LABORATORIO NACIONAL DE DIAGNÒSTICO VETERINARIO (LNVD)

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1 LABORATORIO NACIONAL DE DIAGNÒSTICO VETERINARIO (LNVD)
Marcela Antolìnez Dra. Maria Cristina Vásquez Directora Practica Industrial Facultad de Bacteriología y Laboratorio Clínico Universidad de Santander UDES

2 BRUCELOSIS Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR) LEUCOSIS BOVINA Diarrea Viral Bovina DVB Tuberculosis Bovina TBC

3 BRUCELOSIS Enfermedad zoonótica, intracelular, afecta a diferentes especies de animales domésticos y silvestres. Barreras en comercialización de los animales y sus productos. Altera desarrollo socioeconómico del sector rural más vulnerable. Distribución mundial. Incidencia variable de unas áreas a otras. Algunos países del centro y del norte de Europa han conseguido su erradicación. En Sudamérica y países mediterráneos, (europeos y africanos) la Enf. continúa siendo frecuente.

4 Brucella spp. División BXII. Proteobacteria
Clase I Alphaproteobacteria Orden I Rhodospirillales Familia II Acetobacteraceae Género I Acetobacter Género IX Gluconobacter Orden II Rickettsiales Familia I Rickettsiaceae Género I Rickettsia Orden VI Rhizobiales Familia I Rhizobiaceae Género I Rhizobium Género II Agrobacterium Familia III Brucellaceae Género I Brucella Brucella spp.

5 POBLACIÒN SUSCEPTIBLE
Consumidores de leche cruda o de subproductos lácteos o cárnicos contaminados con la Brucella. Veterinarios, manejadores de ganado, vacunadores, operarios en matadero. Población infantil rural y urbana marginal Microbiólogos, Bacteriólogos, Auxiliares de laboratorio

6 AGENTE CAUSAL Brucella spp.
Gram negativa, Facultativa, Intracelular Capaz de sobrevivir y multiplicarse en las clls del S. RE No móvil, No esporulado, No posee cápsula Variable en su forma (bacilos muy cortos, cocos o cocobacilos, con una longitud de 0.5 a 0.7 u A por 0.5 a 1.5 L Crece lentamente en medios aeróbicos (parcialmente dependiente de tensiones bajas de CO2) Colonias de tipo mucoso T. Op. crecimiento 37 °C, pH entre 6,6 a 7,4. Es catalasa +, Reacciones bioquímicas según cepa sea lisa o rugosa “A pesar de ser considerado un organismo fastidioso por sus requerimientos en el cultivo puede crecer en medios nutritivos mínimos”

7 Lipopolisacárido (sLPS)
ESPECIES DEL GÉNERO Brucella spp. Brucella melitensis Brucella abortus Especies lisas Brucella maris Brucella suis Brucella neotomae Brucella ovis Brucella canis Especies rugosas Lipopolisacárido (sLPS) Proteínas (porinas)

8 Brucella melitensis Agente responsable de la mayoría de los casos humanos. Biotipos (1-3) La especie más patógena e invasiva en el humano. Afecta comúnmente a las cabras, pero puede afectar a bovinos y cerdos.

9 Brucella abortus Principal responsable de la brucelosis bovina
Ocho biotipos (1-7 y 9) Menor patogenicidad para los humanos. Afecta principalmente a bovinos, puede afectar a búfalos, alces, jabalíes, zorros, caballos, ciervos, camellos, perros y cerdos.

10 Brucella suis Brucella neotomae
Se subdivide en 4 biotipos (1-4). Afecta principalmente a los cerdos. También puede afectar a los humanos. Brucella neotomae Afecta a roedores silvestres “rata del desierto”

11 Brucella ovis Brucella canis
Afecta a ovinos. Estos no se infectan fácilmente con B. abortus pero pueden portarla y excretarla 40 meses después de la infección Brucella canis Afecta a caninos. Su afección en humanos es rara vez reportada.

12 Brucella maris (B. Pinnipediae, B. Cetaceae) no hay reporte de capacidad zoonótica. Ha extendido el rango ecológico

13 HUMANO TRANSMICIÒN RESERVORIO SALVAJE (liebre, rata, jabalí, venado)
RESERVORIO DOMÉSTICO (vaca, búfalo, cabra, cerdo, oveja) Contacto Indirecto Ambiente Contacto Directo LECHE Y DERIVADOS Vía inhalatoria Vía digestiva INGESTIÓN HUMANO

14 PRINCIPAL Y MÁS COMÚN RUTA DE TRANSMISIÓN
Se adquiere por contacto con secreciones infectadas producidas durante los abortos o por ingestión de productos cárnicos o lácticos contaminados

15 BRUCELOSIS BOVINA Enfermedad reproductiva caracterizada por aborto, retención de placenta y problemas de fertilidad en el hospedador principal. Transmisión B. abortus en Bovinos VÌA ORAL: al lamer fetos y descargas genitales de abortos partos e ingestión de pastos contaminados. Exposición in utero o cuando terneros nacidos de vacas sanas, son alimentados con calostro o leche de vacas infectadas Excreción bacterias en descarga vaginal hasta 40 días post exposición y pre-aborto. En secreciones, excreción masiva , hasta por 15 días después del aborto. Después de expulsión de membranas fetales el número de microorganismos eliminados disminuye. La descarga cesa 2-3 meses después de la infección. Quedan portadoras que excretan bacterias intermitentemente por muchos años

16 En los bovinos, puede cursar asintomática o severa
Produce importantes pérdidas económicas: En Colombia se han estimado alrededor de millones de pesos/año. En los bovinos, puede cursar asintomática o severa

17 RESISTENCIA / SUSCEPTIBILIDAD A LA INFECCIÓN
La dosis, raza, edad, sexo, tiempo de gestación, y la resistencia natural a la enfermedad, influencian la evolución de la infección. RESISTENCIA / SUSCEPTIBILIDAD A LA INFECCIÓN Condiciones de supervivencia de Brucella abortus Suelo: frío días Agua: C días Heces: días Desperdicios 12C 1-8 meses Concentrado > 100 días Lana: 12 C 110 días

18 DETECCIÒN DE LA INFECCIÒN
Análisis en suero de hembras >18 meses. Machos > 8 meses Serología para animales en movilización (venta, exportación, ferias, matadero) Si hay reactores positivos aislar y solo movilizar para matadero. Tomar medidas conjuntas para su control y prevención entre Propietario y Veterinario.

19 DIAGNÒSTICO ELISAs indirecta y competitiva Fijación de Complemento
ELISA indirecta en suero y leche en bovinos ELISA competitiva Fijación de complemento Rosa de bengala en sueros PCR (tejidos, leches, cultivos) Cultivo y pruebas bioquímicas: Biología molecular: PCR Detección directa ELISAs indirecta y competitiva Fijación de Complemento Rosa de Bengala Detección indirecta

20 Transmisión BRUCELOSIS HUMANA
Síntomas,1 ~ gripe, puede incluir fiebre, sudoración, cefaleas, mialgias artralgias y debilidad física. Los sistemas osteoarticulares son los más afectados, pero en las fases agudas de la enfermedad, el corazón y el sistema nervioso se pueden afectar. También puede causar síntomas crónicos que incluyen fiebres recurrentes, dolores comunes y fatiga Transmisión Inoculación por cortes o abrasiones de piel en contacto con placenta o secreciones vaginales contaminadas. A través de conjuntivas. Inhalación de aerosoles. Consumo de leche cruda, derivados lácteos no pasteurizados, carne cruda. Inoculación accidental de la vacuna animal C19. Dosis infectiva 10 a 100 bacterias Ha sido sugerida la transmisión sexual .

21 BRUCELLAS QUE CAUSAN LA INFECCIÓN EN HUMANOS
Brucella melitensis Brucella abortus Brucella suis Brucella canis

22 BRUCELOSIS HUMANA Sin tratamiento, la tasa de letalidad es menor al 2% y por lo común, sucede como consecuencia de la endocarditis. Como la duración de la enfermedad varía desde una pocas semanas a varios meses, se necesitan pruebas de laboratorio para confirmar el diagnóstico clínico.

23 DIAGNÒSTICO EN HUMANOS
Cultivo y pruebas bioquímicas: Biología molecular: PCR Detección: Aislamiento Sangre o MO ELISA Competitiva Fijación de Complemento Rosa de Bengala

24 Definición de caso (OMS)
Caso Presuntivo: caso compatible con la descripción clínica, vinculado epidemiológicamente a casos presuntos o confirmados en animales o a productos de origen animal contaminados. Caso Probable: caso presunto con resultado positivo en la prueba de Rosa de Bengala. Caso Confirmado: caso presunto o probable que es confirmado en laboratorio por pruebas F.C’ o ELISA

25 La terapia antibiótica óptima está aún en discusión.
TRATAMIENTO La terapia antibiótica óptima está aún en discusión. Debido a la localización intracelular de la Brucella, se requiere la asociación de varios antimicrobianos durante varias semanas.

26 Exigencia de pasteurización de leche.
CONTROL Y PREVENCIÓN DE BRUCELOSIS EN HUMANOS Control y eliminación de la infección de los reservorios animales. (Resolución ICA ) Exigencia de pasteurización de leche. Métodos diagnósticos sensibles y específicos disponibles

27 CONTROL Y PREVENCIÓN DE BRUCELOSIS EN HUMANOS
Prevención en grupos ocupacionales: capacitación, educación continuada, uso de equipo de protección. Vacunas en humanos tienen eficacia limitada. Las vacunas vivas, se asocian con potencial de reactivación de patogenicidad.

28 TÈCNICAS DE DIAGNOSTICO
Cultivo de especimenes para el aislamiento Cultivo masivo de bacterias para la preparación de reactivos diagnósticos Amplificación de DNA por PCR Cultivos PCR DIRECTAS Rosa de Bengala Fijación de Complemento Elisa Indirecta Elisa Competitiva. INDIRECTAS

29  Positiva: FORMACION DE UNA RED DE AGLUTINACIÓN ROSA DE BENGALA
Antígeno: células completas e inactivadas de Brucella abortus Tinción con el colorante Rosa de Bengala a pH 3 para favorecer la actividad de la IgG1 Anticuerpos anti Brucella abortus presentes en suero  Positiva: FORMACION DE UNA RED DE AGLUTINACIÓN Homogenización e incubación (Antígeno + suero) Negativa: No Formación de la red de aglutinación.

30 FIJACIÓN DE COMPLEMENTO
Antígeno Brucella abortus inactivada Anticuerpos presentes en suero Complemento : factor sérico presente en el suero. Función: lisis del complejo antígeno-anticuerpo. (Fuente: suero de cobayo) Glóbulos Rojos Ovinos (GRO) Hemolisina : anticuerpos anti- GRO

31 Cantidad mínima de anticuerpos detectados: 200 ng/ml
(+) (+) 1:10 (+) 1:20 (-) 1:80 Filas controles GRO+HEM GRO+HEM+S+C’ Cantidad mínima de anticuerpos detectados: 200 ng/ml

32 Antígeno : sLPS de Brucella abortus
ELISA Indirecta Antígeno : sLPS de Brucella abortus Cultivos PCR Anticuerpos : anti sLPS Brucella abortus en suero (o en leche) Conjugado monoclonal: anticuerpo Anti IgG1 bovina unido a peroxidasa Revelador: Substrato (H2O2) + Cromógeno

33 Cultivos PCR

34 ELISA Competitiva Detecta TODOS los isótopos y ayuda a diferenciar entre animal infectado y animal vacunado en reglamentariamente con C19

35 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
Es causada por un herpesvirus (BHV - 1) Es causa también de Vulvovaginitis pustular infecciosa

36 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
Herpesvirus bovino tipo - 1 Se presenta: Como enfermedad fatal en terneros nonatos no protegidos, interesando una o más superficies de mucosas del tracto respiratorio y gastrointestinal, y menos frecuentemente de otros órganos (hígado, bazo, timo y suprarrenales). Con formas abortivas al infectar animales preñados no inmunizados. Como IBR : enfermedad del aparato respiratorio. Como vulvovaginitis pustular infecciosa: También suele provocar pústulas vulvo vaginales, además de conjuntivitis, enteritis y encefalitis.

37 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
Síntomas: Anorexia, fiebre, abundantes secreciones nasales y oculares. Baja producción Láctea La enfermedad comienza con un estado gripal, con descarga nasales e inflamación de conjuntiva. En adultos se limita a la infección de las vías respiratorias, con complicaciones en los animales preñados. Estas afecciones respiratorias, hace a algunos susceptibles a Pasteurella haemolitica, que causa severas neumonías. Las neumonías por pasteurellas son enfermedades muy frecuentes en “feedlots”, y son las que provocan mayores pérdidas en el mercado de la carne.

38 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
Este virus tiene la característica de mantenerse en el bovino en forma activa, es decir, sin causar enfermedad después de una infección inicial. Pero por problemas de estrés puede reactivarse y ser nuevamente excretado. Hecho que sumado a los numerosos reservorios, mantiene la enfermedad en los rebaños. 

39 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
De no producirse infecciones secundarias, la recuperación es rápida. La presencia de IBR en un rodeo predispone a los animales a la infección por otros virus y bacterias, especialmente de Moraxella bovis (causante de queratoconjuntivitis infecciosa), bacteria oportunista que aprovecha la enfermedad causada por IBR para instalarse en la conjuntiva.

40 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación. 

41 Bovino en fase aguda. Secreción nasal cristalina.
IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)    Respiratoria. La más importante por su elevada morbilidad. Fiebre, anorexia, dificultad respiratoria, enrojecimiento de las mucosas nasal es acompañado de secreción, clara al principio y luego mucopurulenta. En algunos casos, acompañada de conjuntivitis, moderada o severa. El aborto puede ser elevado en hembras gestantes, acompañando los signos clínicos o hasta tres o cuatro meses después.  Bovino en fase aguda. Secreción nasal cristalina.

42 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación.  Genital. Caracterizada por enrojecimiento, adema y presencia de pústulas o úlceras mucopurulentas lentas, tanto en la mucosa de la vulva como del pene. Generalmente no acompañada de aborto. 

43 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación.  Ocular: Puede presentarse sola o acompañada de la forma respiratoria. Se observa inflamación y enrojecimiento de la conjuntiva, así como secreción ocular abundante, al principio clara y después mucopurulenta. Puede causar opacidad de la córnea y queratitis. El aborto en algunos casos es elevado. 

44 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
PATOGÉNESIS: Presenta una amplia variedad de signos clínicos, como consecuencia de la acción del virus sobre los sistemas respiratorio, genital, digestivo y nervioso, por lo que se describen cinco formas de presentación.    Nerviosa. Asociada a meningo-encefalitis, mayormente en terneros menores de seis meses, ocasionando ataxia, movimientos frenéticos, salivación profusa, rechinar de dientes, postración y muerte.   Digestiva. Afecta terneros de una a tres semanas, causando fiebre, dificultad respiratoria y diarrea, lesiones necróticas de color blanco aparecen en la mucosa del tracto digestivo. La enfermedad evoluciona en forma aguda con alta mortalidad.

45 IMPACTO – SALUD PÚBLICA
IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA) IMPACTO – SALUD PÚBLICA El hecho de que existan informes de la existencia de anticuerpos precipitantes en ciertos individuos puede ser debido a las relaciones antigénicas existentes entre los virus de la familia Herpetoviridae El hombre es refractario de la Enfermedad Podemos decir que la presencia de Acps neutralizantes contra el virus VHB 1 esta limitada a las especies de la familia Bovidae, y familias cercanas como cervidae la susceptibilidad a la rinotraqueitis parece estar limitada al orden de los artiodáctilos con afinidad especial hacia la tribu de los bovinos

46 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
DIAGNÒSTICO La muestra Suero estéril Técnicas Virusneutralización: Prueba de referencia internacional para la cuantificación de anticuerpos. El sistema utiliza virus de referencia y cultivo de células vivas, las cuales son mezcladas con la muestra de suero. (Exigente en la calidad de la prueba). ELISA I: Utiliza antígeno viral pegado en una placa a la que se le incorpora el suero problema y una enzima, para luego ser revelado mediante la incorporación de un sustrato específico. (Esta admite la utilización de todos los sueros). Los resultados del ELISA nos permiten determinar animales positivos o negativos.

47 IBR (RINOTRAQUEITIS VIRAL BOVINA)
DIAGNÒSTICO Técnicas Aislamiento viral: En caso de encontrarse ante un cuadro clínico agudo se pueden remitir muestras al laboratorio para iniciar la marcha virológica hisopado de conjuntiva y fosas nasales sangre con anticoagulante (EDTA). Esta muestra es aconsejable ante un cuadro febril (viremia). La muestra De necropsia: tonsilas y ganglios nerviosos periféricos a las lesiones observadas, cerebro y ganglio de gasser, ante síntomas nerviosos, riñón, hígado, bazo y pulmón, sangre para extracción de suero o colectas de los exudados de cavidades, feto con membranas.

48 LEUCOSIS BOVINA Virus Puede llegar a infectar a un elevado porcentaje de los bovinos de un establecimiento. Sin embargo sólo un bajo número de ellos, generalmente mayores de tres años, pueden desarrollar síntomas clínicos. Enfermedad caracterizada por la presencia de tumores (linfosarcoma) y es mortal Los bovinos infectados que no desarrollan la enfermedad clínica constituyen la principal fuente de contagio de la infección, puesto que son portadores de por vida del virus. Existen algunas evidencias que las vacas infectadas y sin síntomas clínicos de la enfermedad pueden tener una menor producción de leche y una disminución de la respuesta inmunológica a otras enfermedades. Además, es una limitante para la exportación de vacunos y la comercialización de semen y embriones.

49 LEUCOSIS BOVINA TRANSMICIÒN
Horizontal o Vertical : Bovino a Bovino / Madre a Hijo) Traspaso de glóbulos blancos (linfocitos) infectados con el virus ( [ ] en sangre) Se pueden encontrar linfocitos infectados: en secreciones y fluidos biológicos (sangre, leche, calostro, secreción nasal, saliva, semen y orina ) Riesgo de infección por medio de la realización prácticas como: extracción de sangre, vacunación, castración, descorche, inyección de medicamentos, cirugía, palpación rectal y tatuaje entre otras que se realicen sin respetar las medidas higiénicas. Los artrópodos hematófagos parásitos de los vacunos (tábanos, mosca brava, etc.) podrían ser otra vía de diseminación de la infección. 

50 LEUCOSIS BOVINA

51 LEUCOSIS BOVINA DIAGNÒSTICO
Mientras que el diagnóstico de los bovinos con linfosarcoma es relativamente sencillo para el veterinario clínico, la detección de los animales con linfocitosis persistente y de los bovinos infectados sin signos clínicos requiere de la ayuda del laboratorio.

52 DIAGNÒSTICO (Detección de anticuerpos)
LEUCOSIS BOVINA DIAGNÒSTICO (Detección de anticuerpos) Prueba de inmunodifusión en agar gel (IDA): Sencilla y de uso difundido para la detección de anticuerpos. Limitaciones de la prueba: Detecta la presencia de anticuerpos como mínimo seis semanas después de la infección. No debe ser utilizada para detección de anticuerpos un mes antes del parto. Utilizarla después de los seis meses de edad ( porque antes revela anticuerpos maternos). Se necesitan 48 horas para obtener el resultado. Actualmente es la prueba oficial de SENASA (Servicio de Sanidad Animal y Calidad Agroalimentaria) para la certificación de establecimientos libres de leucosis (resolución 337/94) y para la exportación de ganado en pie.

53 DIAGNÒSTICO (Detección de anticuerpos)
LEUCOSIS BOVINA DIAGNÒSTICO (Detección de anticuerpos) Enzimo-inmunoensayo (test de ELISA): Detectar la presencia de anticuerpos antes que IDA. Se puede realizar en forma automatizada y el resultado se obtiene dentro de las 24 horas. Es reconocida como prueba oficial, para la certificación de establecimientos libres de leucosis. Para el diagnóstico de bovinos con linfocitosis persistente se debe hacer el recuento de glóbulos blancos y la fórmula leucocitaria relativa en la sangre de los animales con serología positiva. Aquellos que presenten un marcado incremento en el número de linfocitos, indicaría mayor capacidad para dispersar la enfermedad. Este sería un método complementario de la detección de anticuerpos para definir la eliminación de animales infectados.

54 DIAGNÒSTICO ( Detección de l virus)
LEUCOSIS BOVINA DIAGNÒSTICO ( Detección de l virus) Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Esta técnica permite detectar la presencia del ADN del virus en la sangre; con anterioridad a la detección de anticuerpos. Su alto costo y complejidad la restringe a ser utilizada en trabajos de investigación.

55 DVB (DIARREA VIRAL BOVINA)
Taxonomía Género Pestivirus Familia Flaviviridae 19. Virus envueltos, esféricos y miden 40 a 60 nm de diámetro. Se componen de una cadena simple de ARN compactado por una cápside proteica, rodeada por una membrana fosfolipídica con tres glicoproteínas ancladas a ella.

56 DVB (DIARREA VIRAL BOVINA)
Hospedador. Los Pestivirus infectan naturalmente sólo a los ungulados del Orden Artiodáctila. (porcinos, bovinos, ovinos, caprinos, alpacas, llamas, camellos, búfalos de agua y rumiantes silvestres).

57 DVB (DIARREA VIRAL BOVINA)
Fuente de infección. La principal fuente de infección y reservorio del virus en la naturaleza son los bovinos. Ellos eliminan continuamente durante toda su vida grandes cantidades del virus en secreción nasal, saliva, orina, materia fecal, lágrimas, semen y leche. Los animales con infección aguda también son fuente de infección; aunque menos eficiente, ya que eliminan el virus en cantidades más bajas y por cortos períodos

58 DVB (DIARREA VIRAL BOVINA)
Fuente de infección. Transmisión vertical. La infección transplacentaria ocurre en hembras susceptibles infectadas durante la preñez. Si el feto es infectado antes de adquirir competencia inmunológica (antes del día 125 de gestación, aproximadamente) desarrollará una infección persistente, Pese a la eleva tasa de mortalidad de los animales en su primer año de vida (más de 50%), muchos alcanzan la madurez sexual y se reproducen.

59 DVB (DIARREA VIRAL BOVINA)
Transmisión horizontal. El contacto directo con animales, especialmente contacto nariz–nariz. El contacto directo con animales que cursan una infección aguda también puede transmitir el virus. Aunque la transmisión aerógena no es la principal ruta de transmisión, puede tener consecuencias graves cuando cepas de alta virulencia afectan a poblaciones susceptibles y con alta densidad animal. Igualmente la infección se puede dar por contacto con : Semen crudo o criopreservado de toros infectados. Transmisión indirecta: uso de agujas, mocheta, palpación rectal y la acción de insectos hematófagos, minutos después de haber estado en contacto con animales infectados. (su importancia aún no está clarificada, ya que es un virus que se inactiva fácilmente) Uso de vacunas vivas, semen contaminado, cohabitación con ovinos, transferencia embrionaria y el contacto con bovinos con infección aguda

60 DVB (DIARREA VIRAL BOVINA)
MANIFESTACIONES CLÍNICAS Y PATOGENIA El vDVB es responsable de originar un amplio rango de manifestaciones clínicas y lesiones como resultado de la interacción de factores tales como: cepa y biotipo viral, edad y estado inmune del hospedador, respuesta inmune inducida, factores estresantes y otros patógenos concurrentes. Diarrea viral bovina aguda. Infección subclínica. Complejo diarrea neonatal bovina. Infección aguda severa Síndrome hemorrágico Inmunodepresión. Enfermedades respiratorias. Trastornos reproductivos.

61 DVB (DIARREA VIRAL BOVINA)
DIAGNÒSTICO Únicamente aislamiento del virus o detección del antígeno viral específico Técnicas Aislamiento viral. Detección de antígenos mediante enzimo–inmunoensayo (ELISA). Detección de antígenos mediante inmunohistoquímica (IHQ).

62 TBC BOVINA Enfermedad infecto-contagiosa crónica causada por bacterias del genero Mycobacterium. Es una de las enfermedades más importantes del ganado bovino, tanto por su impacto en salud pública como por sus consecuencias económicas para un país. Su incidencia limita el desarrollo de la ganadería y sus productos asociados, incluyendo las exportaciones.

63 TBC BOVINA IMPACTO SOCIAL
De acuerdo con lo informado recientemente por la Organización Mundial de la Salud, el número de casos de tuberculosis, en el hombre, supera los 8 millones al año y va en aumento. Los programas de control y eliminación de animales infectados, junto con la pasteurización de la leche, han reducido drásticamente la incidencia de la enfermedad causada por M. bovis, tanto en el hombre como en los animales. Sin embargo, este patógeno está presente en animales de países en desarrollo donde no existen medidas de control adecuadas.

64 TBC BOVINA AGENTE CAUSAL
Mycobacterium bovis Afecta, además del bovino, a varias especies animales como caprinos, ovinos cerdos, perros, gatos, monos y al hombre por lo tanto es una enfermedad zoonotica. Otras micobacterias, como el M. tuberculosis (humano) y el M. avium (aviar), también pueden infectar al bovino. Las micobacterias son sensibles a los desinfectantes a base de fenoles, y son resistentes al medio ambiente y a los desinfectantes solubles en el agua.

65 TBC BOVINA SINTOMATOLOGIA Generalmente tiene un curso crónico
Síntomas variados afectados. La pérdida progresiva de peso y la reducción en la producción de leche o carne son constantes. Con alguna frecuencia se observa una tumefacción no dolorosa de los ganglios explorables clínicamente Cuando hay infección hepática o intestinal se presenta diarrea, al igual que infertilidad por endometritis Algunas veces la tuberculosis pulmonar cursa con signos respiratorios inespecíficos como tos crónica, casi nunca fuerte, sin mucha fuerza. Las lesiones predominan en pulmón y ganglios linfáticos, en forma de nódulos o granulomas o tubérculos de material purulento-caseoso

66 TBC BOVINA La eliminación del M. bovis por parte de los animales afectados es intermitente. Puede suceder en las etapas tempranas de la enfermedad, cuando aún no son detectables por la prueba de diagnóstico. Vía más frecuente (80 a 90%) de infección: vía aerógena. Aerosoles, toses y secreciones de animales enfermos que expelen gran cantidad de microgotitas que contienen la bacteria. Vía digestiva (10 a 20% de los casos): por el consumo de pastos y alimentos contaminados con secreciones nasales, materia fecal y orina que contienen el agente causal.

67 TBC BOVINA Otras vías no usuales pero probables son: la vía cutánea, congénita y genital. Vía congénita (madre-feto) puede ocurrir hasta en 5% de las vacas afectadas Vía genital, los toros se infectan sirviendo vacas con metritis tuberculosa La transmisión más importante se produce por medio de la inseminación artificial, al utilizar semen de toros infectados

68 ¿POR QUÉ CONTROLAR LA ENFERMEDAD?
TBC BOVINA ¿POR QUÉ CONTROLAR LA ENFERMEDAD?    Hay tres razones claves para controlar y/o erradicar la TBC: Porque se transmiten al hombre, principalmente a los que trabajan en contacto con animales infectados (veterinarios, trabajadores rurales y personal de frigoríficos). Porque limitan el comercio internacional de productos cárnicos y lácteos, influyendo negativamente en la rentabilidad de las explotaciones. Porque estas enfermedades generan importantes pérdidas económicas en la producción de carne y leche.

69 TBC BOVINA DIAGNÒSTICO METODOS DIRECTOS
En las plantas de sacrificio la inspección de canales es una actividad básica en la vigilancia epidemiológica de la tuberculosis bovina, ya que es allí donde se detectan en los bovinos las lesiones macroscópicas que se ven a simple vista. La presencia de tumoraciones en los diferentes órganos El foco de necrosis presenta una coloración amarillenta con apariencia caseificada y es posible detectar la presencia de calcio; durante la necropsia se perciben como pequeñas granulaciones blanquecinas que crepitan al cortar con el cuchillo. También puede observarse exudado de apariencia purulenta en meninges. Ganglios medianísticos medios aumentados de tamaño y múltiples tubérculos pequeños de tipo caseoso

70 TBC BOVINA DIAGNÒSTICO
Coloración de Ziehl Nielsen: identifica la presencia de bacilos acido alcohol resistentes, no formadores de esporas inmóviles y no encapsulados, características del género Mycobacterium. Histopatalogía, proporciona resultados presuntivos. En cualquiera de las formas en que se presenta la tuberculosis, esta se caracteriza por la formación de granulomas. Se pueden detectar bacilos ácido alcohol resistentes libres en el citoplasma de los macrófagos, histiocitos y células gigantes de la lesión granulomatosa. METODOS DIRECTOS

71 TBC BOVINA DIAGNÒSTICO METODOS DIRECTOS
El cultivo bacteriológico proporciona el diagnóstico definitivo de la enfermedad. Las micobacterias son aerobios obligados que crecen en medios sintéticos simples, pero para el aislamiento primario a partir de muestras clínicas se requiere de un medio más complejo como el medio Löwestein-Jensen, o como el medio Middlebrook. El cultivo dura de 3 a 6 semanas en desarrollarse, las colonias son pequeñas, secas y con aspecto escamoso. El material requerido para aislar el M. bovis debe ser ganglios, pulmones, hígado, bazo, riñón, pleura o cualquier otro tejido donde se aprecien las lesiones características.

72 TBC BOVINA DIAGNÒSTICO METODOS NDIRECTOS
Evalúan la Rta mediada por células. El PPD bovino es un derivado proteico purificado producido a partir de cultivos inactivados de Mycobacterium bovis. Prueba Tuberculinica Cervical Simple: consiste en la inoculación intradérmica de 0,1 ml de PPD bovina, previa limpieza con un producto no-irritante, en el tercio medio del cuello, previo corte de pelo a maquina o tijera en el lugar de inyección, en una superficie de 5 a 6 cm. La lectura se hace a las 72 horas (más o menos 6 horas). Las reacciones se consideran negativas cuando no se observa ni palpa ningún cambio en la piel del sitio de aplicación y reactoras cuando es visible y/o palpable un engrosamiento de 4-5 mm.

73 TBC BOVINA DIAGNÒSTICO METODOS NDIRECTOS
Prueba Tuberculinica Ano-Caudal: Eesta prueba se realiza en el pliegue ano-caudal interno a unos 6 cm. de la base de la cola y en el en el tercio medio del pliegue ano-caudal interno. Esta zona es menos sensible a la tuberculina que la piel del cuello. Se inyectan 0.1 ml de PPD bovina, previa limpieza con un producto no-irritante. La lectura se hace a las 72 horas (más o menos 6 horas). Las reacciones se consideran negativas cuando no se observa ni palpa ningún cambio en la piel del sitio de aplicación y reactoras cuando es visible y/o palpable un engrosamiento de 4-5 mm.

74 TBC BOVINA DIAGNÒSTICO METODOS NDIRECTOS
Prueba tuberculínica comparativa: La prueba intradérmica comparativa se utiliza para la realización de un diagnostico diferencial entre animales infectados por Mycobacterium bovis y aquellos sensibilizados a la tuberculina por exposición a otras micobacterias. Esta prueba consiste en la inyección de tuberculina bovina y tuberculina aviar, previa limpieza con un producto no irritante, en diferentes puntos del cuello y en la subsiguiente evaluación de la respuesta transcurridas 72 horas. Para esta prueba comparativa la dosis de tuberculina no debe ser inferior a UI de tuberculina bovina ni a 2.00 UI de tuberculina aviar. La distancia entre ambas inyecciones debe ser de aproximadamente 12 a 15 cm. Un animal se considera positivo cuando en la zona de inyección de la tuberculina bovina hay una reacción de 4mm mayor que la tuberculina aviar y se considera dudoso cuando esa reacción es entre 1 y 4mm mayor que la tuberculina aviar. El animal es negativo cuando no hay reacción o cuando la reacción es igual o menor que la tuberculina aviar.

75 TBC BOVINA DIAGNÒSTICO
Otras pruebas que estudian la respuesta de tipo celular detectando la presencia de citocinas circulantes incluyen: METODOS NDIRECTOS La prueba de gamma-Interferón Se realiza con sangre completa y tiene mayor sensibilidad y especificidad que la intradermo reacción. Se emplean los mismos antígenos (PPD) y detecta el mismo grupo de animales infectados. Las ventajas con respecto a la intradermo reacción es que el animal se maneja sólo una vez. Los inconvenientes son su costo y la necesidad de procesar la sangre inmediatamente después de su extracción. Prueba de ELISA Indirecta Detección de anticuerpos séricos. Posee baja sensibilidad, pero es muy fiable en la detección de vacas "anérgicas" a las pruebas de la tuberculina y gamma-Interferón.

76 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
TBC BOVINA DIAGNÒSTICO METODOS NDIRECTOS Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Amplificación de secuencias génicas, Su eficacia radica en la rápida identificación de patógenos de difícil cultivo. En ese contexto, el desarrollo de un procedimiento que identifica directamente M. bovis en muestras de tejido y secreción proveniente de animales tuberculosos debe ser el objetivo de todos los países.

77 GRACIAS

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