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Clase No. 2 / 22 de julio de 2009 1. Regla general para el estudio de la fisiología Iniciar la investigación/estudio a nivel macro y trabajar bajando.

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1 Clase No. 2 / 22 de julio de

2 Regla general para el estudio de la fisiología Iniciar la investigación/estudio a nivel macro y trabajar bajando de escala de tamaño hasta los niveles más finos. Por ejemplo iniciar con observaciones macroscópicas y microscópicas de estructura y organización hasta llegar a niveles moleculares. 2

3 PROTOCOLO GENERAL DE UN ESTUDIO FISIOLÓGICO Examen visual Localización y separación de componentes y órganos Localización y separación de organelos celulares Separación de macro y micromoléculas y otros compuestos relacionados Bioensayos 3

4 4 Toda conclusión a la que se llegue como resultado de un estudio fisiológico debe ser confirmada con animales completos (bioensayos con animales completos) en condiciones iguales (similares) a las que se espera que afronte el individuo.

5 Niveles de Evaluación Visual Ojo desnudo: examen macroscópico Observación al microscopio: examen microscópico Microscopía de luz Otros tipos de microscopía común Microscopía electrónica y sus múltiples variaciones 5

6 6

7 Observación macroscópica Observación al microscopio Microscopía electrónica 7

8 Separación de órganos, tejidos y componentes 8

9 Separación de Componentes Celulares y Organelos Microanálisis utilizando rayos X y microscopía electrónica Histoquímica e immunohistoquímica Centrifugación y fraccionamiento de células 9

10 Clase No. 3 / 16 de julio de Corte histológico de branquias a diferentes aumentos y con coloraciones inmunohistoquímicas para la identificación de enzimas involucradas en la osmorregulación

11 Localización de enzimas en branquias de peces utilizando fluorescencia y principios immuno-histoquímicos Anticuerpos fluorescentes utilizados para detectar componentes celulares Control y 24 horas de exposición a ambiente salobre 11

12 Separación de macro y micromoléculas Electroforesis Western Blots Cromatografía (de columna, filtración con gel y otros substratos, de intercambio de iones, de afinidad, HPLC). Radio immunoensayos Aislamiento, secuenciación, y clonación de ácidos nucléicos, northern blots, southern blots. PCR 12

13 Geles de electroforesis Fotografía y resultado de una corrida electroforética Electroforesis 13

14 Bioensayos Perfusión de branquias Aislamiento de organismos y/o tejidos Respirómetros Cámaras de natación 14

15 Perfusión de branquias 15 Branquias de Anodonni grandis que fueron extraídas y cultivadas por un lapso de 40 días Muestra cultivo con menos de 24 hrs a.Mayor magnificación de la branquia b.Cultivo después de 30 días c.Cultivo después de exposición experimental

16 Diagrama general de un respirómetro 16

17 Respirómetro empleado para evaluar la natación y tasa de consumo de oxígeno de anguilas bajo distintas condiciones. Este mismo aparato se emplea para evaluar otras especies 17

18 Respirómetro de tipo túnel que se emplea para medir y evaluar la natación en peces, en este caso de un túnido. 18


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