La descarga está en progreso. Por favor, espere

La descarga está en progreso. Por favor, espere

Anticuerpos irregulares clínicamente significativos y su detección pre transfusional Dra Fabiana Bastos División Inmunohematología Departamento de Hemoterapia.

Presentaciones similares


Presentación del tema: "Anticuerpos irregulares clínicamente significativos y su detección pre transfusional Dra Fabiana Bastos División Inmunohematología Departamento de Hemoterapia."— Transcripción de la presentación:

1 Anticuerpos irregulares clínicamente significativos y su detección pre transfusional Dra Fabiana Bastos División Inmunohematología Departamento de Hemoterapia e Inmunohematología Hospital de Clínicas José de San Martín Universidad de Buenos Aires

2 REGULARES o ESPERADOS = IRREGULARES o INESPERADOS ANTICUERPOSc

3 ANTICUERPOS IRREGULARES o INESPERADOS – Aloanticuerpos INMUNES: en respuesta al estímulo con glóbulos rojos Transfusión Embarazo Trasplante

4 ANTICUERPOS IRREGULARES o INESPERADOS – Aloanticuerpos ocurrencia NATURAL: en respuesta a estímulos ambientales Polen Hongos Bacterias

5 ORIGEN DE ANTICUERPOS INMUNES

6 Detección de anticuerpos irregulares Juega un papel fundamental en la medicina Transfusional Es un proceso clave en las pruebas de compatibilidad pre-transfusión El objetivo de los métodos de detección es el hallazgo de los anticuerpos irregulares o inesperados Presentes en % de la población general

7 ANTICUEPOS CLINICAMENTE SIGNIFICAIVOS Capaces de iniciar la destrucción acelerada de los glóbulos rojos portadores del antígeno ISBT >300 antígenos 30 sistemas de grupo sanguíneo Especificidades asociadas con: – EHFN – RHPT – Acortamiento de la sobrevida de los GR transfundidos – AHAI

8 Reacción hemolítica postransfusional Destrucción de GR alogénicos transfundidos Destrucción de GR alogénicos transfundidos Destrucción de GR autólogos Destrucción de GR autólogos Anemia Hemolítica Autoinmune Anemia Hemolítica Autoinmune Destrucción de GR fetales Destrucción de GR fetales Enfermedad Hemolítica Feto Neonatal Enfermedad Hemolítica Feto Neonatal Daño tejidos trasplantados Daño tejidos trasplantados Rechazo del injerto

9 RHP Intravascular Síntomas – Fiebre – Escalofríos – Shock – Hipotensión – Hemoglobinemia – Hemoglobinuria – IRA – CID

10 RHP Intravascular – Hemólisis rápida 10 min – IgM, fija C – 10% desenlace fatal Anticuerpos implicados: – ABO – PP1P K – Vel – Lewis – Kidd

11 RHP Extravascular IgG (IgG1 o IgG3) Inmediata: durante o dentro de pocas horas: – Ac serológicamente detectable Hiperbilirrubinemia Anticuerpo implicados: – Kidd – Rh – Duffy

12 Pacientes previamente inmunizados Ac presente Serológicamente indetectable Transfusión inicia respuesta anamnésica 5-7 días postransfusión (2-23 días) Fiebre, Hto/Hb, ictericia, hemoglobinuria RHP Extravascular Tardía

13 Factores que determinan la importancia clínica Especificidad del anticuerpo. La concentración y la avidez de los anticuerpos. Rango térmico Clase y subclase de inmunoglobulina Actividad del sistema mononuclear fagocítico. Movilidad y densidad de sitios antigénicos en la membrana. Volumen de glóbulos rojos administrados. Presencia de sustancias solubles del grupo sanguíneo

14 Algunas especificidades tienen un comportamiento variable No siempre podemos distinguir entre un Ac clínicamente significativo y uno benigno No contamos con información inequívoca del comportamiento de algunos especificidades poco comunes A veces no podemos precisar la especificidad de un Ac determinado Factores que determinan la importancia clínica

15 Importancia clínica Clínicamente significativos Significativos si reaccionan a 37ºC Significativos algunas veces Clínicamente benignos ABOLea Yt a Chido/Rodgers RhM, NGJMH KellP1 Gy a Knops DuffyLutheranHyBg KiddA1 At a Xg SsUSdaColtonCsa VelAnWjCromer Yk a PP1PkDombrock McC a H (Oh)Indian Jra Lan LW Scianna

16 AnticuerposComentarios ABO, HRTHI intravascular graves Rh(D,C,c,E,e)RTH inmediatas y retardadas K,k,Ku / restoRTH inmediatas / retardadas Fy a, Fy b, Fy3RTH inmediatas y retardadas Jk a, Jk b, Jk3RTH inmediatas y retardadas 1/3 de RTH retardadas son por anti-Jk a S,s,U,Mur*,Mi a*,Vw,Far,En a RTH inmediatas y retardadas *Frecuentes en Sudeste Asiático Do a, Do b RTH inmediatas y retardadas P, PP1P k (Tj a )RTH inmediatas graves VelRTH inmediatas graves AnWj a (CD44)RTH inmediatas graves Wr a RTH inmediatas graves Co a / Co b, Co3RTH retardadas / RTH leves Kx, KmRTH inmediatas graves Suelen producir RHPT

17 AnticuerposExcepciones A1, Lewis, P1, LKE, I Suelen ser IgM no activos >25ºC P1, A1, Le a, Le b : RTH Inmediatas y Retardadas Lu a, Lu b Algunas RTHR moderadas Sistema DiegoWr a es la excepción Yt a, Scianna, LW, Ch/Rg, Ge, Cr, Kn, In, Er, COST, Xg a, MER2, JMH, GIL, LKE, Sd a, Lan, At a, Jr a, Emm Yt a, Tc a (Cro2), In b, Lan, At a, Jr a : RTH grave 1 caso de RTHI por anti-JMH Ok a, GIL, PEL, MAMNo hay referencias, pero son potencialmente hemolíticos Raramente producen RHPT

18 Habitualmente producen EHFN AnticuerposComentarios Rh(D), c C, E, e, G Ce(f), Ce, Cw, Ew, Hro, Hr, Rh29,, Go a, Rh32, Bea, Evans, Tar, Sec, JAL, MAR-like EHRN grave y frecuente EHRN ocasional K K, Kp a, Js a, Js b, Ul a, Ku, K22 Anemia aplásica > Anemia hemolítica EHRN leve ABOEHRN poco frecuente S,s,U M En a, Mi a, Vw, Mur, Hut, Hil, Mt a, Mv, Far, sD, Or, Mut, Mur EHRN grave EHRN excepcionalmente grave EHRN ocasionalmente grave Fy a,Fy b EHRN leve, grave. 1 caso por anti-Fyb Jk a, Jk b No suelen producir EHRN. 1 caso grave Co a, Co b EHRN grave Di a, Di b, Wr a, ELO, BowPocos casos. EHRN grave GeGralmente no causan EHRN 2 casos graves. Inhibe la eritopoyesis HJK, Kg, REIT, JVF, JONES, MAMPocos casos. EHRN grave

19 Raramente producen EHFN AnticuerposComentarios Anti-PP1P k (fenotipo p)Se asocian a abortos recurrentes 1 er trimestre. Lu a, Lu b Ags poco desarrollados en el feto. Acs adsorbidos por la placenta. Le a, Le b No activos a 37ºC. No se expresan en el feto. Acs de los sistemas: Yt, Do, LW, Ch/Rg, Cr, Kn, In Acs: Cost, Er, Sc1, Sc2, Sc3, Xg a, Ok a, MER2, JMH, GIL, Emm, AnWj, Sd a, Duclos, PEL, ABTI, HLA No se han descrito casos de EHRN grave. 1 caso por anti-Duclos. Vel Lan, At a, Jr a Sólo formas leves. IgM. Poco expresado en el feto. Sólo formas leves. 1 caso reciente grave por anti-Jra.

20 Anticuerpos poco comunes Conocer la etnia del paciente Conocer la historia clínica del paciente Conocer hallazgos serológicos previos Conocer medios óptimos de reacción, temperatura, etc

21 Especificidades relacionadas con la etnia En un paciente de raza blanca, los Ac contra Ag de alta frecuencia se dirigen con mayor frecuencia contra: k, Kpb, Yta, Vel, Coa y Lub. En individuos de raza negra los fenotipos S-s-U- Js(b-) y hrs son exclusivos, y los fenotipos Fy(a- b-), Le(a-b-), Cr(a-) y Lu(b-) son más comunes

22 El fenotipo In(b-) es exclusivo de la raza asiática, y los fenotipos Gy(a-), Jr(a-) y Di(a+b-) son mucho más frecuentes En latinoamericanos: Di(a+b-), Ge:-2,3 y Ge:-2,-3. En el este de Europa es más común el fenotipo Gy(a-). Especificidades relacionadas con la etnia

23

24

25 REACTIVOS GLOBULARES Cada frasco contiene suspensión globular (0.8-6%) de un individuo Deben estar tipificados al menos para los antígenos D, C, E, c, e, P1, Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, Jka, Jkb, M, N, S, s Cada lote se manufactura con donantes diferentes Cada lote se mantiene por 45 días

26 TECNICA Colocar una gota de suspensión globular en un tubo Colocar dos gotas de suero en estudio Centrifugar y leer Incubar a 37ºC 30 minutos Centrifugar y leer Lavar tres veces con solución fisiológica Agregar dos gotas de suero de Coombs Centrifugar y leer En los negativos agregar Control Coombs

27 INTERPRETACION ¿En que fase ocurrió la reacción? ¿cuál es el resultado del control autólogo? ¿Cuántas células reaccionan? ¿Reaccionan con la misma fuerza y en la misma fase? ¿Hay hemólisis o campo mixto? ¿Están realmente aglutinados los GR o se debe a fenómeno de rouleaux?

28 INTERPRETACION ¿En que fase ocurrió la reacción? – IgG reacciona mejor en fase antiglobulínica. Pueden ser aglutinantes a 37ºC. – IgM reacciona mejor a baja temperatura y es capaz de aglutinar GR suspendidos en solución fisiológica a temperatura ambiente. – Hay IgM que pueden reaccionar en SAGH debido a la fijación de complemento.

29 INTERPRETACION

30 ¿Cuál es el resultado del control autólogo? – Se realiza enfrentando el suero del paciente con sus propios GR de la misma forma que se enfrenta a células del panel celular. – Control autólogo negativo en presencia de una detección de anticuerpos irregulares positiva indica la presencia de un Aloanticuerpo. – Control autólogo positivo indica la presencia de autoanticuerpos, anticuerpos inducidos por drogas.

31 INTERPRETACION ¿Cuál es el resultado del control autólogo? – Si el paciente ha sido recientemente transfundido el control autólogo positivo puede deberse a la presencia de una aloanticuerpo unido a los GR transfundidos. – La evaluación de muestras con control autólogo positivo o PCD positiva resulta en un problema complejo de resolver que necesita de la experiencia del operador. – El control autólogo puede omitirse durante la DAI pero debe realizarse en la identificación.

32 INTERPRETACION ¿Cuántas células reaccionan? ¿Reaccionan con la misma fuerza y en la misma fase? – Presencia de un único anticuerpo dirigido contra un antígeno presente en ambas células del panel: Todas las células reaccionan en la misma fase y con la misma intensidad – Presencia de múltiples anticuerpos. Las células reaccionan con diferente intensidad o en diferentes medios – Presencia de autoanticuerpos. Autocontrol positivo

33 INTERPRETACION ¿Hay hemólisis o campo mixto? – Anti-Le a, anti-Le b, anti-Vel y anti-PP 1 P k producen hemólisis in vitro – Anti-Sd a, Lu a y Lu b producen reacciones en campo mixto.

34 INTERPRETACION ¿Están realmente aglutinados los GR o se debe a fenómeno de rouleaux? – Se observa en todas las pruebas que contengan suero del paciente (autocontrol, inversa ABO) – Pacientes con relación albúmina-globulinas alterada (por ej. mieloma múltiple) – Pacientes que recibieron expansores plasmáticos (por ej. Dextran) – No interfiere con la fase aniglobulínica de las pruebas de detección e identificación de anticuerpos irregulares

35 Fya FybFya HETEROCIGOTA HOMOCIGOTA El panel ideal tiene G.R. con expresión homocigota para la mayor cantidad de Ags posibles. (que expresen efecto de dosis). (que expresen efecto de dosis). Si el resultado fuera anti-Fya EFECTO DOSIS

36 ¿Qué antígenos del panel celular NO expresan EFECTO DE DOSIS con sus respectivos anticuerpos? ¿Qué antígenos del panel celular NO expresan EFECTO DE DOSIS con sus respectivos anticuerpos? I, i, Lea, Leb, P1

37 LIMITACIONES Relación suero-células – Exceso de anticuerpos – Exceso de antígenos – Puede aumentarse la relación a 4 gotas de suero para detectar anticuerpos débiles sin agregar potenciadores. Temperatura Tiempo de incubación pH

38 LIMITACIONES Tiempo de incubación – Reacciones Ag-Ac están en equilibrio dinámico – El rango de tiempo es entre minutos para sistemas preparados en solución salina – Los medios potenciadores pueden disminuir este tiempo a 10 minutos

39 LIMITACIONES pH – Mayoría de los anticuerpos reaccionan entre 6.8 y 7.2 – Hay ejemplos de anti-M que reaccionan mejor a 6.5

40 METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION Control antólogo Exclusión Inclusión Tipificación GR del paciente Calculo de error

41 METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION Exclusión – Excluir aquellas especificidades que no son responsables de la reactividad observada – Examinar las células con resultados negativos en todas las fases – Los antígenos presentes en las células que no reaccionaron no son el blanco del anticuerpo presente en el suero – EFECTO DE DOSIS

42 METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION Evaluar los resultados – Inclusión: evaluar los resultados obtenidos y comparar con la clave para cada especificidad Tipificar GR del paciente – Debe estar ausente el antígeno hacia el cual está dirigido el/los anticuerpos. Calculo de error

43 METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION Calculo de error

44 METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION Pensar en mas de una especificidad – La claveobservada NO se ajusta a la de un sólo anticuerpo – Se observan reacciones de intensidad variable, que NO se explican por efecto de dosis. – Diferentes hematíes reaccionan en distintas fases – Al intentar confirmar la especificidad de un único Ac, se obtienen resultados inesperados.

45 lote DCEceCwCw KkFy a Fy b Jk a Jk b P1P1 Le a Le b MNSsTA37SAGENZ 1 ++oo++o++o+ooo+++o+OOOO 2 ++oo+o++o+o++o+o+++OOOO 3 +o++ooo++oo++o++oooOO o+o++oo+++o++oo++++OOOO 5 oo+++oo+o+++++o++++OO ooo++o++o+o++ooo+++OOOO 7 ooo++oo++oo+oo+o+++OOOO 8 +oo++oo+oo+o+oo++++OOOO 9 ooo++oo+o++o++++oooOOOO 10 ooo++oo+o+o+ooo+o++OOOO 11 ooo++oo++o+oooo+o++OOOO AC

46 METODO para interpretar los resultados CONTROL AUTOLOGO ? – NEGATIVOALO ANTICUERPO EXCLUSION – Qué Ag siguen implicados luego de la exclusión TIPIFICACION GR PACIENTE – Ag ausente en membrana del GR INCLUSION – La clave obtenida coincide con alguna prevista en el panel? CONFIRMAR PROBABILIDAD DE ERROR

47 lote DCEceCwCw KkFy a Fy b Jk a Jk b P1P1 Le a Le b MNSsTA37SAGENZ 1 ++oo++o++o+ooo+++o+OOOO 2 ++oo+o++o+o++o+o+++OOOO 3 +o++ooo++oo++o++oooOO o+o++oo+++o++oo++++OO oo+++oo+o+++++o++++OO ooo++o++o+o++ooo+++OO ooo++oo++oo+oo+o+++OO oo++oo+oo+o+oo++++OO ooo++oo+o++o++++oooOO ooo++oo+o+o+ooo+o++OO ooo++oo++o+oooo+o++OO2+4+ AC

48 METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION NO excluidos – c – E – Lea NO excluidos por heterocigota – M – S

49 METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION Inclusión: la clave obtenida coincide con alguna especificidad del panel? – c Tipificación GR del paciente – R 1 R 1

50 TECNICA EN GEL

51

52

53

54

55

56

57

58 Gel Aglutinación TECNICA EN GEL

59 Muchas Gracias


Descargar ppt "Anticuerpos irregulares clínicamente significativos y su detección pre transfusional Dra Fabiana Bastos División Inmunohematología Departamento de Hemoterapia."

Presentaciones similares


Anuncios Google