Sinergismo antibacteriano de extractos de Aristolochia brevipes, Aristolochia orbicularis y Bocconia arborea. Introducción El desarrollo de resistencia.

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1 Sinergismo antibacteriano de extractos de Aristolochia brevipes, Aristolochia orbicularis y Bocconia arborea. Introducción El desarrollo de resistencia en las bacterias es uno de los mecanismos de adaptación natural a la presencia de un agente antimicrobiano que inhibe organismos susceptibles y selecciona los resistentes. Los genes de resistencia se transfieren a otras bacterias y a otros lugares geográficamente diferentes. La selección de cepas resistentes se produce tan rápido que para algunas bacterias la utilidad clínica de los antibióticos se pierde dentro de un período de 5 años. La planta Aristolochia brevipes, popularmente conocida como “guaco”, son usadas las raíces para tratar la artritis, diarrea y para la tos con sangre. La planta Aristolochia orbicularis, no tiene reportados antecedentes fitoquímicos ni farmacológico que validen su uso ethnopharmacológico. Bocconia arborea, conocido como “llorasangre” en la medicina tradicional mexicana, es utilizado para tratar diversos padecimiento como; verrugas, heridas, sarna, angina de pecho, fiebre y parasitismo. Objetivo Evaluar el sinergismo antibacteriano de extractos de Aristolochia brevipes, Aristolochia orbicularis y Bocconia arborea solo y combinados entre ellos y con gentamicina contra bacterias sensibles y resistentes de interés médico. Material y métodos Material vegetal Las plantas fueron colectadas de diferentes municipios del Estado de Morelos: Aristolochia brevipes, fue colectada en septiembre del 2013 en Temixco, Aristolochia orbiculares fue colectada en noviembre del 2013 en Xochicalco y Bocconia arborea, se colectó en junio del 2013 en el km 3 de la carretera federal Cuernavaca-Tepoztlán. Las partes vegetales se colocaron en un cuarto oscuro a temperatura ambiente, donde se dejó secar durante 10 días, hasta su deshidratación completa. El material seco de cada uno de las tres plantas fue molido mediante la utilización de un molino eléctrico. Preparación de los extractos Debido a los reportes previos de su actividad antimicrobiana. Los materiales vegetales del genero Aristolochia se procedieron a macerar en diclorometano, para el material vegetal de Bocconia arborea se macero en metanol,, durante 3 días y por tres ocasiones para cada uno de ellos. El macerado se filtró para retirar la parte sólida y el disolvente fue eliminado a presión reducida en un rotavapor. Microorganismos utilizados Los microorganismos utilizados en este estudio incluyen las bacterias Gram- positivas: Staphylococcus aureus sensible (ATCC 29213), las cepas resistentes a meticilina (RMSA) S. aureus (ATCC 43300, y ATCC 33591), la cepa resistente betalactamasa S. aureus (ATCC 11632), y las bacterias Gram-negativas cepas sensibles Salmonella typhi (ATCC 06539), Streptococcus faecalis (ATCC 29212) y Escherichia coli (ATCC 25922). Los cultivos fueron mantenidos en Agar Mueller- Hinton a 4° C hasta antes de su uso. Las bacterias fueron inoculadas en caldo MH a 37° C, 18 h, antes de iniciar la prueba. Determinación de la actividad sinérgica antibacteriana Para la evaluación antimicrobiana de los extractos se utilizó el modelo de doble dilución seriada en agar, determinando los valores de la concentración mínima inhibitoria (CMI). Las bacterias se cultivaron durante 4 horas a 37° C en Caldo Mueller-Hinton, los cultivos se ajustaron a un tamaño de inoculo de 10 6 unidad formadoras de colonias (UFC/mL), usando la escala estándar de 0.5 de MacFarland. Los extractos y la gentamicina, solos y en combinación fueron disueltos en dimetil sulfóxido al 10% y agua; se prepararon diluciones seriadas dobles, las cuales se incorporaron en Agar Antibiótico el rango de concentración estuvo comprendido para los extractos solos y combinados (1 a 2000 µg/mL) y estándar antibiótico de gentamicina (3.9 a 60 µg/mL). Las cajas fueron colocadas a incubación a 37° C durante 24 horas. Como controles de la prueba se utilizaron DMSO y el medio de cultivo. El valor del CMI fue determinado, como la concentración más baja de la muestra de extracto que produjo la completa supresión del crecimiento bacteriano. Abarca-Vargas Rodolfo 1, Álvarez-Fitz Patricia 2, Salinas-Sánchez David Osvaldo 3, Navarro-García Víctor Manuel 1. 1 Centro de Investigación Biomédica del Sur, IMSS, Argentina No.1, Xochitepec, Morelos, México. 2 Unidad Académica de Ciencias Químico Biológicas. Universidad Autónoma del Estado de Guerrero. Av. Lázaro Cárdenas s/n. Cuidad Universitaria. Chilpancingo, Gro. 3 Departamento de Recursos Naturales del Centro de Investigación en Biodiversidad y Conservación (CIByC), Universidad Autónoma del Estado de Morelos (UAEM), Cuernavaca, Morelos, México. Conclusiones Se evaluó la actividad sinérgica antibacteriana de los extractos de Aristolochia brevipes, Aristolochia orbicularis y Bocconia arborea solo y combinados entre ellos y gentamicina contra bacterias sensibles y resistentes de interés médico. Nota: a = Aristolochia brevipes, b = Aristolochia orbicularis, c = Bocconia arborea, d = Gentamicina, MRSA = Staphylococcus aureus multiresistente, βRSA = S. aureus resistente a betalactamasa. Tabla 2. Tipo de interacción entre los extractos vegetales y el antibiótico gentamicina. Tabla 1. Valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) obtenidos de los extractos y el antibiótico gentamicina, solos y combinados. Bacterias CMI (µg/mL) abcda + cb + ca + db + dc + d Salmonella typhi ATCC 06539 12525010003.91252503.944 Streptococcus faecalis ATCC 29212 431.150031.1815.68 31 Escherichia coli ATCC 25922 25050020003.912525083.98 Staphylococcus aureus ATCC 29213 415007.744448 Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC 43300 4150060424262 Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC 33591 1125015.62222 Staphylococcus aureus (βRSA) ATCC 11632 3.87.82507.7884415.6 Bacteria a + cb + ca + db + dc + d Salmonella typhi ATCC 06539 1.25 (Antagonismo) 1.50 (Antagonismo) 1.06 (Aditivo) 1.06 (Aditivo) 1.03 (Aditivo) Streptococcus faecalis ATCC 29212 1.50 (Antagonismo) 0.55 (Sinergismo) 2.77 (Antagonismo) 1.25 (Antagonismo) 1.12 (Antagonismo) Escherichia coli ATCC 25922 0.59 (Sinergismo) 0.69 (Sinergismo) 2.15 (Antagonismo) 1.02 (Aditivo) 2.06 (Antagonismo) Staphylococcus aureus ATCC 29213 1.02 (Aditivo) 4.04 (Antagonismo) 2.04 (Antagonismo) 6.60 (Antagonismo) 1.07 (Aditivo) Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC 43300 1.02 (Aditivo) 2.01 (Antagonismo) 1.13 (Antagonismo) 2.10 (Antagonismo) 1.29 (Antagonismo) Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC 33591 2.02 (Antagonismo) 2.02 (Antagonismo) 2.38 (Antagonismo) 2.38 (Antagonismo) 1.12 (Antagonismo) Staphylococcus aureus (βRSA) ATCC 11632 2.20 (Antagonismo) 1.09 (Aditivo) 2.12 (Antagonismo) 1.30 (Antagonismo) 2.21 (Antagonismo) Nota: a = Aristolochia brevipes, b = Aristolochia orbicularis, c = Bocconia arborea, d = Gentamicina, MRSA = Staphylococcus aureus multiresistente, βRSA = S. aureus resistente a betalactamasa.