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Herramientas de la Biología Molecular
Material gráfico Secc.Genética Fac. de Ciencias
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Técnicas de manipulación genética
Aislamiento Amplificación Secuenciación Expresión DE GENES
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Los primeros avances 1965 - Arber y col. Enzimas de restricción
Berg. Trabajo con el virus SV40: posibilidad de integrar un fragmento de ADN al genoma de una bacteria (ADN recombinante!) Cohen y Boyer. Primer plásmido recombinante (un gen de anfibio) Moratoria. Conferencia de Asilomar
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BASES FÍSICAS DE LA HERENCIA: CROMATINA Y CROMOSOMAS
REPLICARSE CONTROLAR LA EXPRESIÓN DEL RASGO DE CAMBIAR (POR MUTACIÓN
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ENZIMAS DE RESTRICCION
Arber y col. Smith y Nathan . Premio Nobel Enzima de tipo II. Ej: Eco RI (E.coli cepa RY13) Reconocimiento y corte: GAATTC CTTAAG ----G AATTC--- ----CTTAA G---
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Los vectores Llevan un ADN foráneo
son capaces de ingresar a una célula y replicarse dentro de ella
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Plásmidos * ADN circular extracromosómico
* Se replican autónomamente, utilizando enzimas de la bacteria * No.copias/bacteria: 1 a 3000 * Tamaño pequeño (3 kb) * Inmóviles
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Como vectores * Marcadores * sitio de policlonaje
* segmento del operón lac para una región de la beta glactosidasa * Capacidad 15 kb
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Obtención de ADN en cantidad
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Tipos de ADN a clonar ADN complementario ADN sintético ADN genómico
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GENOTECA: clonado de un juego completo del
genoma de una especie SONDA: ácido nucleico marcado cuya complementariedad localiza una secuencia determinada
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Biblioteca genómica
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Otros vectores en procariotas
* Bacteriófagos. Fago lambda ADN doble cadena de 48,5 kb, con extremos que le permiten circularizarse permiten insertos más grandes * Cósmidos: plásmidos con regiones cos de fagos insertos de kb
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CROMOSOMAS Y CARIOTIPOS
2n = 46 (XX/XY) Cromosomas de tipo metacéntricos submetacéntricos y acrocéntricos. Metafase mitótica humana. Técnica standard, tinción con giemsa
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Podemos conocer la secuencia
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Electroforesis
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Cómo se observa tras la electroforesis
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Ensayo de Southern blot
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PCR Reacción en cadena de la polimerasa Emplea cebadores específicos
Utiliza una polimerasa resistente al calor (Taq) Amplifica exponencialmente una secuencia determinada
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Los glóbulos rojos
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ANEMIA FALCIFORME
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El fenotipo a nivel molecular Resultado de la electroforesis
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La molécula de hemoglobina
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La base molecular de la anemia falciforme
CROMOSOMA 11 GGTCTCCTC El gen ocupa un lugar (LOCUS) en el cromosoma. G G T C T C C C C A G A G G CAC GTG
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