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TÉCNICAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES VIRALES Pedro E. Morán - Carolina Ceriani Área de Virología – FCV – UNCPBA - 2009.

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Presentación del tema: "TÉCNICAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES VIRALES Pedro E. Morán - Carolina Ceriani Área de Virología – FCV – UNCPBA - 2009."— Transcripción de la presentación:

1 TÉCNICAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES VIRALES Pedro E. Morán - Carolina Ceriani Área de Virología – FCV – UNCPBA

2 Los métodos de diagnóstico de las infecciones virales están enfocados a demostrar la presencia del virus, a identificar alguno de los elementos constituyentes de la partícula viral (antígenos o genoma), o detectar la presencia de anticuerpos específicos en el individuo infectado. Si bien el veterinario clínico no necesita poseer un conocimiento profundo sobre el desarrollo de dichas técnicas diagnósticas, consideramos que sí debe saber qué resultados puede esperar de cada una de ellas. Actualmente, la tendencia en el diagnóstico virológico consiste en emplear nuevas tecnologías, más sensibles, para la detección de antígenos y de ácidos nucleicos con el propósito de lograr un diagnóstico viral más rápido.

3 CONOZCAS DISTINTAS METODOLOGÍAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES VIRALES. ADQUIERAS CRITERIOS DE APLICACIÓN DE LAS TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS EN VIROLOGÍA. DESARROLLES CAPACIDAD DE: BÚSQUEDA DE INFORMACIÓN, RELACIÓN E INTEGRACIÓN DE CONCEPTOS PARA FORTALECER LA ADQUISICIÓN DE METODOLOGÍAS DE PENSAMIENTO DIAGNÓSTICO. En función de las premisas anteriores, te presentamos este material con el propósito de que:

4 EN EL SIGUIENTE MAPA DE NAVEGACIÓN ENCONTRARÁS DIFERENTES POSIBILIDADES DE ARRIBAR AL DIAGNÓSTICO DE UNA INFECCIÓN VIRAL. Podes recorrer el contenido de este material en forma lineal (siguiendo el orden de las diapositivas), o posicionándote con el cursor en cada título seleccionas directamente la técnica que te interese. Utilizando los íconos que a continuación te detallamos podes ingresar a sitios de internet donde encontrarás explicaciones, animaciones y videos de las técnicas que seleccionaste.

5 INFORMACIÓN: CLICKEÁ SOBRE EL TÍTULO SUBRAYADO O LA DIRECCIÓN WEB PARA ENCONTRAR INFORMACIÓN SOBRE EL TEMA ANIMACIONES: EN ESTOS LINKS ENCONTRARÁS VIDEOS Y ANIMACIONES DE LAS TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO VOLVER A LA DIAPOSITIVA INICIAL PARA TENER EN CUENTA!!!!!

6 CULTIVOS CELULARES ANIMALES DE LABORATORIO HUEVOS EMBRIONADOS SUSTRATOS PARA LA REPLICACIÓN VIRAL AISLAMIENTO VIRAL MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA IDENTIFICACIÓN DEL AGENTE NORTHERN BLOT (ARN) SOUTHERN BLOT (ADN) PCR (Amplificación) WESTERN BLOT TÉCNICAS MOLECULARES ACIDOS NUCLEICOS PROTEINAS VIRALES (antígenos) DETECCIÓN DE COMPONENTES DE LA PARTÍCULA VIRAL INMUNODIFUSIÓN EN GEL TÉCNICAS INMUNOENZIMÁTICAS INMUNOHISTOQUÍMICA SERONEUTRALIZACIÓN DETECCIÓN DE ANTICUERPOS DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE LAS INFECCIONES VIRALES

7 ANIMALES DE LABORATORIO HUEVOS EMBRIONADOS CULTIVOS CELULARES AISLAMIENTO VIRAL SUSTRATOS PARA EL CULTIVO DE VIRUS

8 CULTIVOS CELULARES Cultivo de la línea celular MDBK 20X Cultivo de la línea celular MDBK coloreado con Giemsa – 20X

9 CABINA DE FLUJO LAMINAR El manejo de los cultivos celulares, el cultivo de virus y el procesamiento de muestras para aislamiento viral debe realizarse en cabinas de seguridad.

10 ESTUFA DE CULTIVO Los cultivos celulares se mantienen en estufas de cultivo a 37 ºC, con atmósfera de CO 2 y humedad.

11 MICROSCOPIO ÓPTICO INVERTIDO Fuente de luz Objetivos Mediante el microscopio invertido se controla diariamente el crecimiento de los cultivos celulares. También se lo utiliza para visualizar el efecto citopático (ECP) de los virus sobre las células. MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

12 VISUALIZACIÓN DE EFECTO CITOPÁTICO (ECP) Monocapa de MDBK normal – 20X ECP del virus de la diarrea viral bovina (BVDV) sobre moncapa de MDBK – 20X Células teñidas con Giemsa

13 TRABAJEMOS UN POCO……… TE PROPONEMOS RESOLVER LAS SIGUIENTES SITUACIONES, UTILIZANDO TU CRITERIO PERSONAL Y LOS CONOCIMIENTOS E INFORMACIÓN QUE HAS ADQUIRIDO EN EL CURSO. ESTE ES UN EJEMPLO DE PROBLEMÁTICAS DE LA PARTE PRÁCTICA QUE PUEDEN PRESENTARSE EN LAS EVALUACIÓNES

14 NIVELES DE BIOSEGURIDAD CON QUÉ NIVEL DE BIOSEGURIDAD PUEDE TRABAJARSE EN INSTALACIONES COMO LAS QUE VES EN LAS IMÁGENES ANTERIORES? CON CUÁLES VIRUS PODRÍA TRABAJARSE EN UN LABORATORIO DE ESE NIVEL? CONSULTÁ EL MATERIAL DEL ANEXO PARA LOS PRÁCTICOS, Y EN EL MATERIAL DE LAS CLASES TEÓRICAS

15 a)A la observación de un cultivo celular en microscopio óptico, se evidencia efecto citopático (ECP) sobre la monocapa celular: Aplicando los conocimientos adquiridos en el curso y la información en el material de referencia, qué responderías en las siguientes situaciones? 1.- ¿Puede relacionarse el ECP observado con algún virus en particular? SI NO ¿POR QUÉ? 2.- ¿Puede determinarse específicamente de qué virus se trata? SI ¿CÓMO? NO

16 b) En caso de no observarse ECP en el cultivo: 2.- ¿Cuál sería tu criterio de acción en este caso? Podés consultar tus respuestas o aclarar dudas con los docentes del área o ingresando en la página de consultas: 1.- ¿Se descarta inmediatamente la posibilidad de presencia viral en el cultivo? SI NO ¿POR QUÉ?


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