Distribución del contenido de manual por semanas. ACTIVIDAD 28 Enero-1 Febrero Introducción al lab de bioquímica: Método científico 4-8 Febrero Introducción al lab de bioquímica: Lowry 11-15 Febrero Purificación de proteínas: Precipitación por salado 18-22 Febrero Purificación de proteínas: Cromatografías 25 Febrero-1 Marzo Purificación de proteínas: Determinación de proteínas por Bradford y PAGE-SDS 4-8 Marzo Enzimas: Curvas temporales 11-15 Marzo Enzimas. Efecto de concentración de sustrato e inhibidor 18-22 Marzo Conjugación SEMANA SANTA (25 al 29 marzo) 1-5 Abril Transformación 8-12 Abril Obtención de plásmido y restricción 15-19 Abril Gel de Agarosa e inducción de proteína recombinante 22-26 Abril PAGE-SDS proteína recombinante 29 Abril-3 Mayo Operón lac 6-10 Mayo Represión catabólica en plantas 13-17 Mayo Entrega de último reporte, repaso para examen departamental EXAMEN DEPARTAMENTAL EL 17 DE MAYO 20-24 Mayo Entrega de calificaciones

Método científico Dra. Sobeida Sánchez Nieto sobeida@unam.mx Lab 114, Conjunto E, Facultad de Química, UNAM

Método científico Método de estudio sistemático de la naturaleza que incluye: las técnicas de observación, reglas para el razonamiento y la predicción, ideas sobre la experimentación planificada y los modos de comunicar los resultados experimentales y teóricos.

Pasos del método científico Observación Planteamiento de preguntas Hipótesis Desarrollo experimental Resultados Discusión Conclusiones Publicar

Pelagra Una enfermedad que se produce por la deficiencia de niacina (vitamina del complejo B). La Pelagra es la enfermedad que los de habla inglesa denominan de las cuatro “Ds”. Diarrhea, Dermatitis, Dementia and Death.

"pelle", PIEL + "agra", RUGOSA = PIEL RUGOSA

Un problema grave de salud 3,000, 000 millones de norteamericanos contrajeron pelagra y 100, 000 murieron entre 1906- 1940. La mayor parte de ellos vivían en el sur de EU En Europa también había brotes de pelagra. Considerado un problema de toxicidad de los alimentos o bien infeccioso

Dr. Joseph Goldberger Médico, excelente epidemiólogo clínico La US Public Health Service le solicito en 1914, resolver el problema de la pelagra.

Observaciones de Goldberger: ¿Quiénes se enferman? Los que se encuentran en: Orfanatos Hospitales y Prisiones. Pero solo los que se encuentran en custodia, no así las enfermeras, doctores o custodios

Encuesta disponible R. M. Grimm, MD 25 comunidades del sureste de EU: 3 minas de carbón en Kentucky, 7 villas de plantaciones de algodón y 15 comunidades en latifundios en Georgia. Familia de aparceros

Qué tienen en común los afectados por la Pelagra? Pobreza Malas condiciones de higiene y trabajos con jornada alta. Sus parientes, visitantes o guardas que tienen contacto con ellos no tenían pelagra ni antes ni después de convivir con ellos Dietas que incluyen cantidad mínimas de proteína animal, cereales refinados (sin cascarilla).

Goldberger dedujo: La pelagra no es una infección, no proviene de gérmenes, pero si proviene de una deficiencia nutricional.

Como probarlo? Ninguno desarrollo pelagra. EXPERIMENTOS EN HUMANO ¡No son gérmenes! EXPERIMENTOS EN HUMANO Tanto sus asistentes como él y su esposa realizaron experimentos a los que les llamaron "filth parties." (fiestas de mugre). Se inyectaron así mismos: Sangre o costras o residuos de fluidos de pacientes e incluso heces. También lo hicieron los reclusos de la prisión de Mississippi (quiénes se voluntariaron con tal de que les otorgarán el perdón). Ninguno desarrollo pelagra.

Realmente es nutricional? Para probarlo se propuso realizar lo siguiente: Producir la pelagra en un hombre sano a través de alimentarlo con una comida que incluyera principalmente cereales, como los que se consumían las comunidades con alta incidencia de pelagra

Protocolo experimental Sujetos de estudio: Sujetos a prueba: Convictos granja Rankin, Missisipi y el Dr. Goldberger Controles: Guardias y convictos Dieta: Cuadros nutrimentales, Registros de dietas en la cárcel, Tiempo de administración, cuadro de calorías Control de jornadas de trabajo de los reclusos Inspección por médicos certificados

Los efectos de la dieta Al 2do mes se presentaron los síntomas de pelagra, comenzando por dermatitis. Posteriormente baja de peso, cansancio.. A los 6 meses todos estaban enfermos con síntomas graves de la enfermedad

Si es la dieta, entonces… Tanto en los hospitales como con los prisioneros y él mismo Goldenberg cambiaron de dieta: con carne, vegetales y leche, la enfermedad desapareció a los pocos meses.

Conclusiones de Goldenberg La dieta es el agente etiológico primario de la pelagra La dieta que produce pelagra presenta deficiencia en aminoácidos, constituyentes minerales, vitaminas solubles en grasas y vitaminas antineuríticas (como las del complejo B)

Niacina puede prevenir pelagra El Dr. Goldberger murió sin identificar el principio que curaba la pelagra. Pero en 1937 Elvehjem aisló la P-P (pellagra preventive) la niacina. La niaciana es abundante en la carne roja, en las hojas verdes de los vegetales, en el pescado. Previene y cura totalmente la pelagra.

Goldberger reporto sus resultados                                                              Goldberger reporto sus resultados

¿Porqué publicar? INFORMAR A LA COMUNIDAD ESTABLECER TRATAMIENTO: Mejorar dieta ABRE NUEVAS LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN Debido a la pobreza implementaron una cura, suplemento alimenticio con levadura de cerveza Aunque, lo que definitivamente redujo de manera importante la enfermedad fue que cambiaron las prácticas en la agricultura, diversificaron los cultivos. El maíz escaso en triptófano el cual es precursor de la niacina

Conocimiento que es difundido es tomado en cuenta En la actualidad aún hay brotes de pelagra debido a: Mala alimentación (países en África y con pobreza extrema) Alcoholismo Diarreas crónicas Síndrome de mala absorción (enfermedad de Crohn) Tumor carcinoide Algunos medicamentos

Pasos del método científico Observación Planteamiento de preguntas Hipótesis Desarrollo experimental Resultados Discusión Conclusiones Publicar

La hipótesis el punto clave para proponer una investigación A partir de la observación surge el planteamiento del problema que se va a estudiar, lo que lleva a emitir alguna hipótesis o suposición provisional de la que se intenta extraer una consecuencia. Una hipótesis es una pregunta de lo que planeas investigar y debe ser probada. ¿Pero como planteamos una hipótesis?

Trabajando en la hipótesis Si sentimos que la garganta nos duele, nos planteamos: “Si tengo dolor de garganta entonces podría deberse a que tengo una infección en la garganta debida a bacterias o virus, o bien porque gritamos mucho el día anterior”. Sin embargo, la anterior hipótesis no toma en cuenta lo que tenemos como conocimiento previo. Al replantearla podemos decir: “Si sé que el resfriado es contagioso y no estuve en contacto con alguien que estuviera enfermo, y además fui a un juego de fútbol en donde grité mucho, entonces es probable que esto último me causara el dolor de garganta”.

Mejoró pero hay que proponer el experimento “Si no tengo fiebre o síntomas de una infección en la garganta, pero sí una inflamación en la garganta, entonces el cultivo de exudado faríngeo y otros estudios clínicos darán negativo para una infección bacteriana o viral, por lo que la inflamación se deberá a un uso excesivo de las cuerdas vocales. PERO CORTA… Si solo tengo inflamación en la garganta y grite durante un juego de futbol entonces el análisis de infección por virus y bacteria será negativo.

Desarrollo experimental La experimentación condiciones particulares de estudio, eliminando o introduciendo aquellas variables que puedan influir en él. Se entiende por variable todo aquello que pueda causar cambios en los resultados de un experimento y se distingue entre variable independiente, dependiente y controlada.

Tipos de variables Variable independiente es aquélla que el experimentador modifica a voluntad para averiguar si sus modificaciones provocan o no cambios en las otras variables. Variable dependiente es la que toma valores diferentes en función de las modificaciones que sufre la variable independiente. Variable controlada es la que se mantiene constante durante todo el experimento.

Siempre hay que incluir controles En un experimento siempre existe un control o un testigo, que es una parte del mismo no sometida a modificaciones y que se utiliza para comprobar los cambios que se producen.

Reproducibilidad Todo experimento debe ser reproducible, es decir, debe estar planteado y descrito de forma que pueda repetirlo cualquier experimentador que disponga del material adecuado.

Resultados Los resultados de un experimento pueden describirse mediante tablas, gráficos y ecuaciones de manera que Recuerda que aquí siempre hay que explicar que paso, que nos dice el experimento.

Análisis de resultados o también llamada discusión Aquí ya no solo se dice si un valor se incremento o está normal o si algo está fuera de lo normal. En está sección nos permite encontrar relaciones entre los resultados que confirmen o no las hipótesis emitidas

CONCLUSIONES: Contrastar la hipótesis con los resultados. Una hipótesis confirmada se puede transformar en una ley científica que establezca una relación entre dos o más variables, y al estudiar un conjunto de leyes se pueden hallar algunas regularidades entre ellas que den lugar a unos principios generales con los cuales se constituya una teoría.