Anticuerpos Antinucleares

Presentación del tema: "Anticuerpos Antinucleares"— Transcripción de la presentación:

1 Anticuerpos Antinucleares
Sergio Cerpa-Cruz Reumatología CURSO: EL LABORATORIO Y LA REUMATOLOGIA, 26 DE MAYO 2017

2 DEFINICION Grupo diverso de auto-anticuerpos que reconocen macromoléculas y sus complejos Han sido detectados en sueros de pacientes con enfermedades reumáticas y NO reumáticas Nat. Rev. Rheumatol May, 2017

3 HISTORIA AUTOR AÑO HALLAZGO Paul Ehrlich XX Horror Autotoxicus
Malcom Hargraves 1948 Fenómeno LE Haserick 1950 LE/componente Gg Friou 1958 Determinación antinuclear/fluorescencia Donato Alarcón 60´s Anti-RNP Pedro Reyes 1977 Aplicación sistemática de AAN en clínica Ignacio García de la Torre 80´s Importancia de las fuentes antigénicas Rafael Herrera, Biol Anticuer Antinu, UAZ; 1999

4 CICLO CELULAR

5 CICLO CELULAR

6 Nat. Rev. Rheumatol May, 2015

7 Antígenos y Auto anticuerpos
Localización Antígeno Enfermedad Anti-ss-DNA Cromatina ss-DNA LES Anti-ds-DNA ds-DNA Anti-poliADP ribosa Poli-ADP ribosa Anti-Scl-70 DNA topo I ESP Anti-centromero Centromero CREST Anti-histona H1, H2A, H2B, H3,H4 LES/medicamentos Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

8 Antígenos y Auto anticuerpos
Localización Antígenos Enfermedad Anti-U1RNP Núcleo U1RNP MTCD Anti-Sm U1,U2, U4/U6 RNP LES Anti-2RNP U2RNP Overlap Anti-SS-A/Ro hY1-hY5 RNP Proteínas 52 y 60 KDa Sjögren Anti-SS-B/La RNA polimerasa III Anti-PCNA DNA polimerasa Anti-Ku Factor activación protein-cinasa DNA Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

9 Antígenos y Auto anticuerpos
Localización Antígenos Enfermedad Anti-U3RNP Nucleolo Fibrilarina U3RNP ESP Anti-RNA polimerasa I RNA polimerasa I Anti-PM-Scl Complejo 11 proteínas Overlap Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

10 Antígenos y Auto anticuerpos
Localización Antígeno Enfermedad Anti-Jo 1 Citoplasma Histidil-tRNA Sint PM/DM Anti-P ribosomal 60S-ribosomal, P0, P1, P2 LES Anti-mitocondrial Mitocondria CBP Anti-SS-A/Ro hY1-hY5 RNP, Proteínas 60 y 52 KDa Sjögren Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

11 Asociación Clinica y Auto-anticuerpos en LES
FRECUENCIA % ESPECIFICIDAD EN LES SUB-GRUPO CLINICO DNA-ds 60-90 ++ Nefritis DNA- ss 90 - Histonas 50-70 + H2A, H2B Medicamentos Ro (SS-A) 20-60 Lupus cutáneo subagudo, bloqueo cardiaco La (SS-B) 15-40 Sm 10-30 Nefritis? SNC RNP EMTC U1-RNP 10 P 10-15 Psicosis lúpica Ku Cardiolipina Trombosis, pérdida fetal, trombocitopenia Antinuclear antibodies, Hochberg, Rheumatology, 2015

12 Antígenos Extraíbles del Núcleo
(ENA)

13 Proteínas asociadas a RNA
Ribonucleoproteínas Célula ENA contiene por lo menos 2 componentes antígenicos: 1º sensible a RNasa y tripsina RNP 2º resistente a las enzimas Sm Pedro Reyes, Biol Anticuerp Antinu, 1999

14 ENA´s PEN 10-200 KDa Aminoacidos dicarboxilicos (glu, asp)
En IFI patrón granular, depende de sustrato y de fase del ciclo celular. Pedro Reyes, Biol Anticuerp Antinu, 1999

15 ENA´s Antígeno Anticuerpo RNA U1,2,4,5 Topo I Histidil sintetasa tRNA
Proteína 75KDa Proteínas 60 KDa, 52 KDa CENP- A,B,C D Anticuerpo Sm Scl-70 Jo-1 Mi-2 Ro/SS-A Centrómero Pedro Reyes, Biol Anticuerp Antinu, 1999

16 TECNICAS / AAN Inmunofluorescencia Inmunodifusión Hemaglutinación
Fijación del complemento ELISA

17 TECNICA DE LABORATORIO
Obtención del suero Diluciones 1:80, 1:160, 1:320, 1:640 Incubar diluciones en HEp-2, 30´ húmeda Lavar en PBS 10´ Incubar celulas HEp-2 con IgG polivalente, 30´ húmeda Lavar con PBS por 10´ Montar con glicerol Interpretar con microscopio de Inmunofluorescencia Rafael Herrera, Biología Exp UAZ, 1999

18 SUBSTRATOS TEJIDO LINEA CELULAR Ratón Riñón Hígado Carcinoma Laríngeo
Cel HEp-2 ELISA Esperanza Avalos, Biolo Exp, UAZ; 1999

19 UTILIDAD CLINICA

20 Annals of Rheumatic Diseases, vol. 73, pp. 17–23, 2014

21 Uso Clínico AAN Nat Rev Rheumatol, May 2017

22 Journal of Immunology Research Volume 2014

23 Uso Clinico AAN Muy útil en: LES Escleroderma LES/medicamentos
Hepatitis Autoinmune EMTC 95-100% 60-80% -- 100% Journal of Immunology Research Volume 2014

24 Uso Clínico AAN Algo Útiles en: S. Sjögren PM/DM 40-70% 30-80%
Journal of Immunology Research Volume 2014

25 Uso Clinico AAN No es útil en: AR EM PTI Enf. Tiroidea Lupus discoide
30-50% 25% 10-30% 5-25% Solomon DH, Arthritis Care Res 2002.

26 Uso Clínico AAN No es util en: Infecciones Neoplasias
Implantes de silicón Fibromialgia Familiares Variable 15-25% 5-25% Journal of Immunology Research Volume 2014

27 Uso Clínico AAN Cuando solicitar:
Evaluación clínica sugiera una enfermedad autoinmune Not for “fishing expedition” a confusing case Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2000

28 Uso Clínico AAN Positivos: 1:80 Con significado clínico (HEp-2) 1:320
Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2010

29 Enfermedades Asociadas con Diferentes Anticuerpos
DNAds RNP Sm Ro La Centrómero LES 60% 30% 15% Raro AR - EMTC 95% títulos altos ESP Títulos bajos 10-15% CREST 60-90% S. Sjögren 70% Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2000

30 Enfermedades Auto inmunes asociadas a Anticuerpos Citoplasmáticos
ANTIGENO CITOPLÁSMICO FRECUENCIA PM tRNA sintetasa 20-30% LES P ribosomal 5-10% GW Proteinasa-3 90% POLIARTERITIS MICROS Mieloperoxidasa 70% CIRROSIS BILIAR PRIMARIA Mitocondria 80% Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2000

31 Medicamentos asociados a AAN positivos
COMUNES MENOS FRECUENTES Procainamida Hasta 60 farmacos han sido implicados Hidralazina Con AAN positivos Fenotiazinas DFH INH Quinidina Anti-TNFa IECAS Koopman, Arthritis and Related Cond; 2001

32 PATRONES DE INMUNO-FLUORESCENCIA

33 PATRONES BÁSICOS Aparato Mitótico Citoplasmático Nuclear
Journal of Autoimmunity, vol. 35, no. 3, pp. 276–290, 2010.

34 Anticuerpos Antinucleares
IFI

35 Anticuerpos Antinucleares
IFI

36 Anticuerpos Antinucleares
IFI

37 Anticuerpos Antinucleares
IFI

38 Anticuerpos Antinucleares
IFI

39 Anticuerpos Antinucleares

40 Anticuerpos Antinucleares

41 PATRONES ESPECIFICOS

42 Anticuerpos contra proteínas de la cromatina

43 Sensibilidad y Especificidad de Pruebas para Auto-anticuerpos
METODO ANTÍGENO SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD APLICACIÓN INMUNOFLUORESCENCIA Crithidia +++ ++++ DNA ELISA DNA, Cardiolipinas, RIA DNA (Farr) Hochberg, Rheumatology, 2015

44 Anti DNA

45 Anti-Topoisomerasa I IFI

46 Anti-Centrómero

47 Anticuerpos contra proteínas no-cromatina

48 Anti U1RNP Sm

49 Anticuerpos contra proteínas del nucleolo

50 Anti-RNA polimerasa I

51 Anticuerpos contra antígenos de la membrana nuclear

52 Anti Lamina

53 Patrones Citoplásmicos

54 Cirrosis biliar primaria
Citoplasma Anti mitocondria Anti P ribosomal Cirrosis biliar primaria Neurolupus

55 CITOPLASMA Anti Lisosomal Anti- Aparato de Golgi LES S. Sjögren, LES

56 ABORDAJE DIAGNOSTICO

57 Antinuclear Antibodies

58 Antinuclear Antibodies

59 Antinuclear Antibodies

60 Antinuclear Antibodies

61 Antinuclear Antibodies

62 Antinuclear Antibodies

63 Antinuclear Antibodies

64 CONCLUSIONES No se deben interpretar en el contexto de “positivos” o “negativos” El en diagnóstico se deben utilizar solo HEp-2

65 CONCLUSIONES LES El mejor examen inicial ante sospecha clínica importante No se deben utilizar para descartar enfermedades reumáticas

66 CONCLUSIONES Sí son positivos, solicitar los anticuerpos específicos
No solicitar ds-DNA o ENA´s, antes de los AAN positivos El valor de los AAN seriados, se desconoce.