 DIAGÓSTICO DE HIV LIC. RICARDO SALDAÑA

PRUEBAS DE LABORATORIO  PRUEBAS DE LABORATORIO Métodos Directos: Evidencian/cuantifican la presencia de antígenos en la muestra. PCR cualitativa, PCR cuantificada cultivo y aislamiento viral, antigenemia P-24) Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

PRUEBAS DE LABORATORIO  PRUEBAS DE LABORATORIO Métodos Indirectos: Evidencian la presencia o ausencia de anticuerpos totales en la muestra. Son los más utilizados. Pruebas rápidas ELISA Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Diagnóstico de VIH Se usan dos niveles de prueba serológicas: Pruebas de Tamizaje: Ensayos inmunoenzimáticos Test de aglutinación Test de detección rápida Tienen alta sensibilidad. La posibilidad de tener falsos negativos es bajo. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Pruebas rápidas disponibles en el mercado  Pruebas rápidas disponibles en el mercado Multispot HIV-1/HIV-2 Uni-Gold Recombigen OraQuick Advance Four rapid tests approved by the FDA are currently commercially available: The Uni-Gold, Multispot, Reveal, and OraQuick Advance. Reveal G2 Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  PRUEBAS DE ELISA: Primera Generación: Los antígenos utilizados provienen del lisado viral de un cultivo Segunda Generación: Los antígenos corresponden a proteínas recombinantes o Péptidos sintéticos. Tercera Generación: Péptidos recombinantes sintéticos de VIH-1, 2, 0. Cuarta Generación: Se adicionó el p24. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Continuación… Pruebas de confirmación: Tienen alta especificidad Western Blot Inmunofluorescencia Indirecta. Radioinmunoprecipitación PUEDEN SER UTILIZADAS PARA DISMINUIR LA POSIBILIDAD DE OBTENER RESULTADOS FALSO POSITIVO. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Western Blot Prueba de confirmación Principio: Ensayo inmunoenzimático Detecta anticuerpos contra proteínas específicas del VIH 1 Interpretación: visual Muestras: suero y plasma Volumen: 20 µl Tiempo: 3.5 hrs Sensibilidad: 100% Especificidad: 100% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Nomenclatura de las bandas en Western Blot Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Ventajas de las pruebas rápidas de VIH  Ventajas de las pruebas rápidas de VIH Versatilidad y existencia de diferentes principios inmunológicos así como en las muestras biológicas que se pueden utilizar. No necesitan un laboratorio muy sofisticado para utilizarlas. La realización y la interpretación de los resultados obtenidos es fácil. Los resultados preliminares se obtienen en poco tiempo, y cuando se combinan los resultados definitivos los podemos obtener en menos de una hora Personal a nivel técnico las puede realizar con la debida capacitación y supervisión de un profesional con experiencia. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Fortalezas de las pruebas rápidas de VIH  Fortalezas de las pruebas rápidas de VIH Algunas se pueden almacenar a temperatura ambiente. Se optimiza el uso de los recursos y el tiempo comparado con el ELISA. Los resultados obtenidos son igual de confiables que los resultados del ELISA y con menos limitaciones técnicas. Algunas requieren poca inversión económica. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Debilidades de las pruebas rápidas de VIH  Debilidades de las pruebas rápidas de VIH El costo comparado de estas pruebas con el ELISA puede a veces ser mayor. Presencia de falsos positivos por lo que necesitan confirmación de los resultados obtenidos. El periodo de ventana es mas largo por lo que podemos tener resultados falso negativo comparado con el ELISA de cuarta generación. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Causas de resultado falso-positivo:  Causas de resultado falso-positivo: Relativas al suero: Relativo a la calidad y manipulación de la muestra: Calidad, extracción, almacenamiento y contaminación de la misma, estabilidad y calidad de los reactivos. Relativas a la presencia de auto anticuerpos: Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES). Relativas a otras condiciones: Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis, Enfermedades hemato -oncológicas, alcoholismo, embarazo, etc. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Causas de resultado falso- negativo:  Causas de resultado falso- negativo: Periodo de ventana Tratamiento con inmunosupresores Procesos malignos Trasplante de médula ósea Disfunciones de las Células B Factores reumatoides Pérdida de estabilidad de los reactivos Reactivos que detectan principalmente p24 Pobre respuesta inmune Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Selección de pruebas rápidas de VIH apropiadas  Selección de pruebas rápidas de VIH apropiadas Es necesario tomar en cuenta tres factores: El objetivo de hacer la prueba. Sensibilidad y especificidad de la prueba. Prevalencia de la infección de VIH en la población que será tamizada con las pruebas. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Elección de Pruebas rápidas de VIH  Elección de Pruebas rápidas de VIH Los tres objetivos para hacer un tamizaje de anticuerpos contra VIH son: Tamizaje de donadores de sangre u órganos. Para fines epidemiológicos Diagnóstico de personas infectadas. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Sensibilidad y especificidad de la prueba  Sensibilidad y especificidad de la prueba Estos dos factores son críticos para diferenciar entre una persona infectada y una que no está infectada. Pruebas alta mente sensibles disminuyen la posibilidad de obtener resultados falsos negativo. Las pruebas altamente específicas disminuyen la posibilidad de tener resultados falsos positivo. La mejor elección dependerá del objetivo de hacer la pruebas. Los estándares mínimos son: Sensibilidad >99% y especificidad >95% preferiblemente validadas en nuestra población. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Sensibilidad y especificidad de las pruebas  Sensibilidad y especificidad de las pruebas a Verdaderos Positivos b Falsos positivos a + b c Falsos negativos d negativos c + d a+c b + d Resultados De la prueba Sensibilidad = a / (a + c) Especificidad = d / (b + d) VPP = a / (a + b) VPN = d/ (c + d) Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Detección de anticuerpos contra el VIH  Detección de anticuerpos contra el VIH Pruebas de Confirmación Pruebas de Tamizaje Sensibilidad Especificidad Falsos positivos es bajo Falsos negativos es bajo Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Prevalencia de la infección de VIH  Prevalencia de la infección de VIH Definición: Casos positivos * 100% población total La prevalencia puede variar de población a población o en un hospital de servicio a servicio. A > prevalencia > VPP y < VPN A > prevalencia > VPN y > VPP Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Estrategia I Utilizada en: Donadores de sangre, órganos, emergencias Estudios de prevalencia Donde la P > 10% Diagnostico: Signos o síntomas clínicos de infección por VIH y la P > 30% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Estrategia II Utilizada en: Estudios de prevalencia Donde la P < 10% Diagnostico: Signos o síntomas clínicos de infección por VIH y la P < 30% Pacientes asintomático con P >10% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt  Estrategia III Diagnóstico de Pacientes asintomático donde la P < 10% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Tamizaje en labor y partos Fase preanalitica: Antes de realizar la prueba Se ha hecho pruebas de VIH anteriormente Tenemos los insumos y el personal necesarios Que tan cerca est’a del momento del parto Que muestra usar’e para hacer la prueba Sistema de identificaci’on de muestras Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Tamizaje en labor y partos Fase analitica: proceso de realizaci`on de la prueba: Es suficientemente sensible Que tan rapido tendremos el resultado Necesitamos equipo muy complejo para hacer la prueba Que nivel de especializaci’on tiene que tener la persona que realiza las pruebas Ayudar’a nuestro trabajo a disminuir el riesgo de trasmisi’on materno fetal Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Tamizaje en labor y partos Fase Post analitica: Despues de realizar la prureba< Registro adecuado de resultados en libro de trabajo. A quien le doy el resultado, al medico, a la paciente. Tengo otras pruebas para confirmar resultados positivos. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Bioline VIH ½ 3.0 Estándar Diagnostic  Bioline VIH ½ 3.0 Estándar Diagnostic Principio: Análisis Inmunocromatográfico Prueba de 3ra. generación Interpretación:Visual Muestras: Suero, plasma y sangre (EDTA) Volumen de muestra:10µl Tiempo:20 minutos Sensibilidad: 100.0% Especificidad: 99.4% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt Experiencias Performance of a Rapid Immunochromatographic Screening Test for Detection of Antibodies to Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) and HIV-2: Experience at a Tertiary Care Hospital in South India Theophilus-Sunder Vijayakumar, Shoba David, Kavitha Selvaraj, Thiruppavai Viswanathan, Rajesh Kannangai, and Gopalan Sridharan* Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore, Tamil Nadu PIN 632004, India *Corresponding author. Mailing address: Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore 632 004, Tamil Nadu, India. Phone: 91-416-2282312. Fax: 91 (416) 2232035. E-mail: g_sridharan/at/yahoo.com . Received March 16, 2005; Revised May 9, 2005; Accepted May 16, 2005. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Pruebas de laboratorio validadas en Guatemala  Pruebas de laboratorio validadas en Guatemala Instanscreen Oraquick Determine Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

DETERMINE: Prueba rápida Características:  DETERMINE: Prueba rápida Características: Principio: Análisis Inmunocromatográfico Interpretación:Visual Muestras: Suero, plasma y sangre (EDTA) Volumen de muestra:50µl Tiempo:30-35 minutos Sensibilidad: 99.6% Especificidad: 99.4% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Immunocomb II Características:  Immunocomb II Características: Principio: Ensayo inmunoenzimático Indirecto. Interpretación:Visual Muestras: suero y plasma Volumen:50µl Tiempo: 60 minutos Sensibilidad: 100% Especificidad: 99.4% No necesita equipo automatizado Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

ORAQUICK Características Principio: Análisis Inmunocromatográfico Interpretación:Visual Muestras: Suero, plasma y sangre completa y fluído oral. Tiempo:30-35 minutos Sensibilidad: 99.6% Especificidad: 99.4% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS  PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Recomendaciones de bioseguridad  Recomendaciones de bioseguridad Uso de bata Uso de guantes Orden en la mesa de trabajo Recipiente especial para transporte de muestras de sangre. NO TRANSPORTAR MUESTRAS EN GUANTES. Descarte adecuado de desechos (agujas, jeringas y tubos) Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Diagnostico de casos de VIH positivos  Diagnostico de casos de VIH positivos 2 pruebas de tamizaje: diferente principio inmunológico con resultados iguales. Prueba Rápida + ELISA ELISA + Prueba Rápida ELISA + ELISA Prueba Rápida + Prueba Rápida Recomendación en: Protocolo Nacional para el Tratamiento Antirretroviral del VIH-SIDA. Capítulo 3, página 38. Comisión de acceso a tratamiento, Programa Nacional de SIDA, Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social, Guatemala, Junio 2002. Recomendación: OMS Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH  Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH Niños < de 18 meses hijos de madre VIH positiva: Todas las pruebas de anticuerpos dan resultados Positivos. Un resultado positivo con pruebas de anticuerpos no siempre indica infección por VIH. El diagnostico se establece con métodos directos de diagnóstico y sospecha clínica. Se debe dar seguimiento con pruebas de anticuerpos hasta los 18 meses Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH  Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH Primoinfección por VIH Las pruebas que detectan anticuerpos darán resultados negativo. Un resultado negativo con pruebas de anticuerpos no descarta infección por VIH El diagnostico se establece con métodos directos de diagnóstico. La especificidad de los métodos directos de diagnóstico dependerá del tiempo de inicio de la infección. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Carga Viral y apoyo al diagnostico de VIH  Carga Viral y apoyo al diagnostico de VIH La sensibilidad es alta La especificidad: Primoinfección 97(%2-4 sem) Neonato: < 97%: (4 sem) Tomar en consideración cargas virales > 30,000 Y no se deben tomar decisiones medicas con una sola determinación de CV Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

ALGORITMO PARA DIAGNOSTICO DE VIH  ALGORITMO PARA DIAGNOSTICO DE VIH Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Tamizaje de VIH en la Emergencia de la Maternidad  Tamizaje de VIH en la Emergencia de la Maternidad Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt ¿Dudas? Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

 Hospital Roosevelt Ciudad de Guatemala 2008

Muchas Gracias por su atención.  Muchas Gracias por su atención. Julio 2008