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Métodos de Estudio Empleados en Fisiología
Clase No. 2 / 22 de julio de 2009
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Regla general para el estudio de la fisiología
Iniciar la investigación/estudio a nivel macro y trabajar bajando de escala de tamaño hasta los niveles más finos. Por ejemplo iniciar con observaciones macroscópicas y microscópicas de estructura y organización hasta llegar a niveles moleculares.
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PROTOCOLO GENERAL DE UN ESTUDIO FISIOLÓGICO
Examen visual Localización y separación de componentes y órganos Localización y separación de organelos celulares Separación de macro y micromoléculas y otros compuestos relacionados Bioensayos
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Toda conclusión a la que se llegue como resultado de un estudio fisiológico debe ser confirmada con animales completos (bioensayos con animales completos) en condiciones iguales (similares) a las que se espera que afronte el individuo.
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Niveles de Evaluación Visual
Ojo desnudo: examen macroscópico Observación al microscopio: examen microscópico Microscopía de luz Otros tipos de microscopía común Microscopía electrónica y sus múltiples variaciones
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Clase No. 3 julio 23 de 2009
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Observación macroscópica Observación al microscopio
Microscopía electrónica Observación al microscopio
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Separación de órganos, tejidos y componentes
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Separación de Componentes Celulares y Organelos
Microanálisis utilizando rayos X y microscopía electrónica Histoquímica e immunohistoquímica Centrifugación y fraccionamiento de células
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Corte histológico de branquias a diferentes aumentos y con coloraciones inmunohistoquímicas para la identificación de enzimas involucradas en la osmorregulación Clase No. 3 / 16 de julio de 2008
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Control y 24 horas de exposición a ambiente salobre
Localización de enzimas en branquias de peces utilizando fluorescencia y principios immuno-histoquímicos Anticuerpos fluorescentes utilizados para detectar componentes celulares
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Separación de macro y micromoléculas
Electroforesis Western Blots Cromatografía (de columna, filtración con gel y otros substratos, de intercambio de iones, de afinidad, HPLC). Radio immunoensayos Aislamiento, secuenciación, y clonación de ácidos nucléicos, northern blots, southern blots. PCR
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Electroforesis Fotografía y resultado de una corrida electroforética
Geles de electroforesis
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Bioensayos Perfusión de branquias
Aislamiento de organismos y/o tejidos Respirómetros Cámaras de natación
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Perfusión de branquias
Branquias de Anodonni grandis que fueron extraídas y cultivadas por un lapso de 40 días Muestra cultivo con menos de 24 hrs Mayor magnificación de la branquia Cultivo después de 30 días Cultivo después de exposición experimental
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Diagrama general de un respirómetro
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Respirómetro empleado para evaluar la natación y tasa de consumo de oxígeno de anguilas bajo distintas condiciones. Este mismo aparato se emplea para evaluar otras especies
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Respirómetro de tipo túnel que se emplea para medir y evaluar la natación en peces, en este caso de un túnido.
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