Procedimiento de la huella genética de ADN

Presentación del tema: "Procedimiento de la huella genética de ADN"— Transcripción de la presentación:

1 Procedimiento de la huella genética de ADN

2 Tubos para cada grupo de trabajo
Huella Genética de ADN

3 Tubos que contienen 10 µl de muestra de ADN 70 µl Mezcla de enzimas
Sospechoso 1 – 5 Tubos que contienen 10 µl de muestra de ADN 70 µl Mezcla de enzimas 10 µl CS ADN 0,24 g de Agarosa 80 µl solución tampón 10 µl Marcador Huella Genética de ADN

4 1. Preparación de la restricción
Huella Genética de ADN

5 ¡Atención! Para cada pipeteo usa una punta de pipeta nueva para evitar contaminaciones. Por favor, recorta todos los tubos al menos durante 30 segundos para mezclarlos. Huella Genética de ADN

6 1. Tubos con muestras de ADN
CS S S S S 4 S 5 ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Huella Genética de ADN

7 1.1 Pipetea 10 µl de la mezcla de enzimas en cada tubo
CS S S S S 4 S 5 ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Mezcla µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl enzimas (ENZ) Huella Genética de ADN

8 2. Digestión de restricción
Coloca los tubos en un bastidor flotante e incubarlos durante 30 min a 37 ºC en un baño de agua o en una estufa. Huella Genética de ADN

9 3. Preparar la electroforesis
Huella Genética de ADN

10 3.1 Preparar la cámara de electroforesis
Peine Varillas metálicas Cestilla Insertar la cestilla, las varillas de metal y el peine en la camara de electroforesis. Huella Genética de ADN

11 3.2 Fabricar el gel de Agarosa (0,8%)
Introducir 0,24 g de agarosa + 30 mL TAE-tampón en un frasco Erlenmeyer de 250 mL. Calentar un poco el frasco Erlenmeyer en el microondas, removerlo y calentarlo otro poco. Huella Genética de ADN

12 3.3 Verter el gel Vierte el gel a 55 °C en la caja del gel Atención:
Comprueba la temperatura con el dorso de la mano No mover el gel hasta que esté sólido. Huella Genética de ADN

13 3.4 Preparar la cámara Después de que el gel se haya solidificado, quita las varillas de metal de la cámara de electroforesis Llena la cámara con 270 ml de TAE-tampón para cubrir el gel. Tira el peine. Huella Genética de ADN

14 4. Preparación del marcador de ADN
Pipetea 10 µl de la solución tampón (Loading Buffer) en 10 µl marcador de ADN (M). Huella Genética de ADN

15 5. Añadir 10 µl de solución tampón (Loading Buffer)
Pipetea 10 µl de la solución tampón en el CS y S1- S5. 10 µl 10 µl 10 µl Huella Genética de ADN

16 ¡Recuerda la secuencia!
6. Llenar los pocillos La línea izquierda permanece libre Pipetea 20 µl de cada muestra y 20 µl de marcador de ADN(M) en los pocillos ¡Recuerda la secuencia! Líneas: llena de izquierda a derecha Huella Genética de ADN

17 6. Llenar los pocillos Atención: las bolsas de gel no deben estar perforadas Huella Genética de ADN

18 7. Electroforesis (a 120 V ca. 30 min)
Para la electroforesis cuando la banda azul haya migrado a 1 cm antes del final del gel. Huella Genética de ADN

19 8. Colorear el ADN Transfiere el gel en el bol del colorante y cúbrelo con 60 mL de la solución de la tinción durante 2 min. Coloca la solución de tinción en el frasco Erlenmeyer. Huella Genética de ADN

20 9. Analizar el gel ¿Cúal de los sospechosos es el culpable?
CS S1 S2 S3 S4 S5 M 9. Analizar el gel ¿Cúal de los sospechosos es el culpable? Huella Genética de ADN

21 9. Resultado Huella Genética de ADN