LABORATORIO INMUNOLOGICO EN LA PRACTICA CLINICA

Que solicitamos y cuando?? DIAGNOSTICO PRESUNTIVO LABORATORIO BASICO LABORATORIO INMUNOLOGICO ESPECIFICO

LABORATORIO BASICO HEMOGRAMA VSG (ERS) PROTEINOGRAMA ELECTROFORETICO

LABORATORIO INMUNOLOGICO ESPECIFICO INMUNODEFICIENCIAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS ENFERMEDADES ALERGICAS ENFERMEDADES AUTOINMUNES ENFERMEDADES ONCOLOGICAS

Distintas tecnicas para visualizar la Interacción especifica AG- AC

AC bivalente y AG multivalente Epitope repetitivo o epitopes distintos INTERACCION AG- AC EIA (ELISA) PRIMARIAS RADIOCOMPETITIVOS (RIA) INMUNOMARCACION (CITOMETRIA DE FLUJO) IDR SECUNDARIAS AGLUTINACION/ PRECIPITACION INMUNOELECTROFORESIS AC bivalente y AG multivalente Epitope repetitivo o epitopes distintos

PROPIEDADES DE LAS TECNICAS INMUNOLOGICAS Sensibilidad (prueba positiva en pacientes que tienen la enfermedad)VP Especificidad (prueba negativa si la enfermedad no esta presente) VN Técnicas cuantitativas TITULO Técnicas cualitativas SI/NO Técnicas semi-cuantitativas

Floculacion de particulas de carbon semicuantitativa, recordar a los alumno que es una prueba de screening pero q en nuestro pais se usa VDRL que es de titulación.

Interacción secundaria

INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) - Seminario 1- INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) Reacción de precipitación en medio gelosado TÉCNICA CUANTITATIVA ¿QUE PUEDO DETERMINAR? Concentración sérica de IgG, IgA o IgM Concentración sérica de los componentes del sistema del complemento: C1-C9, factor H, factor I, factor B y C1 inhibidor.

Aglutinación/Precipitación Formación de la red Ag-Ac EFECTO PROZONA Ag particulados: aglutinación Ag solubles: precipitación Ag y Ac deber ser al menos bivalentes y deben estar en concentraciones del orden de mg/ml a fin de visualizar el fenómeno. Suelen ser técnicas de baja sensibilidad. PROZONA aglutinación aparente x exceso de ag o ac sin aglutinar. Definir titulo.

Aglutinación ¿PARA QUÉ ? Ag particulado Ac específico Aglutinación activa o directa ¿PARA QUÉ ?  Detección/titulación de Ac específicos o antígenos  Cuantificación de Ag (IHA) TÉCNICA CUALlTATIVA O SEMI-CUANTITATIVA (cuando se determinan Ac) TÉCNICA CUALITATIVA O CUANTITATIVA (cuando se determinan Ag por IHA o aglutinación reversa)

Determinación de grupos sanguíneos sistema ABO TÉCNICA CUALITATIVA + En la parte derecha, mostrarle al alumno los grumos (aglutinación) para que vean cómo es una prueba +. Se ve además el patrón de aglutinación con cada antisuero que da cada grupo sanguíneo (sistema ABO).

- Seminario 1-

INTERPRETACION DE RESULTADOS BANCOS DE SANGRE (Resolución Ministerial 865/06) el uso de dos técnicas de Elisa (de antígeno de lisado u homogenato total y de antígenos recombinantes) es recomendable. Hemaglutinación indirecta (HAI):Chagas (IgG) El suero del paciente contiene Ac anti-T.cruzi que inducen la aglutinación de glóbulos rojos recubiertos o sensibilizados con antígenos del parásito INTERPRETACION DE RESULTADOS DILUCIÓN DEL SUERO 2 4 8 16 32 64 128 256 512 Paciente 1 Describir concepto de “título” (usar lo que se ve en hilera B: título de 16) y “efecto prozona” (se ve en hilera A). Aclarar que la detección de Ac (prueba cualitativa) es lo que se hace por ejemplo en bancos de sangre para determinar si una muestra es apta para transfusión sanguínea. Se utiliza tambien elisa, efi, aglutinacion con particulas de gelatina en infeccion aguda pero para enf postranfusional se requieren 2 elisa. Titulación: mencionar utilidad para establecer infección aguda o crónica, y transmisión materno fetal. Más adelante se habla del tema de SEROCONVERSIÓN en general. Paciente 2 Paciente 3 Titulación de Ac anti T cruzi

INMUNODEFICIENCIAS IgG, IgA, IgM . IgE. (ELISA, IDR, PRIST, RAST) Anticuerpos específicos (difteria, tétanos).(ELISA) Recuento de linfocitos T: CD3, CD4,CD8.(CITOMETRIA DE FLUJO) Complemento.(IDR, NEFELOMETRIA, ELISA) Test de nitroblue de tetrazolio. Serología para VIH. (ELISA, WESTER BLOT)

GAME INMUNIDAD CELULAR ANTICUERPOS ESPECIFICOS Concentración de inmunoglobulinas en  suero adulto normal (mg/100ml) Ig Concentración Nivel inferior Nivel superior IgG IgM IgA IgE IgD 1.250 90 210 0.0004 0.2  950   70 160 0.0002 0.1  1.550 110 260 0.0006 0.3 DIFTERIA, TETANOS ISOHEMAGLUTININAS INMUNIDAD CELULAR INTRADERMOREACCION Decir que por este motivo, por ejemplo, IgG, A y M se pueden dosar por IDR mientras que para IgE hay otras técnicas.

SIFILIS ( screening, diagnostico y seguimiento) Vdrl (aglutinacion) FTAbs-TPHA -EIA (AGLUTINACION,IF,ELISA) Utiliza como antígeno cardiolipina. Se informa la dilución máxima positiva de la aglutinación. Detecta anticuerpos específicos dirigidos contra T. pallidum. Se informa reactivo o no reactivo. Screening y respuesta al tratamiento según el titulo Perduran toda la vida aún cuando el paciente haya resuelto la infección Ambos tipos de anticuerpos son evidenciados a través de ensayos de aglutinación. Titulacion.

INFECCION AGUDA VS CRONICA Ig M Ig G ESPECIFICA SEROCONVERSION Producción de anticuerpos específicos frente a un microorganismo, detectables en el suero, durante el curso de una infección o en respuesta a una inmunización.

Interacción secundaria

(interacción primaria) ELISA (interacción primaria) Determinación de Ag Detección o titulación de Ac TÉCNICA CUALITATIVA O CUANTITATIVA TÉCNICA CUALlTATIVA O SEMI-CUANTITATIVA

ENFERMEDADES ALERGICAS Cuantificación de IgE total (ELISA) Titulación de IgE específica de Ag Las concentraciones de Ac IgE, totales y específica para un alérgeno, pueden también determinarse por ELISA (semi-cuantitativas).

Ig E SINONIMO DE ALERGIA??

(interacción primaria) TÉCNICA CUALlTATIVA O SEMI-CUANTITATIVA - Seminario 1- INMUNOMARCACIÓN (interacción primaria) ¿PARA QUÉ ? Detección de Ac Titulación de Ac Detección de Ag de superficie o intracelulares Detección de poblaciones celulares TÉCNICA CUALlTATIVA O SEMI-CUANTITATIVA

Inmunomarcación en portaobjetos Depósito de complejos inmunes Determinación cualitativa de los complejos inmunes depositados en piel, riñón u otros tejidos. Muestra: BIOPSIA. Determinación de presencia de IgG. Determinación de presencia de C3a y/o C5a. Método: inmunofluorescencia indirecta. Inmunomarcación en cortes de riñón Detección de IgG con anti-IgG humana Paciente con Síndrome de Goodpasture Recalcar que así como en la foto se detectó depósito de IgG con el conjugado específico, se podría detectar depósito de componentes del complemento (C3a, C5a) si se usara un conjugado específico. Los complejos inmunes son fuertes activadores del complemento y los fragmentos de su activación (C3a y C5a) se detectan en los depósitos.

Citometría de flujo ¿Qué tipo de información obtenemos? Su tamaño - Seminario 1- Citometría de flujo ¿Qué tipo de información obtenemos? Su tamaño Su granularidad La presencia de moléculas de superficie celular e intracelulares (mediante el uso de fluorocromos)

APLICACIONES Fenotipificacion Viabilidad celular Ciclo celular Apoptosis Capacidad fagocitica

ANALISIS DE LOS DATOS Histograma monoparamétrico Histograma biparamétrico (dot plots) Selección de una población mediante la determinación de una región o “gate” para posterior análisis (por ejemplo, células linfoides).

DOT PLOTS

Evaluación de estallido respiratorio TÉCNICA CUALITATIVA Reducción NBT NBT (incoloro) + PMN (activados con PMA) formazán (NBT reducido) AZUL microscopio 95% azules: SANO 20-80% azules: Enf. Granul. Crónica CAMBIO DE COLORACION hacia azul q sufre el colorante al ser reducido evidencia generacion de intermediarios reactivos del o en el interior del fagocito. Individuo normal Paciente con EGC

transplante CULTIVO MIXTO LINFOCITARIO CROSS MATCH CONTRA PANEL  Detecta la presencia de ANTICUERPOS en contra de otros HLA que están directamente relacionadas con el rechazo de órganos. Las transfusiones, el embarazo y trasplantes previos son situaciones que exponen a un paciente a que se generen dichos Ac. CROSS MATCH CONTRA DADOR

Reacción Mantoux – intradermorreacción (PPD) ¿PARA QUÉ SIRVE? Respuesta a vacuna BCG en niño Evaluación de contacto reciente con TBC en adultos Estudio de la respuesta inmune celular in vivo (pacientes sospechados de padecer IDP) Estudio de pacientes con hipersensibilidad 11-12 mm es positivo

Western Blot TÉCNICA CUALlTATIVA ALTAMENTE ESPECÍFICA QUE PERMITE DETECTAR Ac O Ag. EN DIAGNÓSTICO SE EMPLEA EXCLUSIVAMENTE COMO TÉCNICA CONFIRMATORIA PARA INFECCIÓN POR HIV Extracción de proteínas SDS-PAGE Transferencia a membranas (reactivo comercial) + anti-IgG humana marcada con enzima + sueros de pacientes Tiras de nitrocelulosa con Ag virales revelado Se indica en qué consiste el reactivo comercial que se emplea para hacer el diagnóstico confirmatorio, el esquema de trabajo y varios ejemplos de reactividades. Ojo: no meterse en qué es cada banda o qué significa cada reactividad ya que eso lo verán en Micro cuando vean HIV. Centrar el tema en la utilidad del Western blot como técnica confirmatoria de un diagnóstico. DETECCIÓN DE Ac EN PACIENTES CON ELISA POSITIVO CONFIRMA DIAGNOSTICO

ANTICUERPOS MONOCLONALES