Seminario de grupo Elena Nieto Alonso Departamento Química Orgánica Universidad de Alcalá Síntesis y estudios de derivados de FMISO

Estudio de Radiosíntesis Todos los estudios de radiosíntesis se llevaron a cabo por parte del grupo de investigación del Dr. Miguel A. Pozo en el Instituto Tecnológico PET (ITP) de Madrid.

Síntesis de derivados Precursores de FMISO

Radiosíntesis 18 F - PrecursorKryptofix 222 K 2 CO Reactivo Equivalentes

Kryptofix 222 4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane

H 18 F + H 2 18 O CO µmol H 2 18 O Ciclotrón 18 O(p,n) 18 F H 18 F + H 2 18 O + CO 2 F nmol Kriptofix [2.2.2] (5,8 mmol) + K 2 CO 3 (50,7 mmol) + MeCN/H 2 O (600 mL) [Kriptofix [2.2.2]. K] + 18 F - (0.87 nmol) + K 2 CO 3 (50,7 mmol) + MeCN/H 2 18 O (600 mL) CO  mol Evaporación [Kriptofix [2.2.2]. K] + 18 F - (0,87 mmol) + K 2 CO 3 (50,7 mmol) NITTP (5-20 mmol) + MeCN (2mL) [ 18 F]FMISO Intercambio aniónico A1A1 A2A2 A3A3 18 F - 0,87 nmol Actividad inicial= 1500 mCi

Figura Diagrama del modulo para radiosíntesis de [ 18 F]-FMISO. V1-acetonitrilo,V-2 precursor,V-3 HCl 1N, y V-4 NaOH 2N-tampon citrato, respectivamente.

Síntesis de derivados de FMISO

Radiosíntesis 18 F - PrecursorKryptofix 222 K 2 CO Reactivo Equivalentes

Formación del diol H 2 O + K 2 CO 3 → CO KOH(Ec. 1) R-CH 2 -OTs + KOH → R-CH 2 -OH + TsOK(Ec. 2)

Suehiro, M.; Yang, G.; Torchon, G.; Ackerstaff, E.; Humm, J.; Koutcher, J.; Ouerfelli, O. Bioorg. Med. Chem. 2011, 19,

Modelo para las pruebas de radiosíntesis

Método Entrada Etapa 1: FluoraciónEtapa 2: Hidrólisis Rto. (%) Precursor mg/  mol (Equiv.) KF mg/  mol (Equiv) Kryptofix mg/  mol (Equiv.) K 2 CO 3 mg/  mol (Equiv.) MeCN (mL) T ( o C)t (s)HCl 1M (mL) T ( o C)t (s) UAH 1 2,5/ 4,7 (27167) / 1, (1) 0,425/ 1,12 (6473) /70 360/ UAH 2 2,5/ 4,7 (27167) / 1, (1) 0,425/ 1,12 (6473) 1,45/ 10,50 (60693) 2100 /70 360/ ITP 3 3,8/ 7,1 (1) 3/ 51 (7,2) 2,2/ 5,80 (0,8) 7/ 50,7 (7,2) 2,5130 /70 300/ ,1 ITP 4 5,4/ 10,15 (1) 3/ 51 (5,0) 2,2/ 5,80 (0,6) 7/ 50,7 (5,0) 2,5130 /70 300/ ,5 suficientemente enérgicas como para considerar la hidrólisis el problema las diferencias en rendimiento de síntesis deben ser consecuencia de la etapa de fluoración. Entrada 1 y 2 :4 ciclos de destilación azeotrópica con MeCN a P reducida (8,4 min. en cada ciclo)

Conclusiones Es posible la síntesis en frío de 2g en condiciones similares a las de radiosíntesis con buenos rendimientos. El secado de la mezcla de reactivos que contiene K 2 CO 3 es esencial para evitar la reacción del precursor con iones hidróxido.

Propuestas Llevar a cabo una síntesis en frío en el ITP en las mejores condiciones, haciendo varios ciclos de evaporación azeotrópica. Disminuir la cantidad de K 2 CO 3 para reducir la formación de iones hidróxidos Cuantificación de las muestras de síntesis según el método LC-MS-MS puesto a punto para este estudio

Ensayos in vitro de permeación de FMISO y análogos

Síntesis de derivados de FMISO

Clog P de derivados lipófilos de FMISO ProductoRClog P 1aH0.27 1bBr1.25 1c2.31 1d2.91 1e2.15 1f2.82 1g3.95 1h3.30 1i3.51 Clog P calculado con Marvin Sketch

Estudios de Permeación de FMISO y análogos colaboración con la Dra Maria L. de Ceballos

Placas de 24 pocillos con insertos

Incubación 24 horas 37 ºC Incubación 0-24 horas Sistema de doble cámara con células de linea epitelial b. End 5 + medio DMEM 10 mg/10µl 600 µl 100 µl Se toman muestras del compartimento de arriba y de abajo

Area = C (μg/mL) ; r = Figura. Rectas de regresión obtenidas del FMISO mediante patrón externo: Estudio de linealidad de FMISO

Figura. cuantificación de FMISO por HPLC Análisis de las muestras para FMISO

Derivados de FMISO Clog P calculado con Marvin Sketch

Incubación 24 horas 37 ºC Incubación 0-1 hora Sistema de doble cámara con células de linea epitelial b. End 5 + medio DMEM 10 mg/10µl 600 µl 100 µl Se toman muestras del compartimento de abajo

Estudio de Permeación de FMISO y análogos % Prod. que atraviesa la membrana Tiempo (min.)

Conclusiones La cantidad de producto que atraviesa la membrana parece estar en relación con la lipofilia.

Seminario de grupo Elena Nieto Alonso Departamento Química Orgánica Universidad de Alcalá Síntesis y estudios de derivados de FMISO