Coprocultivo

El coprocultivo es un estudio clínico que pertenece al área de bacteriología y que consiste en hacer un cultivo de heces fecales de los pacientes que presenten alguna infección en el tracto gastrointestinal. Las principal utilidad que tiene este estudio, es la identificación de enterobacterias ( E. Coli, Vibrio cholerae, shigella, salmonella, campylobacter jejuni, Yersinia enterolitica), que son siempre las principales causantes de una enfermedad gastrointestinal.

TOMA DE MUESTRA. La muestra del coprocultivo será tomada en un vaso especial para recolectar muestra que el paciente puede conseguir en la farmacia, es un frasco de boca ancha que debe de estar estéril. La muestra se tomara en el momento en el que el paciente este defecando, se colocara el vaso debajo del ano y se depositara una muestra de heces del tamaño aproximado de una nuez, (5 a 10 ml en caso de que el paciente defeque liquido).

No se requiere ayuno ni dieta especial No se debe de estar ingiriendo antibióticos En adultos mayores y niños la toma se muestra con un hisopo. Enviar al alboratorio en no más de dos horas para su procesamiento, o refrigerar, por no más de 4 horas

La flora intestinal es numerosa La flora intestinal es numerosa. Esta integrada principalmente por bacterias entéricas, clostridiales, levaduras, lactobacilos y otras. Frecuentemente pueden originarse desequilibrios por la presencia de microorganismos patógenos. El cultivo de las heces es de gran ayuda en la determinación del agente etiológico de la diarrea, asi como el estado de portador (Salmonella, Shigella y Arizona). La identificación final puede realizarse por métodos bioquímicos y serológicos. El coprocultivo se fundamenta en el equilibrio del aparato gastrointestinal (diarrea, moco y sangre en las heces) ocasionado por las bacterias mencionadas.

Medios Medios para aislamiento -Agar eosina y azul de metileno (EMB) -Agar de Salmonella y Shigella (S.S) -Agar Mac Conkey -Agar verde brillante (VBA) EMB Verde Brillante S.S. McConkey

Medios de enriquecimiento -Caldo selenito -Caldo tetrationato

Medios para identificación (pruebas bioquímicas) -Kligler -Caldo urea -Descarboxilación de la lisina (LIA) -Citrato de Simmons LIA Citrato de Simmons Caldo urea Kligler

Identificación serológica Antisueros para identificar escheriachia coli (polivalente I, II, III) Antisueros para identificar salmonella del subgrupo I Antisuero para identificar shigellas (A, B, C y D) Antisuero para identificar vibrio cholerae

DESARROLLO Inocular directamente la muestra en una serie de las placas de agar proporcionadas. Incubar a 37ºC de 24 a 48 horas. Inocular la muestra en un tubo con caldo de enriquecimiento. Incubar a 37ºC durante 18 a 24 horas. Subcultivar una serie de placas de agar. Observar las características más relevantes de la morfología colonial en cada uno de los medios inoculados, a fin de seleccionar el crecimiento del posible patógeno. Describir la morfología colonial del posible patógeno y realizar la inoculación a las pruebas bioquímicas.

Identificación de Coccidias Pruebas rápidas Materia fecal Coproparistoscópico Tinción de Kinyoun Caldo tetrationato Campy-Bap McConkey o EMB Agua peptonada TCBS Identificación de quistes de protozoarios , huevecillos y larvas de helmintos Identificación de Coccidias Pruebas rápidas Seleccionar colonias y sembrar en TSI, LIA y MIO Detección de Rotavirus Sulfito de bismuto, SS ó Verde Brillante Tipificación de Salmonella con sueros anti A, B, C1, C2, D y E Seleccionar colonias y sembrar TSI, LIA y MIO Reacciones de aglutinación con sueros anti A, B, C y D de Shigella Yersinia Escherichia coli Tipificar con antisueros Seleccionar colonias y sembrar en TSI, Hacer pruebas de acetato de plomo y de hidrólisis de hipurato Seleccionar colonias amarillas y sembrar en TSI, LIA, MIO, caldo peptonado y arginina Reacción de aglutinación con suero anti Vibrio cholerae O1 Campylobacter

AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO El agar Eosina y azul de metileno es un medio utilizado para aislamiento y diferenciación de vacilos entéricos Gram negativos. Diferencia colonias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa Permite diferenciar al grupo Salmonella y otros organismos lactosa negativos de organismos coliformes CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO RESULTADO Escherichia coli Colonias azul a moradas, con brillo metálico azul verdoso Enterococcus faecalis Inhibición parcial Salmonella typhimurium Colonias incoloras, transparentes Shigella flexneri Staphylococcus aureus Crecimiento parcialmente inhibido o colonias puntiformes (1) Candida albicans Colonias plumosas, rosa pálido atípicas

AGAR SALMONELLA Y SHIGELLA Las bacterias Gram positivas, algunas especies de Proteus y bacilos coliformes son inhibidos por las sales biliares, citrato de sodio y verde brillante. La diferenciación de los microorganismos se logra por la lactosa. CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO RESULTADO Escherichia coli Marcada inhibición o colonias rosa intenso con halo de precipitación Salmonella typhimurium Colonias medianas, incoloras transparentes con centro negro Shigella flexneri Colonias pequeñas, incoloras transparentes Salmonella typhi Colonias pequeñas, incoloras transparentes con o sin centro negro Staphylococcus aureus Crecimiento inhibido Enterococcus faecalis Crecimiento inhibido o colonias puntiformes, rosa opacas

CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO AGAR VERDE BRILLANTE La selectividad de este medio, se basa en la concentración del verde brillante, que inhibe bacterias Gram positivas y la mayoría de los bacilos Gram negativos, permitiendo el empleo de inóculos moderadamente abundantes La lactosa y la sacarosa permiten diferenciar la flora acompañante lactosa positiva y lactosa negativa-sacarosa positiva CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO RESULTADO Escherichia coli Crecimiento inhibido Salmonella typhimurium Buen crecimiento, colonias rosa pálido con halo rojo brillante Salmonella enteritidis Buen crecimiento, colonias rosa pálido con halo brillante Proteus vulgaris

AGAR CITRATO DE SIMMONS Para identificación biquímica de Enterobacterias en base a la utilización del citrato como única fuente de carbono. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del medio. Cuando las bacterias utilizan el citrato, el medio se alcaliniza y cambia el color inicial verde. CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO RESULTADO Escherichia coli Negativo Enterobacter cloacae Positivo Klebsiella pneumoniae Salmonella typhi Serratia marcescens Shigella flexneri

AGAR DE HIERRO Y TRIPLE AZUCAR (AGAR TSI) Para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa y sacarosa, así como a su capacidad de producir ácido sulfhídrico, lo cual permite el reconocimiento y exclusión del género Proteus. La fermentación de lactosa y sacarosa se observa en la superficie y la de glucosa en el fondo del medio con formación de ácido, se manifiesta por cambio de color del Rojo de fenol que vira de anaranjado rojizo a amarillo. La combinación de citrato férrico de amonio y tiosulfato de amonio permite la detección de sulfuro de hidrógeno por la formación de un precipitado negro.

CALDO TETRATIONATO El tetrationato formado por la adición de yodo- yodurado junto con el tiosulfato excedente inhiben a coliformes. Las bacterias reductoras de tetrationato como Salmonella y Proteus pueden multiplicarse con más facilidad. Las sales biliares inhiben el desarrollo de microorganismos Gram positivos.

CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO CALDO UREA Se emplea para la diferenciación de bacterias por medio de la utilización de la urea como única fuente de carbono. CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO CRECIMIENTO (hidrolisis ) Escherichia coli - Salmonella typhimurium Proteus vulgaris + Proteus mirabilis Shigella flexneri Enterobacter aerogenes

CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO MEDIO MIO Para la diferenciación de Enterobacterias, basándose en las pruebas de movilidad, ornitina descarboxilasa y la producción de indol. Las peptonas proporcionan las fuentes de nitrógeno y carbono, el extracto de levadura proporciona vitaminas y la dextrosa es la fuente de energía. CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Ornitina RESULTADO Movilidad Indol   Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae - Proteus mirabilis Enterobacter aerogenes

MICROORGANISMOS PATÓGENOS CAUSANTES DE ENFERMEDADES ENTÉRICAS

Escherichia coli. Características: Especie recuperada con mayor frecuencia en el laboratorio Incriminada en enfermedades infecciosas que afectan casi cualquier tejido del cuerpo Microorganismo involucrado con mayor frecuencia en sepsis por gramnegativos y en el shock inducido por endotoxinas

Vibrio Cholerae Es el agente etiológico del cólera epidémico y endémico en los seres humanos . Es el prototipo de los síndromes diarreicos en los cuales la enfermedad no es causada por invasión tisular de los microorganismos sino a través de la producción de toxinas que afectan el intercambio intraintestinal normal de agua y electrolitos.

SHIGELLA Carácterísticas: Son no fermentadoras de la lactosa Tienden a ser bioquímicamente inertes En casos típicos, producen gas a partir de hidratos de carbono,con excepción de ciertos biogrupos de S. flexneri que son aerógenos Pocas cepas de S. sonnei pueden fermentar lentamente la lactosa(2%), y la scaros(1%) y la mayoría de las cepas pueden descarboxilar ornitina

Campylbacter jejuni Es el patógeno humano más importantes entre las campilobacterias. La enteritis con este microorganismo se caracteriza por dolor abdominal, cólico, diarrea sanguinolenta, escalofríos y fiebre

Yersinia Enterocolítica Aunque las especies de Yersinia califican desde el punto de vista bioquímico para la inclusión en las enterobacterias, las células parecen pequeñas y cocobacilares en los frotis teñidos con Gram y pueden ser pequeñas y puntiformes luego de 24 hrs de incubación en agar MacConkey.

SALMONELLA Tienen antígenos sománticos (O) que son lipopolisacáridos y antígenos flagelares (H) que son proteínas. S. typhi tiene también un antígeno capsular o de virulencia (Vi) Sulen ser tanto lactosa negativas como sacarosa negativas.

Bibliografia MANUAL DE MICROBIOLOGIA MÉDICA. QFB. GARCIA ARACELI. UNAM 9 SEMESTRE. MICROBIOS Y ENFERMEDADES. PEREZ TAMAYO. LA CIENCIA/169 PARA TODOS. 200 MEXICO. MANUAL DE BACTERIOLOGIA CLINICA. GERARDO CRUZ JIMENEZ. UNAM. MEXICO 1994. PP. 9-12.

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