UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA TITULO: Mapa Conceptual - Artículos de Ingeniería Genética CURSO: Biotecnología DOCENTE: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales.

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA TITULO: Mapa Conceptual - Artículos de Ingeniería Genética CURSO: Biotecnología DOCENTE: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales ESTUDIANTE: Rubiliz Silvana Huancco Bravo Ciclo: VII Ciclo Fecha y lugar: 27 de Junio del 2021, Ilo

2 OPTIMIZACIÓN Y VALIDACIÓN DE UNA PCR EN TIEMPO REAL PARA LA RÁPIDA IDENTIFICACIÓN DE BACILLUS THURINGIENSIS, SIMULADOR DE BACILLUS ANTHRACIS Álvarez, Larigauderie, Ortega, Granja y Cabria. Realizado por Desarrollar y validar una PCR en tiempo real para la rápida identificación B. thuringiensis para entrenamiento de la unidades operativas Metodología Cepa HD-1 de B. thuringiensis subsp. kurstaki del Objetivo laboratorio de Biología Molecular del INTA. obtenido del Cultivo enriquecido, proceso periódico, se incubó y se purifico el ADN total. Introducción Dado la Homología y la nula patogenidad-humano simulador del B. anthracis B. thuringiensis: bacteria patógena insectos, nemátodos, protozoos y platelmintos para La toxicidad: las proteínas cristal (cry) Extracción y cuantificación del ADN molde La cuantificación, calculo de los egs Resultados y Discusión A 60°C: reduce el LOD hasta la dilución 10^-6 aumenta la eficiencia de la reacción de amplificación al 93%, Optimización del ensayo el rango lineal del ensayo abarca las 6 primeras diluciones. Conclusiones Validación del ensayo Tanto la inclusividad como la exclusividad: 100%. Se ha optimizado y validado una PCR en tiempo real La eficiencia y linealidad del método fueron adecuadas Dicha qPCR: una elevada sensibilidad con un LOD de 13 egc es el el =(cantidad * 6,022x10^23) / (longitud * 1x10^9 * 650). y

3 Optimización de la PCR cualitativa en tiempo real El ensayo, la sonda de hidrolisis, la amplificación Para optimizar el ensayo: (58, 60 y 62°C). Los productos de la qPCR: gel agarosa 2% El valor R2 igual a 0,9993. Límite de detección del método La dilución 10^-6 son positivos, dilución 10^-7 son 15 resultados positivos y 5 negativos, 10^-8 son 12 positivos y 8 negativos. Inclusividad y exclusividad un valor de Cq inferior a 38 banda de 69 pb en la cepa HD-1 de B. thuringiensis subsp. kurstak Validación del ensayo: Eficiencia, linealidad y límite de detección La pendiente de la curva estándar, coeficiente de correlación R^2 y menor concentración de ADN Determinación del cutoff value descubrir proteínas insecticidas inéditas. Actualmente: 75 familias de genes cry La PCR: análisis de cepas de B. thuringiensis para Este simulador: entrenamiento de la NBQ de las FAS y Esta qPCR es especifica para el gen cry1A Se implementaron diferentes PCRs en tiempo real. identificar distintas cepas de B. thuringiensis para

4 Evaluación inicial del método: preparo dos escenarios biológicos Primero: atentado ferroviario Segundo: laboratorio clandestino La inclusividad y la exclusi - vidad : 100% Evaluación inicial del método se obtuvo una identificación positiva de B. thuringiensis LOD es mayor que la de otras qPCR especificas Ninguna de las 24 cepas no diana utilizadas mostró un resultado positivo. Es importante disponer de un ensayo molecular rápido, sensible y específico la identificación de B. thuringiensis, simulador de B. anthracis Información Obtenida: https://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1887-85712018000200084 Inclusividad y exclusividad: 1 cepa DIANA, 24 cepas no diana respectivamente