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La sobrerregulación de VEGF durante la transdiferenciación de células mesoteliales como mecanismo responsable del alto transporte peritoneal de solutos.

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Presentación del tema: "La sobrerregulación de VEGF durante la transdiferenciación de células mesoteliales como mecanismo responsable del alto transporte peritoneal de solutos."— Transcripción de la presentación:

1 La sobrerregulación de VEGF durante la transdiferenciación de células mesoteliales como mecanismo responsable del alto transporte peritoneal de solutos en pacientes en DP Hospital Univ. La Princesa. Madrid Hospital Univ. La Paz. Madrid. Hospital Univ. Guadalajara Grupo de Estudios Peritoneales de Madrid IRSIN-FRIAT

2 Introducción La DP induce cambios en la célula mesotelial (CM) que sufre un fenómeno de transdiferenciación perdiendo progresivamente su fenotipo epitelial y adquiriendo fenotipo de célula mesenquimal. Aparecen miofibroblastos estromales αSMA+ que expresan marcadores mesoteliales lo que sugiere que proceden de la CM a través de un fenómeno de transición epitelial-mesenquimal

3 ICAM-1 Cytokeratin

4 -SMA Submesotelial Mesotelial Virch Arch 2004 citokeratina -SMA Mismo paciente

5 Introducción La TEM ha sido demostrada in vitro (Yañez- Mo, NEJM 348: , 2003) e in vivo mediante la administración de un adenovirus que activa el gen de TGFβ en el peritoneo de la rata (Peter J. Margetts J Am Soc Nephrol 16: , 2005) lo que induce el desarrollo precoz de fibrosis y neoangiogénesis

6 JASN 12:2029, 2001 Day 4 after infection Day 21 Day 7 Day 28 Day 21 after PBS Day 4 after control virus

7 Introducción El Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) está implicado en los fenómenos de neoangiogénesis y permeabilidad vascular. Aunque está demostrada la producción de VEGF por las CM in vitro, la fuente principal de VEGF en la DP y los mecanismos implicados en su regulación no están claros.

8 Objetivos Determinar el papel de la CM-no epitelioide (transdiferenciada) –En la producción de VEGF –En el desarrollo de neoangiogénesis –En los cambios funcionales que conducen al fallo de UF

9 Pacientes 37 pacientes estables en DP –18 DPCA y 27 DPA –Edad: años (media: 61.7 ± 14.5) –Tiempo en DP: 12.6 ± 15.5 meses (rango 3-62). –Diabéticos: 5 –Soluciones: 29 lactato, 8 bicarbonato, (10 un intercambio/día con icodextrina) –6 con Hª de peritonitis (días de inflamación: 6.2 ± 5.54 días). –32 recibían EPO Grupo control –24 pac. en HD –15 voluntarios sanos

10 Métodos Aislamiento y cultivo de las CM Origen de las CM en cultivo –Pacientes: CM procedentes del efluente peritoneal del intercambio nocturno –Controles: Omento de sujetos sanos sometidos a cirugía abdominal (previo CI). –Cultivo en medio de Earle M199 y Biogro-2 –Marcadores de CM: Citokeratina, ICAM-1 y calretinina ) –Fenotipos de CM en cultivo Epitelial No-epitelial –Transicional –Fibroblastoide –Se inducía EMT in vitro con TGFβ e IL-1 –Los cultivos de CM no estaban contaminados con células endoteliales (F. von Willebrand negativo)

11 Métodos Biopsias MP: Peritoneo parietal de la pared abdominal anterior durante cirugía o durante el Tx –Muestras 6 pacientes en DP con Cr-MTC>11 ml/min 6 pacientes en DP con Cr-MTC<11 ml/min 6 controles –Histología e inmunohistoquímica (VEGF, citokeratinas, αSMA, FvW) Suero: –Simultanea con la recogida del efluente (DP) –Antes de la primera sesión de la semana (HD) Determinaciones –Western Blot Analysis del lisado del cultivo de CM –VEGF (ELISA): en el sobrenadante de las células a confluencia y en suero Cálculos funcionales: MTC-urea y MTC-Cr por métodos standard

12 Resultados

13 Fenotipos de CM obtenida de efluente peritoneal

14 Niveles de VEGF en el sobrenadante del cultivo de CM

15 Inducción de TEM y VEGF en el sobrenadante

16 Fenotipo y VEGF en suero

17 Niveles en suero y sobrenadante

18 Características basales y diferencias en los pacientes según fenotipo de CM en los cultivos procedentes de efluentes peritoneales ________________________________________________________________________ Fenotipo de la CM (n=37) Epitelioide (n=23) No-epitelioide (n=14) P ______________________________________________________________________________________ Edad (años) NS Meses DP) NS EPO (U/kg/sem) NS Días inflamación NS Carga de glucosa (Kg) NS Urea-MTC (ml/min) <0.01 Cr-MTC (ml/min) <0.001 UF 3.86% (ml)* ** <0.05 CCr (ml/min) NS VEGF suero (pg/ml) <0.01 VEGFsobrenad (pg/µg) <0.001

19 Correlación VEGF en sobrenadante y transporte peritoneal

20 VEGF en suero y transporte peritoneal

21 VEGF según el transporte peritoneal

22 Fenotipo CMEpitelial-likeNo-epitelioidep Cr-MTC<11 (ml/min) 234P<0.05 Cr-MTC>11 (ml/min) 010<0.001 N=10 P<0.001 N=23 NS N=14 Total 37 Distribución del fenotipo de CM según Cr-MTc

23 Correlación positiva –Meses en DP y VEGF en suero (r=0.39, p<0.05) –Días de inflamación peritoneal (peritonitis) y VEFG en suero (r=0.41, p<0.05)

24 Expresión de VEGF en biopsia peritoneal

25 Conclusiones La agresión peritoneal induce cambios en la CM que sufre un proceso de transdiferenciación, migra al submesotelio y adquiere un fenotipo fibroblastoide La celula no-epitelioide sobrerregula VEGF y se demuestran niveles elevados de VEGF en sobrenadante de los cúltivos de CM, efluente peritoneal y suero. La sobrerregulación de VEGF puede ser la responsable del fenómeno de neoangiogénesis observado en los pacientes en DP. Los cambios en el MTC-Cr están relacionados con el nivel de VEGF en sobrenadante del cultivo de CM y en menor medida con los niveles en efluente y en suero La intervención terapeútica debe ir dirigida a prevenir la TEM de la CM que está en el inicio de la fibrosis y la neoangiogénesis peritoneal.

26 Peritoneal cavity Peritonitis Hemoperitoneo PD Fluids: Glucose (AGEs, GDPs) Lactate, Acid pH E-Cadherin Cytokeratins Snail MC released to PD Effluent Peritoneal Membrane αSMA-positve Myofibroblast Neo- Angiogenesis ECM Synthesis UF Failure Submesothelial Thickness Epithelial to mesenchymal transition. RAGE... TFG VEGF Fibrosis

27 Conclusión final Las células fibroblasto-like que aparecen en el submesotelio de la membrana peritoneal procedentes de la TEM de la CM pueden contribuir no solo al desarrollo de fibrosis sino también a la aparición de neoangiogénesis e incremento de la permeabilidad peritoneal a través de la sobrerregulación de VEGF.


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