MIDIENDO EL CRECIMIENTO MICROBIANO BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS TEMA 3. DIVISIÓN CELULAR Y CRECIMIENO MIDIENDO EL CRECIMIENTO MICROBIANO Tomado de Luis Ramiro Caso Vargas en http://es.scribd.com/doc/2182004/Midiendo-el-crecimiento-microbiano

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS

Métodos para medir el crecimiento microbiano BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Métodos para medir el crecimiento microbiano Métodos Indirectos CUANTIFICACIÓN DE LA MASA MICROBIANA Balance de materia Cuantificación de componentes celulares: Proteínas ADN ARN Fte de C + Fte de N + Pi + O2 = Masa Celular + CO2 + H2O + Productos + Energía

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Determinación del consumo de nutrientes Se selecciona un nutriente que no se parezca a ningún metabolito sintetizado como: Fuente de Carbono Oxígeno Fosfato, Sulfato, Magnesio Determinación de los Productos Formados Esto depende del tipo de fermentación o producción de metabolitos: CO2 Etanol Ácido Láctico Ácidos Orgánicos Colorantes Enzimas

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Volumen de células Los microorganismos del mismo tipo tienen tamaño similar bajo las mismas condiciones de crecimiento. Se centrifuga bajo condiciones Standard de velocidad y tiempo, utilizando tubos graduados en los que se ve el volumen por las células. Viscosidad del cultivo No es un método muy utilizado. Determinación de ATP El contenido de ATP es 1 mg. de ATP/gr. de células secas. Se determina por una reacción catalizada por la enzima luciferasa, se genera un fotón. Se mide la emisión de luz en presencia de luciferina y O2, se puede determinar 10-12 gr. de ATP/lt.

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Métodos Directos CUANTIFICACIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS Recuento microscópico de microorganismos totales. Recuento en placa de microorganismos viables. Recuento microscópico de microcolonias. Contador electrónico de microorganismos totales. CUANTIFICACIÓN DE LA MASA CELULAR Peso seco. Turbidimetría.

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Cuenta en placa

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Método del Número más probable Muestra 1 ml 10-1 10-2 10-3 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 Realizar diluciones

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Tubos Dilución 10-1 10-2 10-3 1 2 3 4 5  X Análisis de resultados

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Cuenta directa al microscopio

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BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Turbidez

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Actividad metabólica Cantidad de metabolitos producidos. En la industria se utiliza el azul de metileno para distinguir al microscopio de entre levaduras vivas y muertas.

BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS Filtro de membrana

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Típico caso de investigación epidemiológica Enzimas de restricción, esta describe las endonucleasas de restricción y cómo actúa cortando el ADN. 1.A. Análisis del polimorfismo Típico caso de medicina legal o forense, en la que se han encontrado células sobre la victima que permite identificar al sospechoso. 2.-Diagnóstico de laboratorio en medicina legal Métodos moleculares Se diagnostica en 4 pacientes la existencia o no de anemia falciforme mediante la presencia o ausencia en su ADN del gen codificador de la hemoglobina. 3.-Diagnóstico de laboratorio de una enfermedad genética Típico caso de investigación epidemiológica buscando poder comprobar el origen común o la relación de unas cepas de bacterias. 4.Investigación epidemiológica comprueba el origen común o la relación de unas cepas de bacterias

Microorganismos aislados del suelo en los que se quiere determinar el género al que pertenecen. 6. Identificación de microorganismos de muestras ambientales 7 identificación de m.o De muestras de agua. similar al de muestras ambiéntales pero con dos bacterias desconocidas diferentes Métodos moleculares Se trata de secuenciar un fragmento de ADN mediante secuenciación automática e ir a consultar a las bases de datos de genes a que m.o correspondiente. 8 identificación de secuenciación del ADN

Esta técnica se utiliza diversos primers y la comprueban mediante la electroforesis con agarosa tamaño molecular. 9. Identificación mediante pcr Aquí se utiliza el método del pcr para la detección, que es responsable del 30% de los brotes gastroenteritis. 11. detección en aguas de bebida de patógeno “cryptosporidium parvum” Métodos moleculares 12. Deteccion de virus entericos en mustras de agua Se utiliza la tecnica de pcr para la deteccion en aguas de bebida de virus entericas

Es el método en donde se determina únicamente ADN como análisis de estudio.“ por medio de electroforesis” Northern blot Western blot Es un método especializado que determina proteínas. “Ejemplo la detección de VIH en la sangre.” Tecnología genomica método que determina únicamente ADN pero con la diferencia que no se somete en electroforesis. Este tipo de prueba es muy útil cuando se quieren estudiar gran número de muestras, pero tienen la limitante de no ofrecer información sobre el tamaño de las bandas del ARN hibridado. Dot blot y slot blot Hibridación de colonias bacterianas Es un método empleado para identificar colonias bacterianas que contengan determinada secuencia de ácidos nucleicos de interés.