1 Zeiss 16 Tutorial de Uso Básico

2 Características Zeiss 16…………………....pag.3-4 Pasos iniciales Uso Zeiss 16……………….pag. 5 Luz Transmitida Trabajo con luz transmitida Campo Claro………………………………………….…pag. 6 Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial DIC……………….……….…pag.7-8 Fluorescencia Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)………………………………pag.9-10 Zeiss 16 “Tutorial de Uso”

3 Zeiss 16 APLICACIONES. Microscopio de Fluorescencia Filtros : 1-DAPI9-VERDE15-ROJO 20-ROJO modificado 24-TRIPLE Microscopio de Luz Transmitida -Contraste Interdiferencial (DIC) -Campo Claro Localización : Microscopía Planta – 1

4 Zeiss 16 CARACTERISTICAS. Zeiss 16 CARACTERISTICAS. Filtros Fluorescencia: 1-Azul/Dapi : BP 365 FT 395 LP Verde: ( ) FT 510 BP 525/50 15-Rojo: BP 546 FT 580 LP Rojo: ( ) BP 546 FT Triple: DBP (485/20+578) FT (500/600) BP ( ) + LP 610 BP ( ) + LP 610 Condensador : 0´9 Filtros/Anillos DIC -DIC I -DIC II -DIC III Filtros/Anillos Fases No tiene Objetivos : x5 x10 (DIC) x20 (DIC) x40 oil (DIC) x63 oil (DIC) x100 oil (DIC) Equipo conectado : -Cámara Princeton Instruments Inc -Pc

5 1-Encendemos el microscopio Zeiss 16 (botón lateral derecho). 2-Encendemos el Ordenador asociado ( PC) para acceder al programa de captura de imágenes. 3-Encendemos la cámara asociada al equipo para la captura de imágenes (cámara Princeton). Pasos Iniciales Uso Zeiss 16

6 Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF) 2-Colocamos la Rueda en posición D ( Campo Claro, luz transmitida Normal). 3-Retiramos de la vía de luz (desplazar a la izquierda): -el polarizador DIC y -el obturador de luz transmitida 4- Con esta configuración ya es posible observar y capturar imágenes en condiciones de luz transmitida normal Colocamos la Rueda superior de filtros en posición D/Vacío

7 Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 1-Observamos las características DIC que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan DIC). Las características de DIC del Objetivo vienen marcadas en la cuña DIC integrada sobre cada Objetivo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. 2-Para consultar el DIC del objetivo se puede retirar con CUIDADO la cuña y observar el número del DIC grabada en la misma. 1 2

8 Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC) 3-Colocamos la rueda en el nº DIC marcado en el objetivo con que trabajamos. 4-Introducimos en la vía de luz el Polarizador DIC ( hacia la derecha) y retiramos el Obturador de transmitida. 5-Insertamos la Barra DIC/Fases hasta su posición interna. La barra tiene 2 posiciones -Interna (para ver en DIC) -Externa (para ver en Contraste de Fases) 6-El equipo queda configurado para ver y capturar en DIC

9 Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) 1-Encender la lámpara de Fluorescencia. Antes de encender la lámpara de fluorescencia es necesario verificar en el Registro de Uso del equipo que han transcurrido un mínimo de 30 minutos desde la sesión previa ( recordar que existe riesgo de explosión de la lámpara de mercurio (vapores tóxicos) si se enciende en caliente). Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia de nuestra muestra cada vez que no estemos capturando la imagen es recomendable USAR la “barra/obturador de Fluorescencia”: Introducimos la barra hacia el interior para cerrar la fluorescencia de forma temporal. Todos los microscopios de fluorescencia Zeiss presentan asociado un protector móvil de fluorescencia para el usuario que puede aplicarse/bajarse para evitar la visión directa de la fluorescencia (perjudicial). NORMAS BÁSICAS

10 Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia) Uso de la Fluorescencia. Para trabajar con fluorescencia, es suficiente con girar la rueda de Filtros a la posición deseada en función del marcaje de nuestra muestra : 1-Azul/dapi.9-Verde.15-Rojo.25-Triple.

11 Unidad de Microscopía Centro de Investigación del Cáncer Campus Miguel de Unamuno Salamanca (Spain).