EVIDENCIA EX VIVO E IN VIVO DEL EFECTO PROLIFERADOR DE LA 1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL MEDIADOR DEL VEGF.

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1 EVIDENCIA EX VIVO E IN VIVO DEL EFECTO PROLIFERADOR DE LA 1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL MEDIADOR DEL VEGF

2 CMLV Cultivo primario + Métodos calcitriol Factor trófico: FGF
Concentraciones diferentes calcitriol CMLV de aorta de rata Sprague-Dawley + Factor trófico: FGF CMLV Cultivo primario

3 Efecto del calcitriol en la expresión de VDR
0 h 12 h 16 h 24 h - + - + - + - 1,25(OH)2D3 (100nM) 51 kD * * VDR expression (%)

4 Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV in vitro
 *  #  #  % over control % over control 1,25(OH)2D3 (nM) 1,25(OH)2D3 (nM) bFGF (ng/mL) bFGF (ng/mL) 20 20 20 20 20

5 Efecto del calcitriol en la progresión del ciclo celular de las CMLV in vitro
6.9% IN S PHASE 11.1% 27.9% 6.7% 24.9% 55.2% 16 22 TIME (HOURS) WITHOUT 1,25(OH)2D3 WITH 100nM 1,25(OH)2D3

6 Efecto del calcitriol en la expresión de VEGF en las CMLV in vitro
* * * VEGF expression % pmols/4000 cells

7 Efecto del VGA1102 en la proliferación de CMLV inducida por calcitriol
MTT Assay % over control % over control * 1,25(OH)2D3 (100nM) + + - - VGA1102 (1mM) - + + -

8 Efecto de anticuerpos anti-VEGF en la proliferación de CMLV inducida por calcitriol
* % over control + + - - 1,25(OH)2D3 (100nM) - + + - Anti VEGF (0.6 mg/mL)

9 Posible VDRE en el gen del VEGF
7201 CTGGGCCCGTAAGCATTTACTAACTACTCTCCCTGCTAAAAGAGAGCCATCCGGGAGGTG ACTCAGGGCAGCTATGATAGGCCAGATGGGATGGGGTGGCTTTTTTCCTCATAAGATCCT CATAACATTGCTCCATTGAAATTGGGGTTCCCAACAGGTACCAGCATCCCACGGAGCCTC AGTACTGTGTGCAGAGGGATGGAGATGGTGGAGTAACCTTTTCGGGGGACCAGTAGGAAG ACTGTTGGCTCCCTTTCTCAGAAGCTCAGCAGACCTGGGTGAGGGCTGGGACTGGTTGGT CCCTCTCTTCCCACAGGTATCAGAGCCCCCTCTTGTTCCCAGGGGAGCCTAGGAGCAGCT GGGCCAAAGCCCAACCAGGAATTTTTCCAGGCTGGTTCCTATATCCAAGGGTGGGCTGGA GGTGGGGGCTTTGGGGAGCTCTTAAGGAAGACACGAGGAGGTGAAGGGGACTTTGTGGAA 7680 9721 CCTGGAGAAGCCGGGGCCCGAGAAGAGAGGGGAGAAAGAGAAGGAAGAGGAGAGGGGGCC GCAGTGGGCGCTCGGCTCTCGGGAGCCGGGCTCATGGACGGGTGAGGCGGCGGTGTGCGC AGACAGTGCTCCAGCCGCGCGCGCGCCCCAGGCCCCGGCCCGGGCCTCGGTTCCAGAAGG GAGAGGAGCCCGCCAAGGCGCGCAAGAGAGCGGGCTGCCTCGCAGTCCGAGCCGGAGAGG GAGCGCGAGCCGCGCCGGCCCCGGACGGGCCTCTGAAACCATGAACTTTCTGCTCTCTTG 10020 10021 GGTGCACTGGACCCTGGCTTTACTGCTGTACCTCCACCATGCCAAGGTAAGCGGTCGTGC 10080

10 CMLV Ex vivo Métodos calcitriol Anillos de aorta
de rata Sprague-Dawley calcitriol CMLV Ex vivo

11 Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV ex vivo
B1 * % of positive nucleus A2 B2

12 CMLV in vivo Métodos calcitriol Rata Sprague-Dawley
Con 5/6 de reducción de masa renal CMLV in vivo 8 semanas calcitriol

13 Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV in vivo
B1 Control vit D 1 mg/kg * B % of positive nucleus A2 B2

14 Efecto del calcitriol en la arquitectura de la aorta
Area of the media Media/lumen ratio * mm2 No treatment Calcitriol 1 mg/kg No treatment Calcitriol 1 mg/kg

15 Conclusión El calcitriol induce un aumento en la proliferación de las CMLV in vitro e in vivo. Este efecto está mediado por un aumento en la expresión de VEGF. El aumento de proliferación de las CMLV in vivo produce un cambio en la arquitectura vascular.