POTENCIAL ANTIMICROBIANO Y COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL ACEITE DE EUCALYPTUS GLOBULUS EN FASE LÍQUIDA Y VAPOR CONTRA MICROORGANISMOS CAUSANTES DE DETERIORO DE LOS ALIMENTOS. Factor de impacto: 4.76 en 2015.

Aditivo alimenticio y antioxidante 1. Introducción. Australia Medicina tradicional china Familia Myrtaceae, con 900 especies y subespecies Hoja perenne Con extractos de agua caliente + hojas secas: anti-inflamatorios Analgésicos remedios antipiréticas para los síntomas de las infecciones respiratorias (resfriado, gripe). Aceites Esenciales: Fines medicinales y farmacéuticos. Eucalyptus citriodora, Eucalyptus camaldulensis Eucalyptus urophylla, Eucalyptus globulus.

Aceites esenciales Antibacterianos Antifúngicos Antihiperglucémico Actividad antioxidante Antimicrobiano Aplicación a los alimentos. LíquidoLíquido Vapor Propiedades sensoriales

El aceite esencial en la fase de vapor puede ser muy eficaz contra los patógenos transmitidos por los alimentos y las bacterias de descomposición usado en concentraciones relativamente más bajas que en la fase líquida, lo que provoca un efecto mínimo sobre las propiedades organolépticas. Eucalyptus Globulus. E. globulus Este estudio se enfoca en el efecto antimicrobiano de aceite de E. globulus contra las bacterias (gram negativos, gram positivo), hongos y levaduras, en la fase líquida, así como en la fase de vapor.

2. Material y Métodos Los aceites escenciales, se obtienen de compuestos naturales “Private Limited” (India). Se almacenaron en botellas de vidrio hermético sellados a 4 ° C hasta su uso posterior El medio de crecimiento de cultivos y el polisorbato 80* se adquirieron de Himedia, India El etanol se adquirió de Merk, India Productos Químicos y Cepas. *polisorbato 80  tween 80.

Cepas de bacteriasCepas de hongosLevaduras Escherichia coli ADH5Penicillium digitatumCandida albicans Escherichia coli ATCC Aspergillus flavusSacchromyces cerevisiae Pseudomonas aeruginosaAspergillus niger Pseudomonas fluorescensMucor spp. Bacillus subtilisRhizopus nigricans Staphylococcus aureusFusarium oxysporum Fueron recogidos de la instalación de cultivos microbianos, Departamento de Biotecnología y de Ingeniería Bioquímica, Instituto indio de Tecnología de Delhi, Nueva Delhi, India, y se utilizaron para evaluar el efecto de los aceites esenciales.

Preparación del inóculo. Las bacterias y hongos  caldo Mueller Hinton (MHB) y agar de papa y dextrosa(PDA) a 30°C durante 24 h en un incubador con agitación orbital (Scigenics) a 180 rpm Las células se recogieron por centrifugación Se suspendieron en agua destilada estéril y se usaron inmediatamente Los ensayos antimicrobianos Determinación de la concentración mínima inhibitoria (MIC) por método de dilución en agar. MIC MHB PDA 15 ml por placa de Petri mg / ml de aceite de E. globulus Tween-80, 0,5%. Mejorar la Disponibilidad del aceite 1 ml de suspensión de células (10⁶ ufc / ml) Se inocularon: se incubaron 30°C, 48h 30°C, 48h. Placas con Tween-80, pero sin cualquier aceite esencial se utilizaron como control.

Determinación de la concentración bactericida mínima (MBC) y la concentración mínima fungicida mediante el método de dilución en caldo (MFC). Los matraces que contienen sólo Tween-80 pero sin aceite esencial se utilizaron como control. Aceites esenciales (0,27-36 mg / ml) Los matraces se incubaron a 30°C con agitación orbital (180 rpm) durante 48 h. Se inocularon matraces con 1ml de suspensión de células (10⁶ ufc / ml) Para mejorar la solubilidad en aceite se incluyó Tween 80 a una concentración final de 0,5%. Fue tomado 1 ml de cultivo de cada matraz para dilución en serie del inóculo Se sembraron sobre placas de MHA (Mueller Hinton: cepas bacterianas) y PDA (agar de papa y dextrosa: cepas de hongos). se incubaron 30°C, 24 y 48h 30°C, 24 y 48h respectivamente.

Método de difusión. Es empleado para determinar la sensibilidad de un agente microbiano frente a un antibiótico Se inocula con 100 µl de cada suspensión en las placas de cultivo (MHA y PDA) El aceite Se esterilizó utilizando un filtro de membrana de 0,45µm Se tomaron dosis diferentes (10, 20, 30 y 40 µl) de aceites y se agregaron a las muestras. se incubaron 30°C, 24h Todas las placas se examinaron para identificar cualquier zona de inhibición del crecimiento Se valora la zona de inhibición

Método de Volatilización en Disco. Una porción 100 µl de cada suspensión que contiene aproximadamente 10⁶ ufc/ml extendió sobre la superficie de las placas MHA / PDA y se deja secar Un disco de papel (diámetro 6 mm) se colocó dentro en la parte superior de la placa. El aceite esencial (10, 20, 40 o 60 µl) fue colocado en cada disco. La placa inoculada con microorganismos se invierte inmediatamente Se sella con parafilm para evitar la fuga del vapor Las placas se incubaron a 30°C/24h.

Microorganismos  Microorganismos  E. coli, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aeruginosa, B. subtilis y C. albicans Determinación del tiempo de destrucción 1.cámara compacta compuesta de material acrílico (tamaño de 50x50x25cm). 2.La parte frontal de la cámara tenía guantes a través del cual las cosas dentro de la cámara podrían ser manejados sin necesidad de abrir la cámara. 3.Antes de la exposición, la cámara se limpió con etanol y esterilizador UV. 4.Dos máquinas de evaporación fueron fijadas para soltar el aceite esencial. 5.Se sembraron los cultivos en placas de PDA (para obtener 100 a 300 ufc). 6.Después de un período de tiempo determinado (0,5, 1, 2, 4, 8 y 12 h), las placas se separan, se cierran, y se incuban a 30° C durante h.

Composición química del aceite de E. globulus y su vapor Determinado por cromatografía de gases (GC)  Shimadzu 2010 Se uso con helio Las temperaturas inyector y del detector se mantuvieron a 260°C Espectrometría de masas de gas cromatográfico (GC-MS)  Shimadzu 2010 El análisis de microextracción (SPME) en fase sólida GC-MS del aceite de E. globulus. se llevó a cabo usando un instrumento de Shimadzu GC-MS-QP2010 Plus, equipado con un procesador de datos. Identificación se realizó por comparación de los espectros de masas con los espectros de masas disponibles en la base de datos de las bibliotecas NIST05 y WILEY8. Identificación de compuestos químicos

3. Resultados. Concentración mínima inhibitoria(MIC), concentración bactericida mínima (MBC) y la concentración fungicida mínima (MFC) del aceite de E. globulus. Actividad antimicrobiana el MIC varió 2,25-9 mg/ml en las bacterias. MIC más alto (9 mg/ml) se demostró por Pseudomonas. El MIC de bacterias gram positivas (B. subtilis y S. aureus) fue de menos que de bacterias gram negativas (E. coli ADH5, E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa, P. fluorescens). Las Pseudomonas son más difíciles de destruir con el aceite de E. globulus (MBC).

La MIC para las cepas fúngicas varió de 2,25 a 9 mg / ml necesitan más concentración de aceite de E. globulus La P. digitatum y A. niger, necesitan más concentración de aceite de E. globulus para inhibir su crecimiento. más concentración de aceite de E. globulus MFC. La P. digitatum y A. niger necesitan más concentración de aceite de E. globulus para ser destruidas. El MIC de C. albicans (2,25 mg / ml) fue mayor que S. cerevisiae (1,13 mg / ml) y se comporta igual en su MFC.

Método de difusión. A mayor cantidad de el aceite de E. globulus, mayor es el tamaño de la zona de inhibición. Presentando mayor inhibición Bacillus subtilis y la menor las Pseudomonas aeruginosa.

A mayor concentración del aceite de E. globulus, mayor es la zona de inhibición. Además la zona de inhibición a la misma concentración de aceite esencial era más grande para los hongos que para las bacterias. Mayor zona de inhibición.

A mayor exposición a los vapores de aceites esenciales de E. globulus mayor es la zona de inhibición en bacterias y en hongos. La inhibición es incluso mayor con el vapor de aceite esencial, que con el aceite líquido. Método de volatización por disco

 Mientras que se observó solamente el 76,6, el 72,3 y el 82,9% de reducción en la viabilidad en P. aeruginosa, P. fluorescens y E. coli, respectivamente, después de 12 h de exposición.  Se observó una reducción del 100% en la viabilidad de B. subtilis y C. albicans a las 8 horas. Viabilidad: capacidad de un microbio para sobrevivir en determinadas condiciones. Determinación del tiempo de destrucción

Composición química del aceite de E. globulus y su vapor Obtenidos por: cromatografía de gases, Espectrometría de masas de gas cromatográfico y análisis Microextracción

La composición química del aceite de E. globulus es Similar al de otras investigaciones. Si se encuentran diferencias, se sugiere a la especie de Eucalipto. Los grupos funcionales (alcohol, fenoles, terpenos y cetonas) de compuestos que se encuentran en este aceite, se asocian con sus características antimicrobianas. 45,4%Particularmente son los monoterpenos y el cineol (eucaliptol), que representó aproximadamente el 45,4% del aceite esencial de E. globulus, posee fuertes propiedades antimicrobianas. Otros antimicrobianos: limoneno y, linalool, c-terpineno, p-cimeno, a-pineno y a- terpineo. No hay informes anteriores disponibles en el composición de vapor de aceite E. globulus para comparar con los resultados, pero resultó significativa su actividad antimicrobiana, podría explicarse sobre la base de una mejor capacidad de penetración de los monoterpenos en forma gaseosa que en la líquida.

4. Conclusión. Se requiere un estudio adicional in vivo para confirmar la actividad antimicrobiana de E. globulus en la fase de vapor, que puede ser usado para la preservación y / o la extensión de la vida útil de los alimentos crudos y procesados. El aceite esencial de E. globulus Potencial antimicrobiano contra una gama de m.o. que degradan los alimentos. Eficaz en la Eficaz en la inhibición de crecimiento microbiano inhibición de crecimiento microbiano Causó inhibición completa de hongos y levaduras. porcentaje de hidrocarburos monoterpenos (54,7%) presentes en los vapores en comparación con el aceite (44,5%) Mayor responsable de actividad antimicrobiana

Bibliografía. Kumar A., Malik A. (2011). Antimicrobial potential and chemical composition of Eucalyptus globulus oil in liquid and vapour phase against food spoilage microorganisms. Food Chemistry, 126, 228–235.