BIOL 3052 Instructora Suheidy Valentín Lab. 3 Bacteriología BIOL 3052 Instructora Suheidy Valentín

Bacterias Células procariotas Son muy pequeñas, miden desde 0.2 a 10 μm. Reproducción asexual Fisión binaria Conjucación Bacterial Cell Components

Árbol filogenético de los Dominios The Phylogenetic Tree of Life based on Comparative ssrRNA Sequencing.The rooted Tree lands the prokaryotes in two Domains, Archaea and Bacteria. At a taxonomic level, organisms at the tips of the Archaeal branches represent Orders; the tips of the bacterial branches are Phyla. The most important, best known, and diverse groups branching off of the Bacterial limb are the Cyanobacteria, Proteobacteria and Gram positives.

¿Cómo se clasifican? Forma y arreglo de las células Morfología de la colonia Tipo de locomoción Pigmentos de la colonia Tinciones Requisitos nutricionales Secuencias moleculares de DNA y RNA

Forma de las células Pared celular Esta hecha de Peptidoglucano Es porosa Provee protección Dá forma Puede tener una segunda membrana sobre la pared celular (provee toxicidad)

Formas y arreglos celulares Bacilos Cocos Espirilos Vibrio (forma de coma) Cuadrados Estrellas Arreglos Solas Pares Tétadras Octadas Cadenas Paquetes Chromatium vinosum, Thiospirillum jenense, Thiopedia rosea Rhodospirillum rubrum, Rhodobacter sphaeroides, Rhodomicrobium vannielii Chlorobium limicola, Prosthecochloris aestuarii, Pelodictyon clathratiforme

Morfología de la colonia Forma Puntiforme Circular y ovalada Filamentosa Irregular Rizoide fusiforme Elevación Plana Elevada Convexa Pulvinada Umbonada Montañosa crateriforme Márgen Entero Ondulado Lobulado Erosionado Filamentoso rizado Left: Escherichia coli cells. Right: E. coli colonies on EMB Agar.

Tipo de locomoción Estructuras proteicas: Pili Flagelos Estructuras de anclaje Flagelos Uni-,bi-, o multi-flagelado Dispersión por el hábitat Migran hacia nutrientes Los alejan de ambientes adversos

Tipos de movimiento Taxis Movimiento que responde a diversos estímulos Quimiotaxis Fototaxis Magnetotaxis

Pigmentos de la colonia Depende de las especies Depende del medio de cultivo Depende de nutrientes Muy variado Blancas Cremas Amarillas claras y brillantes Anaranjadas Rosas claras y brillantes etc.

Fijación y tinción de células Fijación con calor Fija estructuras externas de la célula. Fijación con químicos Fija estructuras internas de la célula. Tinción Aumenta visibilidad Aumenta características morfológicas Conserva para estudios futuros Varios tipos

Cont. Tipos de tinciones: Negativa Simple De esporas Diferencial un solo colorante determina tamaño, forma y arreglo Diferencial clasifíca bacterias en grupos (ej. Gram +, -) Negativa detecta cápsula o membrana externa De esporas detecta presencia de estructuras de supervivencia De flagelos Aumenta grosor del flagelo(s)

Requisitos nutricionales Nutrientes Macroelementos Carbono Oxígeno Hidrógeno Nitrógeno Azufre Fósforo Potasio Calcio Magnesio Hierro Oligoelementos Manganeso Cinc Cobalto Molibdeno Níquel Cobre Medios de cultivo Consistencia Medios sólidos (agar) Medios semi-sólidos Medios líquidos (caldos nutritivos) Tipos Medios selectivos Favorece crecimiento de una bacteria particular Medios diferenciales Distingue entre grupos Se observan reacciones

Secuencias moleculares Phylogenetic tree of Bacteria

Estirilización y técnicas de asepcia Proceso por el cual se elimina todo tipo de vida de medios o material. Técnicas de asepcia Evitar contaminación Posibles patógenos (riesgo humano) Descartar apropiadamente

A. Investigar las carac. de las bacterias Objetivos: Observar y describir la morfología de las colonias y de las bacterias individuales. A. Morfología de las colonias Teoría: Colonia crece de una bacteria Cada colonia tiene carac. Específicas Ver fig.13.1 de la separata para describir las carac. de las colonias.

Limpiar el área de trabajo con desinfectante A. Investigar las carac. de las bacterias Ocasionalmente colonias de hongos pueden contaminar los platos de bacterias Procedimiento: Limpiar el área de trabajo con desinfectante Se utilizara el microscopio Utilizar los medios que se le van a proveer, mantenerlos CERRADOS! Examinar las colonias individuales anotar la inf. en la tabla 13.1 Utilizando los términos de la fig.13.1 seleccionar cuales describen las colonias.

B. Morfología de las Cél. Individuales Objetivo: Examinar las laminillas de bacterias que ilustran las 3 formas básicas de las bacterias en adición se examinaran y describiran las bacterias de la boca. Teoría: Las bacterias se pueden clasificar en 3 formas básicas: bacilos, coco, espirilos Placa de los dientes

B. Morfología de las Cél. Individuales Procedimiento: Utilizar el microscopio para observar las formas de las bacterias y luego dibujarlas Para conocer las formas de las bacterias encontradas en los dientes, se va ha preparar una laminilla de la placa: Laminilla limpia Coloque una gota de agua en la laminilla, dejela secar al aire Utilizando un palillo de dientes raspe sus dientes cerca de las encías, luego se mezcla con la gota de agua

d. Mezclar y tratar de esparcirlo en la laminilla dejar que seque e. cuando este seca la laminilla, aguantarla con el pinche de ropa y pasarlo por encima del mechero sin pegarlo a la flama f. colocar la laminilla en una bandeja y aplicar de 2a3 gotas de cristal violeta g. Dejarlo por un min. h.lavar con agua de las botellitas en la bandeja Secar con papel especial no raspar. 3.Observar la forma de la bacteria en el microscopio.

C. Identificar bacterias del Ambiente Procedimiento 1.Escoger el ambiente para realizar muestreo. Puede ser del aire, agua, superficie etc. No se debe hacer del cuerpo Hacer una hipótesis del crec. De las bact. En ese ambiente 2.Utilizar platos de agar para su muestra 3.Se descartan los hisopos, identificar en el plato el ambiente seleccionado 4. Sellarlos con parafina y luego encubarlos por 24h a25°C 5. Observar los resultados

D. Control de Crecimiento Bacteriano Procedimiento 1. Identificar el plato de agar con el núm. De sección, la bacteria y el agente a utilizarse. 2. Preparar el plato con la bacteria: 3. Añadir el desinfectante, antiseptico al plato con discos empapados del agente, un cuadrante es el control. 4.La siguiente semana observar la sensitividad del antibiótico y los otros agentes. Medir el diámetro de la zona de inhibición. 5. Sellarlos con parafina y luego encubarlos a 37°C 6. Anotar los resultados en una tabla.

Ejemplo 1. Control 2. Lysol 3. Alcohol 4. Clorox 1 2 4 3 Observar resultados (zona de inhibición)