25 REPRESENTACIÓN DEL TEST DE ALIENTO CON TG MIXTOS MARCADOS GLICEROLGLICEROL C 20 1,3 diesteraril-2-13C-carboxil-octanoil glicerol 13 C 8 C 20 Lipasa pancreática GLICEROLGLICEROL C C 8 C 20 Absorción intestinal 13 C 8 + GLICEROLGLICEROL Oxidación hepática 13 CO 2 Respiración

26 COMIDA DE PRUEBA ( 13 C-Triglicéridos Mixtos) Ingredientes Mantequilla (20 gramos) Biscottes (15 gramos) Agua (200 mL) Modo de preparación Untar la mantequilla en ambos biscottes Añadir los 250 mg de 13 C-Triglicéridos en la mantequilla 50 tubos: 2 basales + 48 posteriores

27 PROTOCOLO DEL TEST DEL ALIENTO mg METOCLOPRAMIDA 10 min 2 tubos BASALES 2. CADA 15 MINUTOS COMIDA DE PRUEBA: Biscotes, mantequilla, 13C-TG mixtos 48 tubos POSTERIORES DURACIÓN: 6HORAS

28 ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS o / oo = x 1000 ( 13 CO 2 /CO 2 )m - ( 13 CO 2 /CO 2 )c ( 13 CO 2 /CO 2 )c Resultados: % de 13C-recovery/h y valores acumulados durante 6 h. Se calcula utilizando un programa matemático que calcula el porcentaje de sustracto recuperado como 13 CO 2 -Los valores corresponden a la relacción 13 CO 2 /CO 2 en el aire espirado y el resultado se expresa como enriquecimiento isotópico

29 NEGATIVO

30 POSITIVO

31 TRAS TTO CON KREÓN

32 BUENA ALTERNATIVA A LAS TÉCNICAS TRADICIONALES - No invasivo -Recogida de muestra sencilla - No radioactivo (13C) PACIENTE INVESTIGADOR -Fácil conservación -Manejo -Análisis de las muestras VENTAJAS -Realización del test en mujeres fértiles, embarazadas, niños y ancianos -No instalaciones especiales: Espectrometria de masas ( 13 CO2 )

33 FALSOS POSITIVOS: Vaciamiento gástrico retrasado Daño extenso de la mucosa intestinal (celíacos, enfermedad de Crohn) Tiempo de contacto corto entre la comida de prueba y las secreciones pancreato-biliares (pacientes gastrectomizados) Diabetes y enfermedad hepática severa FALSOS NEGATIVOS: Enfermedad pancreática moderada

34 -Este test es capaz de detectar disfunción pancreática incluso en ausencia de esteatorrea, así como de diferenciar si la esteatorrea está asociada o no a enfermedad pancreática (La esteatorrea se produce si la lipasa cae por debajo de 40KU/h. )


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