Tema 29. Ingeniería genética

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1 Tema 29. Ingeniería genética
Tecnología del DNA recombinante: capacidad para crear y analizar moléculas de DNA recombinante -> nueva era de la genética molecular Def DNA recombinante Técnicas y aplicaciones tema 29 (13 páginas)

2 Técnicas y estrategias
Definición crear y analizar DNA recombinante Técnicas y estrategias 1. enzimas de restricción y vectores 2. construcción del DNA recombinante 3. clonación y obtención de un clon 4. caracterización y análisis del fragmento clonado 5. mapas de restricción, Southern (electroforesis e hibridación), PCR, RFLP, VNTR, secuenciación, transgénicos Clon: amplificación (muchas copias) de un fragmento deseado (clon!, todas las copias iguales) Obtención de un clon: identificación y aislamiento tema 29 (13 páginas)

3 Aplicaciones de la Ingeniería Genética 1
Aplicaciones de la Ingeniería Genética 1. Estudio del material genético: organización, estructura, expresión y evolución 2. Producción de proteínas humanas/animales en bacterias: insulina, interferón, factores coagulantes, vacunas 3. Organismos transgénicos: levaduras, plantas y vertebrados 4. Humanos: identificación de individuos (genética forense); detección de enfermedades genéticas; terapia génica 5. Medio ambiente: biorremediación (petróleo), metales pesados Interferon. Diversos agentes pueden inducir la síntesis y secreción de IFN. Los virus son los más potentes inductores de la expresión de los genes de IFN. El estímulo principal para su producción parece ser la formación de RNA viral de doble cadena durante la replicación viral dentro de la célula. Por eso los virus DNA, por regla general, son inductores menos potentes de la síntesis de IFN que los virus RNA. Parece ser que otras moléculas generadas durante la replicación viral también pueden inducir la transcripción de los genes del IFN. Las infecciones por bacterias (especialmente aquellas que se replican dentro de las células), micoplasmas y protozoos también pueden inducir la síntesis de IFN. También pueden inducir síntesis de IFN ciertas citoquinas y factores de crecimiento como el factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), factores estimuladores de colonias (CSF-1), interleucinas 1 y 2 (IL-1, IL-2) y el factor de necrosis tumoral (TNF)8. En ocasiones, incluso el IFN beta puede inducir la producción de IFN gamma. Virtualmente toda célula nucleada puede producir IFN alfa o IFN beta. No obstante, los principales productores de IFN-a son los linfocitos B, los linfocitos natural killer (NK) y los macrófagos. Los principales productores de IFN-b son los fibroblastos, las células epiteliales y los macrófagos. Las únicas células productores conocidas de IFN-g son los linfocitos T, los macrófagos y las células NK. Los IFN poseen efectos antivirales, antiproliferativos e inmunomoduladores. Dichos efectos vienen determinados por la acción de diversas proteínas sintetizadas en las células una vez los IFN han interaccionado con sus receptores, tal y como se ha descrito en el apartado anterior. tema 29 (13 páginas)

4 enzima de restricción (tipo II)
(sitio de restricción) palíndromo (4-8 pb) extremos de secuencias específicas Tijeras moleculares! RE tipo II (aprox 98% de RE conocidas): reconocen y cortan SITIOS DE RESTRICCION y dejan extremos de sec específicas Palíndromo: sec con un eje de simetria rotacional; sec repetidas e invertidas RE tipo I (aprox 1%), reconocen y cortan en otra sec alejada unos 1000 pb RE tipo III: cortan a pb del sitio que reconocen Figure: The Restriction Enzyme EcoRI The restriction enzyme Eco RI recognizes and binds to the palindromic nucleotide sequence GAATTC. Cleavage of the DNA at this site produces complementary single-stranded tails. These single-stranded tails can anneal with single-stranded tails from other DNA fragments to form recombinant DNA molecules. tema 29 (13 páginas)

5 sistemas de modificación y restricción
Modificación: generalmente metilación Tres sistemas de metilación en E. coli: dam, hsd y dcm Descubrimiento: años ‘50s en estudios con fagos tema 29 (13 páginas)

6 Arber: Suiza Nathans y Smith: USA
Publicación en > PN en 1978 => desarrollo de la tecnología de IngGenética! Hamilton Smith was studying how Haemophilus influenzae defend themselves from bacteriophage attack. Discovered that bacteria have an enzyme that chops up viral DNA Restriction enzymes cut DNA at a specific sequence. Number of cuts made in DNA will depend on number of times the “target” sequence occurs tema 29 (13 páginas)

7 enzimas de restricción o endonucleasas de restricción (I)
Figure: 17-03a. Restriction Enzymes Some common restriction enzymes, with their recognition sequences, cutting sites, cleavage patterns, and sources. extremos cohesivos, escalonados en bisel o pegajosos tema 29 (13 páginas)

8 enzimas de restricción o endonucleasas de restricción (II)
Hay unas RE que reconocen mas de 200 secuencias (muchas son isoesquizomeros) Figure: 17-03b. Restriction Enzymes Some common restriction enzymes, with their recognition sequences, cutting sites, cleavage patterns, and sources. extremos romos tema 29 (13 páginas)

9 corte y unión Figure: 17-02 Title: DNA Ligase Caption:
DNA from different sources is cleaved with Eco RI and mixed to allow annealing to form recombinant molecules. The enzyme DNA ligase then chemically bonds these annealed fragments into an intact recombinant DNA molecule. tema 29 (13 páginas)

10 vectores de clonación Moléculas pequeñas y bien caracterizadas
Contienen: - un origen de replicación autónomo - sitios de corte únicos para enzimas de restricción marcador de selección Fácil recuperación de la molécula híbrida tema 29 (13 páginas)

11 plásmidos 20-100 copias/célula fragmento clonado: 5-10 Kpb
Vectores de clonación o moléculas transportadoras de DNA: mantienen y amplifican el fragmento clonado (se replican y aumentan en número) Caracteristicas: Pequeños y bien caracterizados Contienen: un origen de repli; sitios de cortes (RE) únicos; marcador (R a Abo gen que complementa a bacteria) Fáciles de recuperar tema 29 (13 páginas)

12 fagos 15-20 Kpb Lambda genoma: 45 kpb
Porción central de su genoma, no es necesaria parasu replicación (infección y formación de calvas) Figure: Phage Lambda as a Vector Phage lambda as a vector. DNA is extracted from the phage, the central gene cluster is removed, and the DNA to be cloned is ligated into the arms of the phage lambda chromosome. The recombinant chromosome is then packaged into phage proteins to form a recombinant virus. 15-20 Kpb tema 29 (13 páginas)

13 cósmidos Híbrido entre plásmido y fago: ‘in vivo’ se mantiene como plásmido; ‘in vitro’ se empaqueta como fago Fragmento clonado: hasta 45 Kpb BAC: vectores para cartografiar y analizar genomas eucarióticos complejos Vectores de expresión vs vectores transbordadores Vector de expresión: señales de transcripción y traducción Plásmidos bifuncionales: con orígenes de replicación de procariotas (pBR322) y eucariotas (SV40) fagos de una cadena Infección: 1 cadena; replicación: 2 cadenas (≈ plásmidos) Útiles: secuenciación y mutagénesis Ej: el más usado M13 BAC: cromosomas artificiales bacterianos Basados en plásmido F (genes de replicación y control de número de copias) Vectores de expresión: sitios de restricción flanqueados por promotores tema 29 (13 páginas)

14 cromosomas artificiales de levadura (YAC)
Plásmidos bifuncionales: con orígenes de replicación de procariotas (pBR322) y eucariotas (SV40) Huésped eucariótico: estudio de expresión de genes eucarióticos -> levadura: euc y microorganismo bien estudiado Tb hongos y tejidos de plantas y animales Vectores levaduras: plásmido 2 micras: plasmido de levadura y se combina con plasm bacteriano YACs: utilizados para hacer mapas físicos, incluidos el del genoma humano Figure: The Yeast Artificial Chromosome pYAC3 The yeast artificial chromosome pYAC3 contains telomere sequences (TEL), a centromere (CEN4) derived from yeast chromosome 4, and an origin of replication (ori). These elements give the cloning vector the properties of a chromosome. TRP1, and URA3 are yeast genes that are selectable markers for the left and right arms of the chromosome. Within the SUP4 gene is a restriction site for the enzyme SnaB1. Two BamH1 restriction sites flank a spacer segment. Cleavage with SnaB1 and BamH1 breaks the artificial chromosome into two arms. The DNA to be cloned is treated with SnaB1 producing a collection of fragments. The arms and fragments are ligated together, and the artificial chromosome is inserted into yeast host cells. Because yeast chromosomes are large, the artificial chromosome accepts inserts in the million base-pair range. tema 29 (13 páginas)

15 preparación de fragmentos a clonar extremos cohesivos extremos romos: ligasa de T4 puede unir o uso de conectores adición de colas a extremos romos: desoxinucleotidil transferasa terminal de timo de ternera en extremos 3’ (tras digestión de 5’ con una exonucleasa). Uso de colas poliA/poliG y poliT/poliC (fragmento y vector) tema 29 (13 páginas)

16 clonación en E. coli Vectores: plásmidos, fagos y cósmidos
En Bacillus y Streptomyces similar a E. coli Figure: Cloning with a Plasmid Vector Cloning with a plasmid vector involves cutting both plasmid and the DNA to be cloned with the same restriction enzyme. The DNA to be cloned is spliced into the vector and transferred to a bacterial host for replication. tema 29 (13 páginas)

17 selección de plásmidos recombinantes
pBR322 pUC18 selección de plásmidos recombinantes: RASTREO o CRIBADO pBR322: R a Ab en dos pasos pUC18: X-gal un paso tema 29 (13 páginas)

18 selección del clon deseado (I)
Suzuki, Fig tema 29 (13 páginas)

19 selección del clon deseado (II)
Figure: 17-13a. Screening a Plasmid Library Illustrated procedure for screening a plasmid library to recover a cloned gene. Hybridization events are seen as spots on the film, and colonies containing the insert that hybridized to the probe are identified from the orientation of the spots; cells are selected from this colony for growth and further analysis. tema 29 (13 páginas)

20 selección del clon deseado (III)
Figure: 17-13b. Screening a Plasmid Library Illustrated procedure for screening a plasmid library to recover a cloned gene. Hybridization events are seen as spots on the film, and colonies containing the insert that hybridized to the probe are identified from the orientation of the spots; cells are selected from this colony for growth and further analysis. tema 29 (13 páginas)

21 mapa de restricción (I)
Análisis de las secuencias clonadas: Rmap = cartografia de restricción -> mapas físicos de caracterización de las sec clonadas Puntos de corte de RE son marcadores genéticos del DNA Mapa de restricción: recopilación del número, orden y distancia de los sitios de corte con RE de una molécula de DNA Aplicaciones: estructura de gen y vector para clonar refinar mapas genéticos; determinar intrón/exón (gen y cDNA); wt vs mutante (determinar enfermedades by RFLP) Figure: 17-15a. Restriction Map In this illustration, samples of a 7.0-kb cloned DNA fragment are used to construct a restriction map. Models are constructed to predict the fragment sizes that will be generated by cutting with restriction enzymes. Comparing the predicted fragments with those observed on the gel indicates the correct restriction map. caracterización de las secuencias clonadas tema 29 (13 páginas)

22 mapa de restricción (II)
model 1 model 2 Figure: 17-15b. Restriction Map In this illustration, samples of a 7.0-kb cloned DNA fragment are used to construct a restriction map. Models are constructed to predict the fragment sizes that will be generated by cutting with restriction enzymes. Comparing the predicted fragments with those observed on the gel indicates the correct restriction map. Aplicaciones: estructura de gen y vector para clonar refinar mapas genéticos; determinar intrón/exón (gen y cDNA); wt vs mutante (determinar enfermedades by RFLP) mapa de restricción: recopilación del número, orden y distancias entre los sitios de corte de enzimas de restricción de una molécula o segmento de DNA tema 29 (13 páginas)

23 síntesis de cDNA a partir de mRNA Suzuki. Fig.12.09.
Síntesis de cDNA de cadena doble, a partir de mRNA NaOH degrada el mRNA tema 29 (13 páginas)

24 Southern Edward Southern, 70’s
Southern: electroforesis + transferencia a mb de nitrocelulosa o naylon (DNA1c) + hibridación. The technique was invented in mid-1970s by Edward Southern Para: identificación de genes clonados, localización de secuencias (codificantes y/o reguladoras), organización molecular de secuencias Following gel electrophoresis, probes are often used to detect specific molecules from the mixture. However, probes cannot be applied directly to the gel. The problem can be solved by three types of blotting methods: Southern blotting, Northern blotting and Western blotting. Southern blotting Southern blotting is a technique for detecting specific DNA fragments in a complex mixture. The technique was invented in mid-1970s by Edward Southern. It has been applied to detect Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) and Variable Number of Tandem Repeat Polymorphism (VNTR). The latter is the basis of DNA fingerprinting. Identificación de las secuencias clonadas tema 29 (13 páginas)

25 Southern, Northern y Western
Northern: para saber si un gen se está expresando en una célula o tejido (estudios de expresión génica en tejidos embrionarios o adultos) tema 29 (13 páginas)

26 PCR PCR: reacción en cadena de la polimerasa, 1986; Mullis PN 1993
Desnaturalización: ºC Unión de cebadores: 30-65ºC Polimerización: 60-70ºC Se utiliza para : - conseguir grandes cantidades de un fragmento específico se puede partir de muy poco DNA y este DNA no estar totalmente limpio => fotocopiadora molecular! Areas de uso: investigación biologia molecular, evolución molecular, genética forense, paternidad, clinica, diagnostco prenatal, arqueología, control de alimentos tema 29 (13 páginas)

27 Polimerasa Taq de Thermus aquaticus
Kary B. Mullis: 1/2 of the prize. La Jolla, CA, USA Michael Smith: 1/2 of the prize. Canada University of British Columbia. Vancouver, Canada "for his fundamental contributions to the establishment of oligonucleotide-based, site-directed mutagenesis and its development for protein studies” Polymerase chain reaction is one of the most powerful molecular biology techniques developed to date for DNA amplification and investigation. The procedure amplifies minute or trace amounts of DNA by multiple cycles of cooling and heating in a reaction catalyzed by a heat stable DNA polymerase enzyme. Numerous copies of the target DNA can be made in a relatively short time. The DNA produced can be sequenced, analyzed, mapped with endonucleases, separated by electrophoresis, cloned,and characterized. Yellowston Nat ParK: manantiales donde habita Thermus aquaticus, de donde se extrae la Taq Old Faithful Geyser - Yellowstone National Park. An alien and inhospitable place, characterized by extreme heat, spewing steam into the frigid air ‚ such is the scene of old faithful geyser in Yellowstone National park. This seemingly prohibitive habitat is home to Thermus aquaticus, the bacterium from which the heat stable DNA polymerase essential to PCR is obtained. Polimerasa Taq de Thermus aquaticus tema 29 (13 páginas)

28 tema 29 (13 páginas)

29 RFLP: polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción
SNPs (single-nucleotide polymorphisms) that create or destroy restriction sites lead to RFLPs (restriction fragment length polymorphisms) detectable by gel electrophoresis. The outside lanes are molecular size standards. Lanes 2 & 5 show the typical pattern of a single 8 Kbp fragment. Lanes 1 & 3 show two variants that result from the presence of an additional restriction site. Lane 4 shows a variant of the genotype in Lane 3, due to an extra restriction site. [The restriction maps shown at right cannot be reconstructed from the gel data shown, but could be mapped with reference to data from other restriction enzymes]. tema 29 (13 páginas)

30 Aplicaciones RFLP: - mapeo cromosómico - diagnóstico de
Aplicaciones RFLP: - mapeo cromosómico - diagnóstico de enfermedades - pruebas de paternidad - genética forense Polymorphisms in the lengths of particular restriction fragments can be used as molecular markers on the genetic chromosome. * DNA preparations of ten individuals of a population of hypothetical yum-yum trees were restricted, the products electrophoresed and Southern blotted. The blot was probed by hybridization with a cloned fragment of the tree's genome. * For this particular combination of restriction enzyme and hybridization probe, the pattern of hybridizing bands shown above was obtained. * The length of the restriction fragments recognized by the probe is dimorphic in this population. Other probe--restriction enzyme combinations may identify more than two differently sized fragments. Whenever the recognized fragments are of non-identical lengths, we say the lengths are polymorphic. The phenomenon is known as restriction fragment length polymorphism (RFLP). * Probes to repeated sequences usually reveal polymorphisms. Slight but unique differences in the banding pattern of DNA fragments from different individuals of a species are observed when subjected to restriction enzyme analysis. These variations in the DNA are called restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) and are used as markers on both physical and genetic linkage maps. Such differences in the RFLP profiles have revolutionized criminal investigations and have become powerful tools in the identification of individuals in paternity and maternity cases, population genetics, and in the diagnosis of a variety of diseases. More recently, polymerase chain reaction (PCR)-based tests have been used to obtain a DNA profile. Such tests are generally less involved, providing rapid results that can serve as an alternative or as a complement to RFLP tests. (ex: VNTR) The practical applications of RFLP analysis, coupled with the use of PCR-amplified products the VNTR locus D1S80, are emphasized in selected topics for the forensic and research scientist as well as for those in the legal community. Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) resulting from b-globin gene mutation. In the normal cell, the sequence corresponding to 5th to 7th amino acids of the b-globin peptide is CCTGAGGAG, which can be recognized by the restriction enzyme MstII. In the sickle cell, one base is mutated from A to T, making the site unrecognizable by MstII. Thus, MstII will generate 0.2 kb and 1.2 kb fragments in the normal cell, but generate 1.4 kb fragment in the sickle cell. These different fragments can be detected by southern blotting. tema 29 (13 páginas)

31 Otro ejemplo: anemia falciforme (gen de la beta-globina)
Otro ejemplo: anemia falciforme (gen de la beta-globina). El cambio de base A-T que causa la anemia elimina un sitio MstII que está presente en el gen normal de la beta-globina. tema 29 (13 páginas)

32 sospechosos muestra tema 29 (13 páginas)

33 VNTR: repeticiones en tándem de número variable
VNTR un tipo de RFLP, pero no estrictamente lo mismo. Sólo hace falta hacer un PCR! En lugar de Southern! # VNTR's are used in DNA fingerprinting: analisi forense y pruebas de paternidad # PCR has supplanted RFLP by Southern blotting and hybridization in analysis of VNTR's. Polymorphisms in the lengths of tandemly repeated short sequences can be used as molecular markers on the genetic chromosome. The term VNTR refers to the variable sequence rather than to the method used to detect it. In the description above, RFLP is used to detect the variability in the number of repeats. Several PCR-based methods can also be used to detect VNTR's. * Short identical segments of DNA aligned head to tail in a repeating fashion are interspersed in the human genome. * The numer of repeated segments at a locus varies between individuals. Such sequence regions are called VNTR's (variable number of tandem repeats). * Some VNTR sequence segments are found at only a single locus in the human genome. Probes made of these sequences are single locus probes and yield patterns such as those at left when used to probe RFLP blots of DNAs of six individuals. * Other VNTR sequence segments occur at many loci in the human genome. These loci are dispersed among the chromosomes. Multi-locus VNTR probes yield patterns such as those at right. Aplicaciones VNTR: - pruebas de paternidad - genética forense - evolución de poblaciones tema 29 (13 páginas)

34 VNTR: pruebas de paternidad
VNTR un tipo de RFLP, pero no estrictamente lo mismo. Sólo hace falta hacer un PCR! En lugar de Southern! DNA satélite: en ciertas zonas de varios cromosomas y en centrómeros y telómeros tema 29 (13 páginas)

35 secuenciación (método Sanger)
Figure: DNA Sequencing Using the Chain-termination Method Illustration of DNA sequencing using the chain-termination method. Here, ddATP and the A inserted from this dideoxynucleotide are indicated with an asterisk. Over the course of the reaction, all possible termination sites will have a ddNTP inserted. Chains terminating in A are loaded in the A lane, those ending in C are loaded in the C lane, and so forth during electrophoresis. tema 29 (13 páginas)

36 gel de secuenciación Secuencia obtenida (leída de abajo hacia arriba):
Aplicaciones de la secuenciación: estudio de los genes a nivel de - estructura y función - evolución (bases de datos) Figure: DNA Sequencing Gel por el método de Sanger DNA sequencing gel showing the separation of fragments in the four sequencing reactions (one per lane) of Figure To obtain the base sequence of the DNA fragment, the gel is read from the bottom, beginning with the lowest band in any lane, then the next lowest, then the next, and so on. For example, the sequence of the DNA on this gel begins with CATGTCAGCTGT… . (Dr. Suzanne McCutcheon) Secuencia obtenida (leída de abajo hacia arriba): CATGTCAGCTGT… tema 29 (13 páginas)

37 secuenciación automática
Figure: DNA Sequencing Using Labeled Dideoxynucleotides In DNA sequencing using dideoxynucleotides labeled with fluorescent dyes, the bands are read by a detector and imaging system. This process is automated, and robotic machines sequence several hundred thousand nucleotides in a 24-hour period, then store and analyze the data automatically. tema 29 (13 páginas)

38 secuenciación automática
Figure: Automated DNA Sequencing Automated DNA sequencing using fluorescent dyes, one for each base. Each peak represents the correct nucleotide in the sequence. Numbers indicate length of the sequence. The separated bases are read in order along the axis from left to right. La secuencia de un gen puede ser utilizada para estudiar su función y evolución tema 29 (13 páginas)

39 Figure: 17-T01. Table 17-01 Recombinant Proteins Synthesized in Yeast Host Cells tema 29 (13 páginas)

40 transgénico vegetal transgénico: individuo con genes de otra especie
Humans have been changing the genetics of other species for thousands of years: Artificial selection of plants and animals Natural processes also at work: Mutation, crossing over tema 29 (13 páginas)

41 obtención de un transgénico vegetal (I)
Fig Suzuki La bacteria A. tumefaciens causa la enfermedad de ‘agalla de la corona’ (tumor en plantas) al insertar una parte de su plásmido Ti, denominada T-DNA, en el cromosoma de la planta hospedadora Ti: inductor de tumores tema 29 (13 páginas)

42 obtención de un transgénico vegetal (II)
Fig Suzuki - se induce la formación de callos en medios de cultivo - a partir del callo se induce la formación de raices y brotes, para dar lugar a la planta transgénica Transgenic plants: Contain DNA from another species Genetic uniformity of crop plants makes them vulnerable to disease and pests. Seed banks are repositories of genetic diversity “Frankenfood”: Proponents say these plants cut costs, reduce herbicide use, enhance yields Opponents worry about the effects of these plants on humans and ecosystems tema 29 (13 páginas)

43 maíz resistente a herbicida
arroz blanco y arroz dorado (GM; beta-carotenos) Plantas: resistentes a insecticidas o plagas y con enriquecimiento nutricional Algodón Bt (lleva una toxina de Bacillus turingiensis) es resistente al ataque de insectos Golden Rice? or Frankenfood?: European scientists have inserted foreign genes into rice Resulting rice may help prevent vitamin A deficiencies: ceguera y muerte in Bangladesh, China and India Opponents worry about the unforeseen consequences of creating genetically modified organisms: lo peor cambio ecológico (ca tema 29 (13 páginas)

44 tema 29 (13 páginas)

45 tema 29 (13 páginas)

46 tema 29 (13 páginas)

47 transgénico animal Inyección de DNA foráneo en una célula animal
L: pipeta y R: aguja Incorporación de DNA exógeno a células animales: microinyección (imagen), electroporación, precipitación con fosfato cálcico y endocitosis, encapsulamiento del DNA en liposomas y fusión de membranas, uso de YAC o vectores retrovirales -> fin: integración del DNA transferido en la célula huésped tema 29 (13 páginas)

48 tema 29 (13 páginas)

49 tema 29 (13 páginas)

50 terapia génica Virus : retrovirus (-que insertan su genoma en el de la célula- para células de la sangre y tb tejidos sólidos) y adenovirus (-no se integran- para epitelios respiratorios y quizá también tejidos no proliferativos como msuculares, hígado y sistema nervioso). Otros vectores: HAC: human artificial chromosome (similares a los YAC) Ej enfermedades: - HECHO YA: ‘niños burbuja’ con ‘inmunodeficiencia severa combinada’, para reemplazar el gen ADA (desaminasa de adenosina) (retrovirus, como el SIDA) Retrovirus was used to insert normal allele into cultured stem cells. Modified stem cells were returned to the children’s bone marrow Successfully created immune function. Also caused leukemia in some children EN PRUEBAS: Fibrosis quística (enf del epitelio respiratrio, crea mas moco y se colapsa), posible de tratar con adenovirus inyectados por la nariz! tema 29 (13 páginas)

51 tipos de terapia génica en mamíferos
tema 29 (13 páginas)

52 One of the six restriction maps shown here is consistent with the pattern of bands shown in the accompanying figure in the gel after digestion with several restriction endonucleases. The enzymes that were used are shown. From your analysis of the pattern of bands on the gel, select the correct map and explain your reasoning. In a Southern blot prepared from this gel, the highlighted bands (pink) hybridized with the gene pep. Where is the pep gene located? problema Figure: 17-UN08. Problems and Discussion Question 25: One of the six restriction maps shown here is consistent with the pattern of bands shown in the accompanying figure in the gel after digestion with several restriction endonucleases. The enzymes that were used are shown. From your analysis of the pattern of bands on the gel, select the correct map and explain your reasoning. In a Southern blot prepared from this gel, the highlighted bands (pink) hybridized with the gene pep. Where is the pep gene located? tema 29 (13 páginas)