OTRAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN

Presentación del tema: "OTRAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN"— Transcripción de la presentación:

1 OTRAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN
SISTEMA DE AMPLIFICACIÓN BASADO EN LA TRANSCRIPCIÓN, REACCIÓN EN CADENA DE LA LIGASA OTRAS TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN

2 SISTEMA DE AMPLIFICACIÓN BASADO EN LA TRANSCRIPCIÓN
TMA es un sistema de amplificación basado en la transcripción del ARN con dos enzimas para producir la reacción ARN polimerasa transcriptasa inversa (o reversa). TMA es isotérmica, toda la reacción se lleva a cabo a la misma temperatura en un baño de agua o bloque de calor. Esto está en contraste con otras reacciones de amplificación como la PCR o LCR que requieren un instrumento termociclador para cambiar rápidamente la temperatura para producir la reacción.

3 PROCESO DE LA AMPLIFICACIÓN MEDIADA POR LA TRANSCRIPCIÓN

4 REACCIÓN EN CADENA DE LA LIGASA
La técnica de la ligasa no está tan desarrollada y es más compleja que la de la polimerasa, además requiere mínimo 1000 fragmentos para poder amplificar, pero este mínimo es suficiente para su aplicación en el diagnóstico prenatal. La técnica se utiliza principalmente para el diagnóstico de enfermedades víricas y genéticas.

5 PROCESO DE LCR Cuatro cebadores se alinean en regiones inmediatamente adyacentes al molde. Dos de ellos se alinean con la cadena superior. El segundo par de cebadores es complementario del primero y se alinea con la cadena opuesta.

6 La hibridación entre los cebadores se evita incluyendo ADN portador y una cola 3' en cebadores opuestos. Estos cebadores se mezclan con el molde y la ligasa termoestable, y se incuban a 95 °C durante 1 minuto para la desnaturalización, y a continuación a 65 °C durante 4 minutos, para la alineación del cebador y la ligazón. Los pasos de desnaturalización y alineación/ligazón se repiten ciclos.

7 Cuatro cebadores se alinean en regiones inmediatamente adyacentes al molde.

8 Dos de ellos se alinean con la cadena superior.
El segundo par de cebadores es complementario del primero y se alinea con la cadena opuesta. La hibridación entre los cebadores se evita incluyendo ADN portador y una cola 3' en cebadores opuestos. Los pasos de desnaturalización y alineación/ligazón se repiten ciclos.

9 Estos cebadores se mezclan con el molde y la ligasa termoestable, y se incuban a 95 °C durante 1 minuto para la desnaturalización, y a continuación a 65 °C durante 4 minutos, para la alineación del cebador y la ligazón.

10 Proceso de amplificación de la reacción en cadena de la ligasa