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-Genotipado de proteínas lácteas -Sexaje de embriones APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL.

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Presentación del tema: "-Genotipado de proteínas lácteas -Sexaje de embriones APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL."— Transcripción de la presentación:

1 -Genotipado de proteínas lácteas -Sexaje de embriones APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL

2 Universidad de Zaragoza PRODUCCIÓN LÁCTEA: - Existían grandes desequilibrios en la producción. - Incapacidad de absorber los excedentes. - Necesidad de derivar la producción hacia derivados lácteos.

3 Universidad de Zaragoza - Genotipado de proteínas lácteas con influencia en producción (calidad y cantidad) láctea. - Elección del sexo en embriones antes de transferencia. -Tipado de sexo y proteínas lácteas en embriones. - Detección de hembras Free-Martin

4 CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS BB Kappa Casein Universidad de Zaragoza

5 P.C.R. CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS PROTEÍNAS DEL CUAJO - CASK - CASB -CASA1 -CASA2 PROTEÍNAS DEL LACTOSUERO - LGBB - LAA Universidad de Zaragoza

6 CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASK) Amplificación por PCR Alelo Específico (A.S.O.)

7 Universidad de Zaragoza CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2) Exón VIII Intrón VIII Intrón VII Oli 31 Oli 32 Ser Ser Glu CASA2 A TGT ACT GAG GTAAG CASA2 D TGT ACT GAT GTAAG Mnl-1

8 Universidad de Zaragoza 396 bp PCR 396 bp CASA2 A 396 bp CASA2 B Mnl-I 272 bp 124 bp Ser Ser Glu CASA2 A TGT ACT GAG GTAAG CASA2 D TGT ACT GAT GTAAG Mnl-1

9 - + DD AAAD CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2) Universidad de Zaragoza

10 CASK B /CASB B /LGB B 1. CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE PROTEÍNAS LÁCTEAS Universidad de Zaragoza

11 DETECCIÓN DE PROTEÍNAS LÁCTEAS SEXAJE DE EMBRIONES PROGRAMAS DE TRANSFERENCIA EMBRIONARIA ELECCIÓN DEL SEXO DETECCIÓN DE GENES DE INTERÉS TIPIFICACION DE EMBRIONES Universidad de Zaragoza

12 Sistema XY XX - XY - Sistema ZW ZW - ZZ - X - Sistema X: A XX -

13 Universidad de Zaragoza SELECCIÓN ARTIFICIAL DEL SEXO Sexaje de embriones antes de la implantación. - Citómetro de flujo - Cromatografía Separación de espermatozoides X e Y - Métodos No invasivos - Enzimas ligadas al cromosma X (Toxicidad) - Detección Ag HY (Falsos positivos) - Métodos invasivos: Biopsia embrionaria (basado en la diferente masa, movilidad, contenido DNA, carga y antígenos de superficie)

14 Separación de espermatozoides X e Y - Por diferencias de masa: el cromosoma Y tiene un peso menor en un 4,2% que el cromosoma X en bovino por lo que tienen distinta velocidad de sedimentación - Por diferencias de movimiento: los espermatozoides Y se mueven a mayor velocidad que los espermatozoides X - Por diferencias en el contenido de DNA mediante citometría de flujo. Se tiñe el DNA del espermatozoide con fluorocromos - Por diferencias en antígenos de superficie: se basa en la detección del Antígeno Y de histocompatibilidad. Solo lo tienen los espermatozoides Y

15 Manipulación de embriones Métodos invasivos : - obtención de una biopsia en estado de blastocisto (en bovino a los 7 días). - la cantidad de DNA obtenido a partir de una biopsia equivale a aproximadamente a 10 células (aprox. 100 pg) Análisis de cariotipo Análisis de regiones de DNA del cromosoma Y

16 XY XX

17 ZONAS DE COPIA ÚNICA ZONAS REPETIDAS + - SEXAJE DE EMBRIONES (Análisis de zonas de DNA del Cr Y) AMPLIFICADO EN Y MENOR SENSIBILIDAD SÓLO AMPLIFICADO EN MAYOR SENSIBILIDAD Universidad de Zaragoza

18 ZONAS DE COPIA ÚNICA ZONAS REPETIDAS SEXAJE DE EMBRIONES ZFX/ZFY BRY4a Universidad de Zaragoza

19 SEXAJE DE EMBRIONES ZFX ZFY ZONAS DE COPIA ÚNICA Pst-1 Universidad de Zaragoza

20 Universidad de Zaragoza Sexaje y genotipado de proteínas lácteas en el embrión

21 SEXO/CASK ABAABB AA TIPAJE DE EMBRIONES (Zona BRY 4a) SEXO/CASB AB AA Universidad de Zaragoza

22 DETECCIÓN DE ANIMALES FREE-MARTIN FREEMARTINISMO: Originado por la fusión de los coriones de dos embriones (macho y hembra) que lleva consigo un quimerismo XX/XY y afecta negativamente a las caracteristicas reproductivas de las hembras.ZFY/ZFX BRY4a/CASK Diluciones detectadas l / 20 l / 50 Universidad de Zaragoza


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