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Inoculación de fitopatógenos Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales. Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc. 6 de mayo de 2011.

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1 Inoculación de fitopatógenos Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales. Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc. 6 de mayo de 2011

2 Objetivos Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos.

3 Esquema de la clase PARTE TEÓRICA Inóculo, calidad y cuantificación. Métodos de inoculación de hongos, bacterias, virus y nematodos en hojas, raíces, tallo, frutos. PARTE PRÁCTICA Inoculación LUEGO DE LA CLASE Observación, análisis e informe de resultados

4 Inóculo Hongos: Bacterias: Virus: Nematodo s: – trozos de micelio – esporas – esclerotos – unidades formadoras de colonias (UFC) – partículas en macerado, buffer, etc. – larvas, huevos, quistes

5 Calidad del inóculo Viable – en activo crecimiento (micelio, bacterias), esporas capaces de germinar Homogéneo: –siembra de hongo en centro de placa vs. suspensión de esporas Acostumbramiento a crecer en medio de cultivo – pérdida de patogenicidad (Ralstonia) o de producción de esporas (Septoria, Cercospora)

6 Cuantificación del inóculo Hematocitómetro Turbidez Unidades formadoras de colonias

7 Cuantificación del inóculo en hematocitómetro Rayado Neubauer: 2 porciones c/u con 9 cuadrados principales de 0,1 mm 3 divididos en 16 cuadrados menores de 0,05 mm 3

8 Cuantificación de inóculo Turbidez - bacterias –Escala de McFarland: BaCl 2 + H 2 SO 4 –Densidad óptica: colorímetro o espectrofotómetro a 450 – 650 mµ

9 Cuantificación de inóculo Recuento de colonias unidades formadoras de colonias (UFC)

10 Inoculación al follaje Penetración por estomas o epidermis - mayoría penetra en 24 hs. en condiciones adecuadas de humedad y 20-24ºC Métodos: 1.pulverización: 0,5% Tween o 0,1% jabón cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.

11 Métodos de inoculación al follaje 1.pulverización: 0,5% Tween o 0,1% jabón cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.

12 Métodos de inoculación al follaje 2.espolvoreo con talco royas: humedecer hojas 1º (aspersión) oidios – seco 3.rozar o colocar hojas esporuladas sobre sanas (previamente rociadas) 4.inmersión en suspensión de inóculo

13 Métodos de inoculación al follaje 4.infiltración 5.colocar trozo de micelio

14 Métodos de inoculación al follaje

15 Inoculación de virus

16 Plantas indicadoras Tabaco, pepino, Chenopodium quinoa, etc. –Sin síntomas –Lesiones locales –Síntomas sistémicos

17 Plantas indicadoras

18 Transmisión mecánica 1.Macerado de planta enferma 2.Abrasivo (carborundum) 3.Planta sana = Transmisión por jugos

19 Transmisión por pulgones

20 Transmisión por propagación vegetativa tubérculos, bulbos, estacas, etc. injerto uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy- uk.org.uk/mag/artnov05/cbpaint.html An overview of the paintings of Christina Brodie uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy- uk.org.uk/mag/artnov05/cbpaint.html

21 Inoculación al suelo o raíces efecto del suelo: microflora conducente o supresivo reducir variación sin suelo humedad muy alta para Pitáceas, + síntomas a > temp. hasta 28ºC en gral. Métodos: –infestación de suelo –hidroponia –cut and dip –inoculación sin herir raíces (tubos en suelo)

22 Inoculación al tallo o rama Generalmente con heridas Corte longitudinal – inocular inmediatamente – cubrir para evitar deshidratación. (gel, algodón mojado) Patógenos vasculares

23 Inoculación al tallo o rama Patógenos vasculares: –axila - pinchar a través de gota o con aguja o escarbadiente contaminado. –inyección al tallo – evita stress de transplante

24 Inoculación en órganos carnosos Pinchazo Sacabocado Corte

25 Condiciones ambientales Antes de inocular: Patógenos que penetran por estomas Patógenos que penetran por heridas Virus

26 Condiciones ambientales Post-inoculación: Humedad para bacterias y hongos – factor más importante Virus

27 BIBLIOGRAFÍA DHINGRA, O.D.; SINCLAIR, J.B Basic plant pathology methods. FRENCH, E.R. y HERBERT, T Métodos de investigación fitopatológica. KIRÁLY, Z Methods in plants pathology with special reference to breeding for disease resistance. LELLIOTT, R.A.; STEAD, D.E Methods for the diagnosis of bacterial diseases of plants. THE COMMONWEALTH MYCOLOGICAL INSTITUTE Plant pathologist's pocketbook.


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