Estudio de la sensibilidad antimicrobiana: definición, metodología y criterios internacionales de interpretación I. López-Hernández UGC de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica Hospital Virgen Macarena

Microorganismo-----Antimicrobiano ANTIBIOGRAMA Microorganismo-----Antimicrobiano

Microorganismo-----Antimicrobiano CATEGORÍAS CLÍNICAS SENSIBLE INTERMEDIO RESISTENTE

OBJETIVOS Antibioterapia empírica Antibioterapia dirigida Detección de mecanismos de resistencia Mapas de resistencia

SELECCION DE ANTIMICROBIANOS Interés clínico Lectura interpretada de antibiograma Vigilancia epidemiológica de resistencia

CRITERIOS INTERNACIONALES DE INTERPRETACION CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute EUCAST European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing SFM Societe Française De Microbiologie COESANT Comité Español del Antibiograma

CRITERIOS INTERNACIONALES DE INTERPRETACION Métodos estandarizados Cepas control ATCC (American Type Culture Collection)

METODOLOGIA METODOS DE DIFUSION EN AGAR Difusión con disco Epsilon test (E test) METODOS DE DILUCIÓN Dilución en agar Dilución en caldo

DIFUSION Difusión con disco Inóculo: Escala McFarland 0.5 Siembra uniforme en medio sólido

DIFUSION Difusión con disco Inóculo: Escala McFarland 0.5 Siembra uniforme en medio sólido Colocación discos de antibióticos (evitar superposición)

DIFUSION Difusión con disco Inóculo: Escala McFarland 0.5 Siembra uniforme en medio sólido Colocación discos de antibióticos (evitar superposición) Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

DIFUSION Difusión con disco Lectura de resultados: Medir diámetro del halo de inhibición

DIFUSION Difusión con disco Interpretación de resultados CUALITATIVO

DIFUSION Difusión con disco VENTAJAS Fácil Rápido Barato INCONVENIENTES Método cualitativo

DIFUSION E test (Epsilon test) Gradiente exponencial de las concentraciones de antimicrobianos

DIFUSION E test (Epsilon test) Inóculo: Escala McFarland 0.5 Siembra uniforme en medio sólido Colocación tiras (orientación tira) Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

DIFUSION E test (Epsilon test) Lectura de resultados

DIFUSION E test (Epsilon test) Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

DIFUSION E test (Epsilon test) VENTAJAS Fácil Rápido Cuantitativo INCONVENIENTES Coste

DILUCION Dilución en caldo

DILUCION Dilución en caldo Solución de antibiótico Inóculo: Escala McFarland 0.5 Dilución 1:100 Macrodilución/Microdilución Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

DILUCION Dilución en caldo Lectura macrodilución Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

DILUCION Dilución en caldo Lectura microdilución Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

DILUCION Dilución en caldo Sistemas semiautomatizados

DILUCION Dilución en caldo Sistemas semiautomatizados

DILUCION Dilución en caldo VENTAJAS Cuantitativo INCONVENIENTES Coste Laborioso

DILUCION Dilución en agar

DILUCION Dilución en agar Preparación de placas con antibióticos Replicador (múltiples microorganismos) Inóculo Escala McFarland 0.5 Dilución 1:10 Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

DILUCION Dilución en agar Lectura dilución en agar: crecimiento Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

DILUCION Dilución en agar VENTAJAS Cuantitativo INCONVENIENTES Complejo Coste

A. Capacidad bactericida METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida CONCENTRACION MINIMA BACTERICIDA (CMB) CURVAS DE LETALIDAD ACTIVIDAD BACTERICIDA DEL SUERO Uso en investigación No existen técnicas normalizadas Baja reproducibilidad Fase de crecimiento del inóculo Dificultades con microorganismos exigentes

1. Concentración mínima bactericida METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida 1. Concentración mínima bactericida

2. Curvas de letalidad METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida Método cinético de determinación del poder bactericida

3. Actividad bactericida del suero METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida 3. Actividad bactericida del suero

B. Actividad combinada de antimicrobianos METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos METODO DE TABLERO (CHECKERBOARD) CURVAS DE LETALIDAD DIFUSION-DISCO (DISCOS DE APROXIMACION) EFECTOS DE COMBINACION Indiferencia Adición Sinergia Antagonismo

METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 1. Tablero (Checkerboard assay)

METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 2. Curvas de letalidad

METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 3. Difusión

METODOS BIOLOGIA MOLECULAR Detección de mecanismos de resistencia

AREAS DE INVESTIGACION

AREAS DE INVESTIGACION

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