Diálogo Leucotrieno C4 – Células Dendríticas: Rol en la respuesta inflamatoria Tutor: Vermeulen, Mónica – Investigador Conicet – Academia Nacional de Medicina Cotutor: Panero, Julieta – Profesor titular – UADE Alumnos: Nicola Candia, Alejandro; Parra, Federico

Objetivos General: ¿El LTC4, al actuar sobre células dendríticas tolerogénicas, es capaz de modular las respuestas inflamatorias asociadas a mucosas? . Específicos: Estudiar si el LTC4 es capaz de modificar fenotípicamente a las CD de la mucosa e inducir la secreción de diversas citoquinas inflamatorias. Analizar los efectos del LTC4 sobre las CD y los LT en el microambiente de la mucosa.

Estado del arte

Tolerancia oral Tolerancia a antígenos solubles: la inducción es local a nivel del intestino pero la respuesta efectora actúa tanto a nivel local como sistémico. Sistema inmune intestinal: tejido linfoide (ganglios mesentéricos y placas de Peyer) y lámina propia (células epiteliales). Involucra principalmente CD tolerogénicas y LT regulatorios.

Células dendríticas y LTC4 CD presentes en el tejido intestinal: tolerogénicas CD11c+CD103+; inflamatorias CD11c+CD103-. Funciones convencionales pero también específicas para las CD103+: presentación cruzada de antígenos, diferenciación de LT regulatorios intestinales. LTC4 es un potente mediador pro-inflamatorio. Es conocido su efecto inmunomodulador sobre las patologías inflamatorias. Previene la maduración completa de las CD de médula ósea y promueve la liberación de TNF-α e IL-10.

Linfocitos T intestinales Pueden diferenciarse, por diferentes estímulos, en T CD4 (células efectoras) o T CD8 (citotóxicas). Familia de LT efectores: Th1, Th2, Th17, Tfh y T-reg. El mantenimiento de la homeostasis intestinal es esencial para desarrollar tolerancia a antígenos y los LT-reg cumplen un rol fundamental en dicho aspecto. En el contexto intestinal predominan el grupo de células que expresan el receptor TCR γδ.

Materiales y Métodos

Modelo murino de tolerancia oral Etapas del proyecto Modelo murino de tolerancia oral Caracterización de los ratones tolerizados Ensayo del efecto del LTC4 sobre poblaciones celulares de la mucosa intestnal

Inducción de tolerancia en ratones BALB/c Ratones hembras, vírgenes, de 7 a 10 semanas de edad Tratamientos: 100 μl de ovoalbúmina de huevo (OVA) 5% en 250 ml de agua Controles: agua sin OVA Tratamientos por 5 – 6 días

Extracción de tejido

Flujo de trabajo LPS (10μM)+ LTC4 (10-8M) Ratones Líneas celulares Ganglios e intestino Cocultivo Células epiteliales Líneas celulares

Resultados

Ratones tolerizados vs no tratados GM En GM de ratones tolerizados la población de LT CD8+ disminuye y la de LT CD4+ no varia 11.5% 28.5% 30.0% No tratado Tolerizado 8.45% Intestino En intestino delgado de ratones tolerizados las CD tolerogénicas y los LT CD8/γδ se ven disminuidas

Efecto del LTC4 sobre poblaciones de GM de ratones tolerizados Disminuye LT CD4 Aumenta CD CD11c/CD103 Aumenta CD CD11c/B220

Efecto del LTC4 sobre cocultivos de CD y CE Endotelio de intestino PAM 212

Cocultivo CD + PAM 212

Producción de citoquinas CD + CE Se observa una marcada disminución de las citoquinas liberadas por CD en presencia de CE

Conclusiones

La administración en la dieta de un antígeno no provoca efectos similares a lo largo de toda la mucosa; sino efectos distintos como los observados en los sitios efectores (GM) y en los sitios inductivos. El LTC4 parece interferir con algunos aspectos fenotípicos de la mucosa y aún inducir, al actuar sobre CD, la liberación de citoquinas de etiología inflamatoria. Sin embargo, la presencia de células del epitelio despliega mecanismos de compensación que mantienen la homeostasis del tejido.

Aportes al ámbito científico Nuevas bases para comprender los mecanismos involucrados en la inducción de tolerancia oral a proteínas comunes. Se confirmó que el LTC4 afecta la homeostasis de la mucosa intestinal modificando las poblaciones de CD y LT, pero también fue demostrado que el epitelio cumple un rol destacado a la hora de contrarrestar dichos efectos. Nuevos conceptos para formular tratamientos para pacientes con enfermedades del tracto gastrointestinal como la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerativa.

¡MUCHAS GRACIAS!