Electroquímica y Técnicas de separación DOCENTE DRA TELMA BRICH INSTITUTO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD FUNDACIÓN HÉCTOR A. BARCELÓ CARRERA DE TÉCNICOS EN ANÁLISIS CLÍNICOS ASIGNATURA: ANÁLISIS CLÍNICOS II Electroquímica y Técnicas de separación DOCENTE DRA TELMA BRICH

Un repaso…Espectrofotometría de llama. CARBONATO DE LITIO CARBONATO DE SODIO

Técnicas electroquímicas Miden la corriente eléctrica o el voltaje generado por la actividad de los iones presentes en una muestra. Estas técnicas tienen aplicaciones importantes en los laboratorios clínicos, como la medida de electrolitos y la determinación del pH y los gases en sangre. Potenciometria: miden el potencial existente entre dos electrodos en solución sin que haya paso de la corriente eléctrica. Amperometria: se basan en la medida de la cantidad de corriente eléctrica que fluye cuando se aplica un voltaje constante al electrodo de medida o indicador.

Potenciometría La potenciometría sigue principios fisicoquímicos determinados por la ecuación de Nernst el potencial medido es proporcional a la actividad del ion en la muestra. Medición de actividad ai = fi x cci.

ISE: Los electrodos ion selectivos son electrodos indicadores con un mecanismo de selección asociado a la membrana que los hace sensibles sólo a variaciones de potencial debidas a la concentración de un determinado ion a ambos lados de la membrana. Membranas cristalinas: huecos catiónicos. Membrana de vidrio: puntos aniónicos. Membrana líquida: soporte de valinomicina. Selectiva por tamaño de poro.

Medición de pH

Electrodos sensibles a gases: pCO2 El electrodo medidor que combina un electrodo de vidrio medidor de pH y un electrodo de plata – cloruro de plata de referencia. Una membrana permeable al CO2 (pero no a los iones hidrógeno) separa la muestra del sistema medidor. El electrodo de PCO2 también contiene una membrana porosa de nylon que actúa como un soporte para una placa acuosa de bicarbonato. Cuando el CO2 difunde a través de la membrana y dentro del soporte, el pH del electrodo cambia debido al cambio en la concentración de bicarbonato de acuerdo con la ecuación:

Amperometría. Medición de pO2 No se produce una reacción REDOX espontánea sino que se aplica un voltaje externo La PO2 es medida usando un sistema que consiste en un cátodo de platino (en el centro del cilindro de vidrio) y un ánodo de plata - cloruro de plata. Una membrana permeable al oxígeno separa la muestra sanguínea del sistema de medición. El oxígeno que difunde a través de la membrana es reducido por el cátodo cuando se aplica un potencial polarizante de 0.7 V entre el ánodo y el cátodo. Las siguientes reacciones representan las reacciones que ocurren en el cátodo. O2 + 2H2O + 4 e- 4 OH- (Reducción) El circuito es completado cuando la plata es oxidada por el ánodo: 4 Ag 4 Ag+ + 4 e- (Oxidación) La corriente desarrollada por estas reacciones es directamente proporcional a la pO2 de la muestra sanguínea.

Electroforesis Principio : Las partículas cargadas (proteínas) migran en un campo eléctrico, hacia uno de los electrodos dependiendo de: Carga de la partícula: Se trabaja con un buffer a pH: 8,6 → todas las proteínas se encuentran con carga negativa. Tamaño: > PM < velocidad de corrida. Fuerza del campo eléctrico: > voltaje >mayor velocidad de corrida. Medio soporte: Acetato de celulosa- Agarosa- Gel de poliacrilamida.

Técnica con desnaturalización SDS Page

WESTERN BLOT Métodos de transferencia a filtros La transferencia de proteínas o 'blotting' se realiza por inmovilización de las proteínas sobre membranas sintéticas, seguido de la detección, empleando sistemas especialmente diseñados para la tinción de 'blots'.

Cromatografía de intercambio iónico en columna. Permite la separación de las moléculas basándose en sus propiedades de carga eléctrica. •Fase estacionaria: Resina insoluble que contiene en su superficie cargas electrostáticas fijas que retienen contraiones que se intercambian con la fase móvil. •Fase móvil: Disolución de la muestra con un buffer. Los iones de la fase móvil compiten con los analitos por los sitios de la fase estacionaria. Cuando se produce el paso de la fase móvil a través de la fase estacionaria los iones de la muestra compiten con los iones de la fase móvil por los sitios de unión en la resina (fase estacionaria). De manera que, aquellos que tienen mayor fuerza de unión, son más retenidos y saldrán más tarde de la columna.