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Tecnología del ADN Recombinante REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA UNIVERSIDAD DE CARABOBO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE MEDICINA DR. WITREMUNDO.

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2 Tecnología del ADN Recombinante REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA UNIVERSIDAD DE CARABOBO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE MEDICINA DR. WITREMUNDO TORREALBA DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y FISIOLOGÍA SEDE ARAGUA Jefa de Investigaciones: Prof. Lic. MARTHA PERNALETE INVESTIGADORES Br. Cillo, MARIA Br. Díaz Carlos br. García, gustavo Br. García, anndreina NOVIEMBRE, 2012

3 EL CULPABLE Explicar el fundamento de los métodos siguientes: Determinación del polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP). Métodos fundamentales que tienen aplicación en la resolución de casos de interés clínico: El polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP). Explicar en forma general como se obtiene un ADN recombinante. Principales enzimas utilizadas en la obtención del ADN recombinante: El sistema de restricción/ modificación. Las ligasas. Otras enzimas. Proceso general para el clonamiento de genes.

4 Ha ocurrido un Homicidio.. intriga, sangre y adn rodea este escalofriante hecho.. El culpable se ha dado a la fuga.. O tal vez no? Pues hay que averiguarlo.. Presten atención.. Y comencemos a investigar..

5 imagen: Es una molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de ADN Por lo tanto, la tecnología de ADN recombinante Es el conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro diferente.

6 Ya sabemos que ocurrió.. Sabemos que hay una victima.. Pero.. Debemos precisar como sucedieron los hechos.. Inspeccionemos El lugar de los hechos y sus alrededores.. Y Veamos que encontramos

7 Nucleasas Son enzimas con capacidad de escindir los enlaces fosfodiester de la cadena polinucleotidica de los ácidos nucleicos; son, por tanto, fosfodiesterasas. Escisión en posiciones internas o terminales en la estructura primaria. Actuación sobre uno de los dos tipos de enlace fosfodiester Reconocimiento de nucleótidos, bien por la pentosa o bien por la base nitrogenada (solo en algunas nucleasas)

8 1) Escisión en posiciones internas o terminales en la estructura primaria : - Las exonucleasas - Las endonucleasas - Las exonucleasas - Las endonucleasas Imagen: biología molecular de José Luque

9 2)Actuación sobre uno de los dos tipos de enlace fosfodiester Algunas nucleasas ( tipo a) actúan específicamente hidrolizando los enlaces fosfato formados con el OH 3´, mientras que otras (tipo b) hidrolizan los formados con OH 5´. Imagen: biología molecular de José Luque

10 3) Reconocimiento de nucleótidos, bien por la pentosa o bien por la base nitrogenada Desoxirribonucleasas o DNasas, que actúan solo sobre DNA; ribonucleasas o RNasas, que hidrolizan RNA Imagen: biología molecular de José Luque

11 Enzimas de restricción Características Se nombran con tres letras tomadas del genero y especie de la bacteria de la que se aislaron originalmente, que identifica el serotipo. Luego se identifica con un numero romano en el caso de que en una misma variante se hayan encontrado varias enzimas con distinta especificidad. La importancia de las enzimas de restricción radica en su gran especificidad de reconocimiento de una secuencia de corta de DNA Imagen: biología molecular de José Luque

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14 Acción de las enzimas de restricción de tipo II ON

15 Extremos resultantes de la acción de las enzimas de restricción Imagen: biología molecular de José Luque

16 o Empalman la molécula DNA con el vector de clonación o con otro ADN. o Utilizan ATP. o Encargadas de cerrar las mellas que quedan entre segmentos reasociados ADN o Empalman la molécula DNA con el vector de clonación o con otro ADN. o Utilizan ATP. o Encargadas de cerrar las mellas que quedan entre segmentos reasociados ADN htm

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18 Muy bien, Sabemos que fue en una habitación.. Que hubo forcejeo, mucha ira, sangre y Comida sin terminar..

19 Al parecer hubo algunos posibles testigos… Prosigamos la investigación y veamos que mas encontramos

20 ¿QUE ES LA CLONACION? Y EL ADN RECOMBINATE? Es la producción de un gran número de copias de una región de ADN o de ADNc. Se basa esta clonación en la realización de múltiples rondas de replicación, pero en este caso catalizada por la ADN polimerasa propia de la célula en la que se va a llevar a cabo el proceso, célula anfitriona.

21 Para su estudio Propiedades, función e aplicación comercial Ingeniería de proteínas Para la alteración de sus propiedades

22 Son 7 etapas: 2 de preparación de muestras. 4 sucesivas de clonación propiamente dicha. 1 de expresión. Son 7 etapas: 2 de preparación de muestras. 4 sucesivas de clonación propiamente dicha. 1 de expresión. Se inocula el fragmento de ADN que se va a clonar Cultivo en placas de agar De manera que al dividirse la bacteria el vector se replica Medio de cultivo líquido Aplican antibióticos para eliminar bacterias que no hayan adquirido el gen de resistencia Multiplicación bacteriana VIDEO! Imagen: biología molecular de José Luque

23 PRIMERA ETAPA Se parte de células nucleadas, normalmente sanguíneas. El fragmento a clonar se aisla del resto,mediante técnicas: Electroforesis en gel de agarosa. Imagen: biología molecular de José Luque

24 SEGUNDA ETAPA ¿Qué es un Vector? Molécula de ADN pequeño, fácil de aislar, con secuencia y mapa de restricción, de fácil inducción a la célula anfitriona y con capacidad de replicación autónoma. Imagen: biología molecular de José Luque

25 TERCERA ETAPA Imagen: biología molecular de José Luque

26 CUARTA ETAPA Tipos de células anfitrionas: Procariotas. Eucariotas. Tipos de células anfitrionas: Procariotas. Eucariotas. Métodos de introducción del ADN recombinante Imagen: biología molecular de José Luque

27 QUINTA ETAPA Imagen: biología molecular de José Luque

28 SEXTA ETAPA SÉPTIMA ETAPA (OPCIONAL) 4ta etapa 5ta etapa 6ta etapa ¿CUAL ES LA IMPORTANCIA DE ESTA CLONACION? Imagen: biología molecular de José Luque

29 Gracias a Nuestra investigación hemos determinado que hay 2 posibles culpables Los llamaremos sospecho 1 y Sospechoso 2 BIEN, Hemos concluido la fase de interrogaciones…

30 Estamos de nuevo en el lugar de los hechos.. Veamos que mas podemos encontrar para incriminar a uno de nuestros sospechosos.. Y por supuesto.. Descubrir el arma homicida.…


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