Identificación y medición de la respuesta inmune

Presentación del tema: "Identificación y medición de la respuesta inmune"— Transcripción de la presentación:

1 Identificación y medición de la respuesta inmune
PRUEBAS SECUNDARIAS

2 La prueba a realizar depende de las características del Ag
SOLUBLE PARTICULADO SUPERFICIE + COMPLEMENTO PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

3 Comparación precipitación - aglutinación
Y Antígeno SOLUBLE Antígeno PARTICULADO Anticuerpo Y Y Formación de “retículo” “Amontonamiento” Y Y AGLUTINACIÓN PRECIPITACIÓN

4 PRECIPITACIÓN Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones óptimas se insolubilizan dando una reacción de precipitación

5 Y Y Y Y Precipitación MEDIO AC ESPECÍFICO PROPORCIÓN Ag SOLUBLE Ag/mg
Exceso de AC Exceso de Ag Proporciones óptimas MEDIO PROPORCIÓN AC ESPECÍFICO Ag SOLUBLE Y Y Ag/mg Y Y RETÍCULO SOLUBLE

6 MEDIO LÍQUIDO SÓLIDO DIFUSIÓN DOBLE INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
Test de Ascoli - Valente CARBUNCLO DIFUSIÓN DOBLE INMUNOELECTROFORESIS (IEF) INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

7 Inmunodifusión en Gel de Agar
DIFUSIÓN DOBLE Inmunodifusión en Gel de Agar Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión “doble”), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

8 Test de Coggins para AIE
Placa de Petri 5. Antígeno específico (reactivo) 7 4. Suero testigo (+) (reactivo) 3. Suero problema 2 6 7 4 2 6 7 4 1. Agar gel 1 2 6 7 5 4 3 1 6 2 7 5 3 4 2.Sacabocados

9 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN
6.Cámara húmeda 48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN A C B D. NEGATIVO E. Fuertemente POSITIVO F. POSITIVO 2 6 7 4 G I H D F E A. NEGATIVO B. POSITIVO C. Débilmente POSITIVO G. POSITIVO H. Banda INESPECÍFICA I. Banda INESPECÍFICA

10 APLICACIONES EN VETERINARIA
ANEMIA INFECCIOSA EQUINA PIROPLASMOSIS EQUINA LEUCOSIS BOVINA BRUCELOSIS OVINA BRUCELOSIS CANINA

11 AGLUTINACIÓN Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

12 FENÓMENO DE ZONA O PROZONA
Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

13 AGLUT I NAC I ÓN AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN PASIVA COAGLUTINACIÓN HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

14 Antígeno particulado (reactivo)
Y Y Proporción + Antígeno particulado (reactivo) AGLUTINACIÓN Suero problema Medio

15 AGLUTINACIÓN En PLACA En TUBO Salmonella Brucella Micoplasma Brucella
BPA SAT+2-ME PAL

16 Aglutinación en placa: BPA
Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado 1. Suero problema 2. Antígeno específico (reactivo) Aglutinoscopio + placa de vidrio

17 LECTURA E INTERPRETACIÓN
8 MINUTOS 3. Mezclar LECTURA E INTERPRETACIÓN Con GRUMOS Sin GRUMOS AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

18 Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME SAT (Seroaglutinación en Tubo)
Se realizan en simultáneo Ig M Ig G 2- ME (2- Mercaptoetanol)

19 En TUBO: SAT + 2- ME 60 MINUTOS SUERO BPA (+) SAT 1/25 1/50 1/100
2. Solución fisiológica fenicada (SFF) 1. Suero problema 3. Antígeno 60 MINUTOS SUERO BPA (+) SAT 37ºC-48 hs 1/25 1/50 1/100 1/200 Título 2-ME 2. Solución 2-ME

20 LECTURA e INTERPRETACIÓN
37ºC-48 hs INCOMPLETA NEGATIVA POSITIVA

21 Aglutinación en tubo: PAL PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE
Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno particulado coloreado, ambos se unirán, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y asciende con la nata

22 LECTURA e INTERPRETACIÓN
PAL 2. Antígeno (reactivo) 1. Leche problema LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-1 hora + ++ +++ ++++

23 BRUCELOSIS BOVINA APLICACIONES EN R. A. BPA – ELISA I SAT + 2-ME – FPA
Prueba TAMIZ BPA – ELISA I COMPLEMENTARIAS SAT + 2-ME – FPA ELISA C DEFINITORIA FC VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA PAL - ELISA I

24 PRUEBAS TERCIARIAS IN VITRO NEUTRALIZACIÓN PROTECCIÓN IN VIVO

25 NEUTRALIZACIÓN Fundamento: estimación de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biológica de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

26 PROTECCIÓN Fundamento: forma de análisis de neutralización que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo específico frente a su antígeno

27 RESPUESTA INMUNE CELULAR
PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS