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Diagnóstico de Laboratorio
Enfermedad de Chagas Diagnóstico de Laboratorio Dr. Guillermo G. Nuñez Inmunoserología y Autoinmunidad
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amastigote trypomastigote ESTADIOS EVOLUTIVOS T. cruzi epimastigote
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Ciclo heteroxénico
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Mecanismos de Infección
VECTORIAL TRANSPLACENTARIA TRANSFUSIONAL TRANSPLANTES
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ETAPA AGUDA Curso clínico Signo de Romaña Fiebre Hepato/esplenomegalia
Período de incubación: ~7 días Generalmente asintomática Primoinfección en niños de zonas endémicas Signo de Romaña Fiebre Hepato/esplenomegalia Encefalitis Forma sintomática 40-60 *Alta parasitemia
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ETAPA LATENTE *Período de 30-40 años
*Equilibrio entre la patología parasitaria y la respuesta inmune *Asintomático Inmunidad Concomitante *Baja parasitemia *Alta producción de Anticuerpos
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DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
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Infección Aguda Infección Crónica clínica clínica Infección
Intensidad de respuesta Anti-T.cruzi IgM Período incubación Anti-T.cruzi IgG parasitemia Infección 1-2 semanas semanas
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TRATAMIENTO ETIOLOGICO
Infección Aguda Infección Crónica clínica TRATAMIENTO ETIOLOGICO Anti-T.cruzi IgG parasitemia Intensidad de respuesta Transmisión vectorial Transmisión congénita Período incubación VER NOTAS Infección 1-2 semanas semanas >1 año años
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Fase aguda -Reactivaciones
METODOS PARASITÓLOGICOS Fase aguda -Reactivaciones Xenodiagnóstico Microhematocrito Hemocultivo Strout Sensibilidad 100% // PARASITOS VIVOS-MUESTRA FRESCA Xeno y HEMO amplifican CONDICIONES DE TOMA DE MUESTRA
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Tripomastigote sanguíneo –(May-Grünwald-Giemsa)
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METODOS SEROLÓGICOS Antígenos solubles de membrana y citoplasmáticos
Etapas latente y crónica – Screening bancos de sangre HAI Antígenos solubles de membrana y citoplasmáticos ELISA Antígenos recombinantes (SAPA) IFI Epimastigotes enteros MACHADO GUERREIRO –NO !!!!!!!!!! METODOS DE INTERACCION PRIMARIA Y SECUNDARIA
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Sensibilidad analítica
Hemaglutinación Indirecta (HAI) IgGAM Económico Sensibilidad analítica NO automatizable
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Sensibilidad analítica
Enzimoinmunoensayo (ELISA) IgG IgM Económico Sensibilidad analítica Automatizable Reproducible
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Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
IgG IgM Requiere microscopía de fluorescencia Sensibilidad analítica Reproducible
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Inmunoensayo quimioluminiscente (CMIA) CMIA
Antígenos recombinantes
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conjugado muestra TcF-FP3 FP6-FP10 h. H2O2 Micropartículas-Ags
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Requiere tecnología y experiencia
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Es la amplificación enzimática de un fragmento de ADN flanqueado por dos secuencias de oligonucleótidos que hibridan en la cadena complementaria de la molécula molde que se va a amplificar (cebadores o “primer”) y que son utilizados por una DNA polimerasa termoresistente para copiar la secuencia de la misma. kDNA o sDNA costosa Requiere tecnología y experiencia Sensible y específica No dependiente de Estado Inmunitario desnaturalización extensión hibridización
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PCR convencional PCR En Tiempo Real
extracción ADN total nucleótidos dATP, dGTP, dCTP, dTTP Taq DNA-polimerasa F primers R PCR convencional PCR En Tiempo Real
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Ciclado (Amplificación)
Desnaturalización Ciclado (Amplificación) 56°C Alineamiento 72°C Elongación
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Schijman et al. PLoS Negl Trop Dis. 2011 Enero; 5(1): 931
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Técnica de diagnóstico Formas clínicas de la Enfermedad de Chagas
AGUDA LATENTE-CRÓNICA CONGÉNITA GOTA FRESCA + - GOTA GRUESA ++ MICROCONCENTRACION +++ STROUT HEMOCULTIVO -/+ XENODIAGNÓSTICO PCR ++++ SEROLOGÍA (inicio) + (>20 días) IgG materna<6 meses IgM niño
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Algoritmo diagnóstico
ANTECEDENTE EPIDEMIOLOGICO -Transmisión vectorial -Transfusión sanguínea -Transmisión congénita -Trasplante de órganos INFECCION POCO PROBABLE no si SINTOMÁTICO ASINTOMÁTICO FORMA AGUDA Búsqueda de tripanosomas en sangre Métodos parasitológicos: Xenodiagnóstico-Strout-Microhematocrito Hemocultivo -PCR (-) FORMA CRONICA Búsqueda de Anticuerpos Métodos Serológicos: HAI-ELISA-IFI Acs totales-IgG-IgM (-) DIAGNOSTICO IMPROBABLE (+) dos tests (-) Xenodiagnóstico PCR Seguimiento clínico (+) DIAGNÓSTICO CONFIRMADO
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IgG >basal IgG ≤basal CONFIRMA CASO (tratamiento) NO CONFIRMA CASO
GESTANTE CHAGÁSICA RECIEN NACIDO BUSQUEDA DEL PARÁSITO -Microconcentración -PCR BUSQUEDA DE ANTICUERPOS (IgG) -ELISA -IFI (titulación del suero) CONTROL SEROLÓGICO A LOS 3, 6 y 9 meses -ELISA -IFI (titulación del suero) IgG >basal IgG ≤basal CONFIRMA CASO (tratamiento) NO CONFIRMA CASO
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El problema de Inmunorreactividad Cruzada…
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Enfermedad de Chagas Leishmaniosis
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Familia Trypanosomatidae ANTÍGENOS COMPARTIDOS
Trypanosoma cruzi (tripomastigotes) Leishmania spp (promastigotes) Familia Trypanosomatidae ANTÍGENOS COMPARTIDOS
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LABORATORIO CLÍNICA DIAGNÓSTICO DE CERTEZA
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Muchas gracias
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