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Acinetobacter baumannii Bacilo Gram Negativo No fermentador de glucosa Principalmente nosocomial Afecta pacientes hospitalizados inmunosuprimidos.

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2 Acinetobacter baumannii Bacilo Gram Negativo No fermentador de glucosa Principalmente nosocomial Afecta pacientes hospitalizados inmunosuprimidos

3 Acinetobacter baumanini Se detectó una cepa de A. Baumannii resistente a Imipenem (IPM) y a varios otros antibióticos B- lactámicos incluido el ceftazidime (CAZ) El IPM es resistente a la hidrólisis por la mayoría de B-lactamasas excepto la carbapenemasa

4 Carbapenemasa Metalo-B-lactamasa, clase B. Hidroliza IPM y CAZ y la mayoría de A/B B- lactámicos Confiere resistencia a estos A/B a la bacteria patógena Codificada por el gen bla IMP identificado por PCR en gérmenes Gram negativos como la P. Aeruginosa y la S. marcescens

5 Materiales y Métodos Cepas Bacterianas: A. Baumannii resistente a IPM y CAZ en el Hospital Universitario de Gunna entre 1994 y Medios: agar sangre para aislamiento y purificación Antibióticos: amikacina (AMK), IPM, Aztreonan (ATM), CAZ, cefotaxime(CTX), gentamicina (GEN), Norfloxacina (NOR), Rifampicina (RIF)

6 Materiales y Métodos Pruebas de Sensibilidad Antibiótica: MICs por pruebas de dilución en agar Estudio de actividad de la B-lactamasa por espectofotometría. Prueba de PCR para la detección del gene de la carbapenemasa, bla IMP Experimento de conjugación: trasmisibilidad del gen bla IMP a una cepa no resistente TY44

7 Materiales y Métodos Electroforesis en gel de campo pulsado: Obtención del ADN en plugs de agarosa, tratados con lisozima y proteinasa K (GenePath Reagent Kit-BIO-RAD) DNA digerido con 12.5 U de endonucleasa de restricción Not I Separación de los fragmentos obtenidos en agarosa al 1% en el equipo de PFGE a 6V/cm por 19.7h con tiempos de pulso entre 5.3 y 34.9 s.

8 Resultados Se aislaron 251 cepas en los tres años de las cuales 28 fueron inicialmente resistentes a CAZ e IPM. Diecinueve perdieron sus características de resistencia después de 1 año. Nueve cepas permanecieron resistentes tanto a CAZ como IPM.

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10 Resultados Estas 9 cepas mostraron capacidad de hidrolizar el IPM (Actividad de cabapenemasa positiva) Las 9 fueron positivas para el gen bla IMP por PCR La frecuencia de tranferencia del gen por conjugación osciló entre y 10 -4

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12 Resultados Todas las cepas transconjugadas presentaron MICs para IPM mayores que la cepa receptora. En ellas también se detectó el gen bla IMP por PCR

13 Resultados Los MICs para IPM de las 9 cepas aisladas en la clínica oscilaron entre 8 y 16 mcg/mL La resistencia al IPM se acompañó de resistencia a CAZ, CTX y PIP, pero no siempre de ATM Siete fueron altamente resistentes (MICs>128mcg/mL) o medianamente resistentes (MICs>32 y 64) a AMK Nueve fueron resistentes a GEN (MICs de 8 a 16 mcg/mL) Cuatro fueron resistentes a NOR (MICs 4 a 16 mcg/mL)

14 Resultados Se observaron patrones de resistencia idénticos entre TY 11 y TY12 y entre TY 40 y 42 En todos los casos la resistencia a los antibióticos B- lactámicos, IPM, CAZ, CXT, AMP y PIP fue transferida en forma simultánea mientras que no fue transferida resistencia a ATM ni NOR. Los transconjugados obtenidos de las cepas TY 11 y TY 12 y TY 40 y TY 42 presentaron patrones de resistencia casi idénticos

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16 Resultados PFGE Se obtuvieron 5 patrones: Patrón 1: TY 11 y TY 12 Patrón 2: TY 40 y ty 42 Patrón 3: TY 8 y TY 9 Patrón 4: TY 7 y TY 10 Patrón 5: TY 15

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18 Resultados PFGE Las cepas de los patrones 1 y 2 presentaron perfiles casi idénticos de resistencia a los medicamentos y transmisión de la misma. Fueron aislados de los mismos servicios hospitalarios y por la misma época. Las cepas del patón 3 (TY 8 y TY 9) fueron aislados en el mismo servicio y con 3 meses de diferencia, pero los niveles de resistencia a AMK y PIP fueron diferentes. La resistencia de sus transconjugados fue casi idéntica

19 Conclusiones Se aislaron Cepas de A. Baumannii resistentes a múltiples A/B B-lactámicos, incluidos IPM y CAZ, en las cuales se demostró actividad de hidrólisis del IPM y presencia del gen bla IMP La resistencia de estas cepas a los A/B B-lactámicos fue transmisible, excepto para ATM y fue producto de la trasmisión del gen bla IMP Los hallazgos sugieren que bla IMP es un gen foráneo introducido desde otras especies de bacterias y retenido por la presencia del IPM en el medio ambiente.


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