Medios de Cultivo.

Debemos de tener en cuenta que las tendencias actuales en microbiología clínica apuntan al desarrollo de métodos rápidos de diagnóstico ( que no dependan del crecimiento microbiano) para determinar la presencia de agentes infecciosos. Sin embargo, el aislamiento y la identificación de los patógenos viables son técnicas irreemplazables para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas.

Medio de Cultivo Es una solución equilibrada de todos los nutrientes y factores de crecimiento necesarios para el desarrollo y la multiplicación de los microorganismos en el laboratorio. El objetivo es aislar las diversas especies, proceder a identificarlas o llevar a cabo estudios complementarios.

La diversidad metabólica de los gérmenes es enorme; hay bacterias que pueden crecer satisfactoriamente en cualquier medio de cultivo; otras necesitan medios especiales y, por último, algunas no crecen en ninguno de los medios desarrollados hasta el momento.

Condiciones que debe reunir Para promover el desarrollo microbiano, los medios de cultivo deben reunir ciertos requisitos: -Contener nutrientes adecuados -Poseer humedad suficiente -Tener un pH ajustado -Estar estéril inicialmente

Existen medios de cultivo comerciales en donde la mayor parte de sus componentes se encuentran previamente mezclados, deshidratados o liofilizados y solo necesitan la adición de agua para su preparación.

Constituyentes habituales Constituyentes habituales. Agua: componente básico y universal para la vida de los microorganismos. Se la utiliza para disolver los demás constituyentes del medio. Extractos: son pulverizados de órganos o de tejidos animales y vegetales ( ej: cerebro, carne, semillas) que brindan hidratos de carbono , compuestos nitrogenados, vitaminas hidrosolubles, compuestos azufrados y sales.

Peptona: es obtenida como producto de la digestión de sustancias proteicas y sirve como fuente de carbono, nitrógeno y energía. Hidratos de carbono: por medio de su degradación enzimática los glúcidos otorgan energía, oxígeno, hidrógeno, y carbono a los microorganismos. El más utilizado es glucosa, pero también se emplean fructosa, sacarosa, lactosa, almidón.

Cloruro de sodio: no es imprescindible, pero su adición regula las propiedades osmóticas del medio con el fin de evitar los fenómenos de plasmólisis. Líquidos corporales: a menudo se añaden a los medios de cultivo sangre entera, plasma o suero sanguíneo estériles, tanto de origen humano como animal; estos líquidos aportan factores de crecimiento esenciales.

Sistemas amortiguadores: consisten en sales, como fosfatos bisódicos o bipotásicos, que son incorporados a los medios de cultivo para mantener el pH dentro del espectro de crecimiento microbiano y como fuente de fósforo. Indicadores de pH: se incorpora a los medios de cultivo para dar prueba visual de las variaciones de pH.

Agentes reductores: se agregan con el fin de crear atmósferas óptimas para el crecimiento de gérmenes microaerófilos, anaerobios facultativos y estrictos. Como ejemplo, podemos citar la cisteína y el tioglicolato de sodio. Agentes selectivos: el cristal violeta, las sales biliares, el telurito de potasio, los antibióticos, agregados al medio lo pueden convertir en selectivo para determinados microorganismos.

Agar: agregado al 1-2% otorga solidez a los medios de cultivo; se lo obtiene de ciertas algas marinas y no es un nutriente, porque resulta resistente a la hidrólisis microbiana. El agar es insoluble en agua fría, funde entre los 80°C , y los 100°C , y se mantiene en este estado hasta los 45°C, temperatura por debajo de la cual comienza a solidificar.

Clasificación de los medios de Cultivo Por su estado físico -Líquidos -Sólidos -Semisólidos Por su origen -Naturales -Sintéticos -Semisintéticos

Por su utilidad -Comunes -Enriquecidos -Selectivos -Diferenciales -De transporte -Especiales ( cultivos celulares)

Clasificación Por su estado físico: Líquidos: se denominan comúnmente caldos , están constituidos por nutrientes en solución acuosa y son semejantes a un caldo casero filtrado y esterilizado. Por lo general se lo utiliza para el mantenimiento de los microorganismos. Ej: caldo nutritivo, infusión cerebro-corazón (BHI)

Sólidos: llamados generalmente agar, se obtiene añadiendo a un medio de cultivo líquido una sustancia gelificante como el agar a 1.5-2% Para su manipulación en el laboratorio estos medios deben colocarse en cajas de Petri o en tubos de ensayo. En estos últimos, el medio de cultivo puede dejarse solidificar con el tubo inclinado para obtener una mayor superficie de siembra( agar inclinado o pico de flauta), o dejarse enfriar con el tubo en posición vertical (agar columna)

Lo medios sólidos se utilizan para aislar e individualizar los distintos tipos de microorganismos presentes en una muestra. Ej: agar sangre, agar BHI Semisólidos: son medios de cultivo líquidos con el agregado de agar al 0.3 o 0.5%.Puede utilizárselos para determinar la motilidad de los gérmenes. Ej: agar blando

Por su origen Medios naturales: se obtienen a partir de sustancias naturales animales o vegetales( Ej: suero, leche, papa, etc) Medios sintéticos o artificiales: son aquellos cuyos componentes están químicamente definidos y contienen nutrientes que permiten el desarrollo de la mayoría de los microorganismos no exigentes sin ofrecerle ventajas especiales a ninguno. Ej: agar nutritivo

Medios semisintéticos o complejos: se obtienen cuando los medios sintéticos se les agregan factores de crecimiento, tales como extracto de levadura, de carne o vegetales; su composición química no se conoce con exactitud, pues varía ligeramente de un lote a otro. Ej: agar y caldo BHI

Por su utilidad Medios generales o comunes: contiene las sustancias nutritivas mínimas para el crecimiento de una gran variedad de microorganismos metabólicamente no exigentes. Pueden ser líquidos (caldos) o sólidos( agar).

Medios enriquecidos: favorecen el crecimiento de muchos microorganismos exigentes en cuanto a sus requerimientos nutritivo se inhiben parcialmente al resto de los gérmenes. Generalmente, llevan el agregado de suero, sangre, glucosa o factores esenciales Ej: agar sangre para estreptococo, agar sangre con hemina y menadiona para bacilos gram negativos.

Agar Chocolate es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo Agar Chocolate  es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos, que han sido lisados por el suave calentamiento a 56 °C. Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como la hematina, componentes que podemos encontrar dentro de los glóbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico para el crecimiento es la lisis de los glóbulos rojos. El agar se llama así debido a su parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.

Medios selectivos: permiten el crecimiento de determinado tipo de microorganismos, mientras que inhibe el desarrollo de la microbiota acompañante en la muestra a estudiar. Esta selectividad se logra: A-)Por el agregado de compuestos químicos (inhibidores, colorantes, antibióticos)en el medio de cultivo. -Medio SS con verde brillante y sales biliares para el crecimiento de Salmonella -Shigella -Medio Sabouraud con cloranfenicol para el aislamiento de hongos.

B-) Por ajustes del pH, como por ejemplo el medio de rogosa con un pH de 5.4 para favorecer el crecimiento de lactobacilos. C-) Por ajuste osmótico empleando medios de cultivo con alto contenido de cloruro de sodio, como por ejemplo el medio manitol-sal que es utiliza para el aislamiento y la identificación de estafilococos.

Medios diferenciales: son aquellos que permiten la diferenciación de colonias de microorganismos semejantes, sobre la base de alguna propiedad bioquímica del germen desarrollado. Por ejemplo, los medios que contienen un azúcar y un colorante( como indicador de pH), si el microorganismo es capaz de fermentar el hidrato de carbono, produce ácidos, que provoca el viraje del indicador. Un ejemplo es el medio base rojo fenol para identificar distintas especies de estreptococos.

Los medios selectivos y diferenciales son aptos para aislar un microorganismo a partir de una muestra clínica. Muchos de estos medios son mixtos (selectivo-diferencial) Ej: agar mitis salivarius , ya que no solo posee inhibidores de la microbiota acompañante ( selectivo)sino que los azúcares lo transforman en diferencial.

El agar MacConkey es un medio de cultivo específico para bacterias gram negativas y cepas que fermenten la lactosa Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).

Medio de transporte: son medios que aseguran la viabilidad de los microorganismos desde el momento de la toma hasta su procesamiento en el laboratorio. Se trata de medios poco nutritivos, líquidos o semisólidos que no deben potenciar el crecimiento microbiano. Ej: Medio Stuart

En Microbiología bucal se puede utilizar el medio de transporte VMGA III para el transporte de muestras de origen periodontal con el fin de asegurar la viabilidad de los microorganismos anaerobios sin permitir su multiplicación.

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