Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas
74th Meeting of the Society of German Scientists and Physicians 74th Meeting of the Society of German Scientists and Physicians. 1902, Karlsbad Franz Hofmeister (1850-1922) Emil Fischer (1852-1919)
Enlace peptídico G°= 10kJ/mol 1/2=7 años, pH=7 y 25°C R1R2
Secuencia: AlaGluGlyLys o AEGK
COO- COO- NH2 NH2 NH2 COO-
Análisis químico Composición? Detección? Secuencia? Reacciones del enlace peptídico Reacciones del grupo amino terminal Reacciones del grupo carboxilo terminal
Reacciones del enlace peptídico Hidrólisis ácida (ClH 6M a 100 C, 24hs). Hidrólisis alcalina. Reacción de Biuret ( SO4Cu/tartrato alcalino 540nm). Baja sensibilidad. Reacción de Lowry et al. (Reactivo de Folin-Ciocalteau = mezcla de óxidos de tungsteno y molibdeno) 720-750 nm
Reacciones del grupo amino (terminal) Ninhidrina (570 nm) Pro a 440nm Fluorescamina (producto fluorescente). Alta sensibilidad 1-Fluoro-2,4 dinitrobenceno(FDNB, reactivo de Sanger) Cloruro de dansilo o-ftalaldehído (en sn con mercaptoetanol, producto fluorescente). Alta sensibilidad
Reacciones del grupo Carboxilo Hidrazina (H2NNH2) (hidrazinolisis) Carboxipeptidasa (exopeptidasas)
Frederick Sanger (1918-..) Premio Nobel 1958, 1980
Secuenciación Purificación de la proteína o péptido Determinación de la composición y PM Determinación del número de cadenas (ruptura de los puentes disulfuro) Determinación de los extremos amino-terminales y carboxilo-terminales Corte específico de la secuencia principal en fragmentos menores, al menos en dos formas distintas Purificación de cada segmento y secuenciación Determinación de la secuencia total
3 Ruptura de –S-S-
DTNB ( ácido ditio-bis-nitrobenzoico) nitrotiobenzoato
4 Determinación de extremos
Producto púrpura
5 Cortes y producción de fragmentos Métodos enzimáticos
5 Cortes y producción de fragmentos Métodos químicos
6 Secuenciación de fragmentos (Edman, 1950) pH=9