Jose Vicente Marcos Tomás Análisis Clínicos

DEFINICIÓN de ANA Anticuerpos dirigidos contra el núcleo y, también, contra elementos no nucleares (membrana nuclear, aparato mitótico y citoplasma), por ello se ha propuesto la denominación de anticuerpos anti-celulares.

ENFERMEDADES ANA + Enfermedades autoinmunes sistémicas: a. Lupus Eritematoso Sistémico (LES) y otros Lupus. b. Esclerosis Sistémica (ES). c. Síndrome de Sjögren (SS). c. Polimiositis/Dermatomiositis (PM/DM). d. Enfermedad Mixta del Tejido Conectivo (EMTC). e. Artritis Crónica Juvenil (ACJ) y Reumatoide (AR). Enfermedades hepáticas autoinmunitarias: a. Cirrosis Biliar Primaria (CBP). b. Hepatitis Autoinmunitarias (HAI). c. Colangitis Esclerosante Primaria (CEP). Otras enfermedades (infecciones víricas, hepatopatías, cáncer, síndromes neurológicos paraneoplásicos, principalmente) 4. Sin patología aparente (aumentan con la edad y género ♀)

SINTOMATOLOGÍA en la que PROCEDE VALORAR la SOLICITUD de ANA

OBJETIVO de la SESIÓN Difundir y apoyar las recomendaciones internacionales: Kavanaugh A, Tomar R, Reveille JD, Solomon DH, Homburger HA. The CAP panel of representatives from CAP, ACR, CIS & CC-NIH. Guidelines for clinical use of the antinuclear antibody test and tests for specific autoantibodies to nuclear antigens. Arch Pathol Lab Med, 2000; 124: 71-81. James K, Betts Carpenter A.B, Cook L, Marchand R and Nakamura RM for the Association of Medical Laboratory Immunologists Standard Committee. Development of the Antinuclear and Anticytoplasmic Antibody Consensus Panel by the Association of Medical Laboratory Immunologists. Clin Diagn Lab Immunol. 2000; 7(3): 436–443. Tozzoli R, Bizzaro N, Tonutti E, Villalta D, Bassetti D, Manoni F et al. Italian Society of Laboratory Medicine Study Group on the Diagnosis of Autoimmune Diseases. Guidelines for the laboratory use of autoantibody tests in the diagnosis and monitoring of autoimmune rheumatic diseases. Am J Clin Pathol 2002; 117: 316-324. The American College of Rheumatology ad hoc Committee on Immunologic Testing Guidelines. Guidelines for immunologic laboratory testing in the Rheumatic Diseases: An introduction. Arthritis Rheum (Arthritis Care Research) 2002; 47(4): 429-433. Solomon DH, Kavanaugh AJ, Schur PH and The American College of Rheumatology ad hoc Committee on Immunologic Testing Guidelines. Evidence-based guidelines for the use of immunologic tests: Antinuclear antibody testing. Arthritis Rheum (Arthritis Care Research) 2002; 47(4): 434-444. Reveille JD, Solomon DH, and the American College of Rheumatology ad hoc committee on immunologic testing guidelines. Evidence based guidelines for the use of immnunologic tests: Anti-centromere, Scl-70 and nucleolar antibodies. Arthritis Rheum 2003; 49:399-412. Benito-García E, Schur PH, Lahita R, and The American College of Rheumatology ad Hoc Committe on Immunologic Testing Guidelines. Guidelines for immunologic laboratory testing in the rheumatic diseases: Anti-Sm and Anti-RNP antibody tests. Arthritis Rheum 2004; 51:1030-1044. Agmon-Levi N, Damoiseaux J, Kallemberg C, Sack U, Witte T, Herold M, Bossuyt X, Musset L, Cervera R, Plaza-López A et al. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. Ann Rheum Dis. 2013;0:1-7. doi:10.1136/annrheumdis-2013-203863. Optimizar el papel del laboratorio clínico respecto a: a. Metodología recomendada. b. Coherencia en la demanda (Uso Racional Laboratorio). c. Interpretación de los resultados.

METODOLOGÍA ELISA vs IFI Sustrato Extractos + Proteínas Tejido HEp-2 ó antigénico recombinantes HEp-2000 Sensibilidad / Falsos + (fondo proteico) Técnica referencia Especificidad Falsos - (faltan antígenos) Lectura de Cuantitativa y Semi-cuantitativa y Resultados automatizada ¡ automatizada ! Tipo de 1 (numérico) 2 (título + patrón) Resultados Objetivo Subjetivo GPC No Si

RESULTADOS en ANA (IFI) TITULACIÓN  ≤ 1/40 (NEGATIVO) (puntos de corte) 1/80 -1/160 (POSITIVO BAJO) ≥ 1/320 (POSITIVO ALTO) Discrimina sanos de enfermos PATRÓN de 40 / 20 / 10 (ver tabla posterior) FLUORESCENCIA  Orientación sobre patología Discrimina mejor que el título FALSOS NEGATIVOS Células HEp-2000 Células HEp-2 Tejido de rata o ratón FALSOS POSITIVOS  ANA + en sanos, no suele ser significativo - Sanos: 10-20% (1/80); 5% (1/160) - Edad/Sexo: 38% de >65ã  1/80, sobre todo ♀ Viriasis, cáncer, hepatopatías… ( : 1/40) ( : 1/160) (SUSTRATOS) Sensibilidad

PATRONES ANTÍGENOS PATOLOGÍAS MÁS y MÁS… HABITUALES PATRONES ANTÍGENOS PATOLOGÍAS HOMOGÉNEO dsDNA, Histonas, Nucleosomas… LES, LES-ID, AIJ… MOTEADO y Ro Sm, Sm/RNP, U1RNP, Ro (SS-A), La (SS-B), Mi-2 … LES, EMTC, SS, Lupus-Nn, Lupus-CS, DM, ES, Raynaud … NUCLEOLAR Pm/Scl, U3RNP, Scl-70, Ku, ARNp … ES, Raynaud, PM, DM … CENTROMÉRICO CENP-(B, A, C, F) ES-L (CREST), Raynaud, CBP … CITOPLASMÁTICO DIFUSO tRNAsint (Jo-1, PL7, PL12), SRP, RibP … DM, PM, LES… MITOCONDRIAL AMA-M2 … CBP… MÁS y POCO… HABITUALES PATRONES ANTÍGENOS PATOLOGÍAS MEMBRANA NUCLEAR gp210, Laminina, Nucleoporina… CBP, HAI, LES, PM, DM, AR … PUNTOS NUCLEARES MÚLTIPLES Sp100, Coilina… CBP, HAI, SS … PLEOMÓRFICO (ciclo dependiente) PCNA LES FIBRAS CITOPLASMÁTICAS f-Actina (ASMA), Vimetina, Tropomiosina, Citoqueratinas… HAI, DM, EII …

PATOLOGÍAS ANTÍGENOS (principales) PATRONES (principales) dsDNA, Ro (SS-A), La (SS-B), Sm, U1RNP, RibP, PCNA HOMOGÉNEO, MOTEADO, CITOPLASMÁTICO, PLEOMÓRFICO LES-ID Histonas HOMOGÉNEO Lupus-Nn Lupus-CS Ro (SS-A) Ro SS Ro (SS-A), La (SS-B) Ro, MOTEADO ES Pm/Scl, U3RNP, Scl-70, Ku, RNAp NUCLEOLAR, MOTEADO ES-L (CREST) CENP-B CENTROMÉRICO EMTC U1RNP MOTEADO PM DM Jo-1, PL7, PL12, Mi-2, Pm/Scl, Ku, SRP CITOPLASMÁTICO DIFUSO, MOTEADO Raynaud U1RNP, CENP-B, Jo-1, PL7, PL12 MOTEADO, NUCLEOLAR, CENTROMÉRICO, CITOPLASMÁTICO DIFUSO CBP AMA-M2, gp210, sp100 MITOCONDRIAL, Membrana Nuclear, Puntos Nucleares Múltiples HAI f-Actina (ASMA), LKM, SLA, LC1 FIBRAS CITOPLASMÁTICAS, Membrana Nuclear

ANA: DESARROLLO en la SOLICITUD ANALÍTICA de NO PROCEDE si…: - Anterior + - Anterior Ø en <6 meses EXCEPCIONES: - Pediatría - Anterior Dudoso - Anterior +, con auto-IgG específicos por hacer, y con indicación clínica expresa ANA a 1/80 (1/40 si son pediátricos): NEGATIVO: No realizan mas auto-IgG aunque se soliciten POSITIVO BAJO (1/80-1/160): Solo se realizan mas auto-IgG si solicitaban (acorde al patrón) POSITIVO ALTO (≥1/320): Se realizan los auto-IgG que el patrón oriente, aunque no se soliciten PATRÓN IFI ANTÍGENOS DESENCADENADOS (27) Homogéneo dsDNA (cuantificar si procede), Histonas, Nucleosomas Mitocondrial, Membrana Nuclear, AMA-M2, sp100, gp210, LKM1, LC1, SLA, Puntos Nucleares, Fibras Citoplasmáticas F-actina (ASMA) Citoplasmático denso tRNAsintetasas (Jo1, PL7, PL12), SRP, RibP Resto (Moteado, centrómero, nucleolar…) Ro, La, PCNA, Sm, RNP, Mi-2, Scl70, PMScl, Ku, CENP COMENTARIOS ACERCA DE LOS AUTO-IgG POSITIVOS

INFORME del LABORATORIO

INFORME del LABORATORIO

RECOMENDACIONES respecto a los ANA (I) DIAGNÓSTICO Criterios clínicos (GPC)  Imprescindible valorarlos para mejorar la utilidad diagnóstica de los ANA. Resultados ANA +, aisladamente, son insuficientes para establecer un diagnóstico. Criterios diagnósticos (GPC)  ANA solo forman parte del LES (dsDNA, Sm, AAF), Lupus inducido por fármacos (histonas) y EMTC (RNP). Determinar otros anticuerpos frente a antígenos extraíbles del núcleo (ENA), no deberá realizarse fuera de su contexto clínico específico. EAS  Los ANA son una prueba con un elevado valor predictivo negativo. LES  Existe <3% de enfermos ANA Ø (menos con Hep-2000). LES y ES  La mayor capacidad diagnóstica de los ANA en las principales EAS (debido a su mayor sensibilidad). ES  Con sospecha clínica, un resultado negativo de los ANA puede indicar otro tipo de enfermedad fibrosante no autoinmune. AR  Los ANA no son de utilidad diagnóstica.

RECOMENDACIONES respecto a los ANA (II) PRONÓSTICO LES  dsDNA. LES-embarazo  Ro y La (riesgo LES neonatal y bloqueo cardíaco congénito). ES  ScL-70. Síndrome CREST  CENP. PM/DM  Jo-1 (implicación pulmonar). SS  Ro y La (riesgo de LES neonatal y bloqueo cardíaco congénito). Ro y La (manifestaciones sistémicas extraglandulares). ACJ  ANA (riesgo de uveítis). Fenómeno de Raynaud  ANA (su presencia incrementa el riesgo de desarrollar una EAS asociada, mientras que su negatividad reduce dicho riesgo). MONITORIZACIÓN LES  dsDNA (junto a C3, C4, PTo) cada 1-3 meses ó 6-12 meses según la actividad del LES. También, PCNA (aunque solo en <5% es +).