Micropartículas en enfermedad UNIVERSIDAD DE TALCA FACULTAD DE Cs. DE LA SALUD PROGRAMA MAGISTER EN Cs. BIOMÉDICAS Micropartículas en enfermedad atero-trombótica T.M. LIC. ROXANA ORREGO

¿Que son las micropartículas ? Son fragmentos de membranas celulares pueden ser liberados de diferentes células: sanguíneas, endoteliales y musculares lisas Las micropartículas resultan de un proceso de exocitosis que transloca fosfatidilserina desde dentro a fuera de la membrana celular. El tamaño de estas MP va desde 0,1-1 m e incluso < 0,1 m y ellas expresan en su superficie fosfatidilserina, marcadores antigénicos de la célula de origen y también se ha mostrado la presencia de factor tisular.

Activación Apoptosis Lisis Mediadores Anticuerpos Citoquinas inflamatorias Hipoxia/ Isquemia Efectos mecánicos:Viscosidad Toxinas Complemento Etc Estados patológicos Síndrome coronario agudo Púrpura trombocitopénico inmune Púrpura trombocitopénico trombótico Sepsis Síndrome antifosfolípidios Esclerosis múltiple Etc. Activación Apoptosis Lisis Ca 2+

Efectos de las Micropartículas Apoptosis de células musculares ocurre durante el desarrollo y la progresión de la placa aterosclerótica Las micropartículas derivadas de células apoptóticas poseen alta actividad procoagulante, la trombogenicidad de la placa. evento isquémico o infarto agudo la miocardio (IAM). Mallat y col examinaron el rol de la célula apoptótica in situ en la promoción de trombogenicidad de la placa. FT es clave en la iniciación de la coagulación. En vaso normal la expresión de FT (adventicia) FT en la placa aterosclerótica, ha sido demostrado que es el mayor determinante de la trombogenicidad de esta. El FT es dependiente de la concentración de fosfatidilserina

Boulanger y col. demostraron que las MP circulantes de pacientes con IAM causan una severa disfunción endotelial en vasos sanguíneos sanos, ya que afectan la vía de transducción del oxido nítrico (NO). El NO derivado del endotelio es el mayor mediador involucrado en la relajación. El estudio sugiere que en pacientes con IAM NO pero sin cambios en la expresión de NO sintasa. Los datos demostraron que las MP pueden afectar el post-receptor de la vía de transducción del NO. Las MP presentes en sangre periférica de estos pacientes con IAM disminuyen la relajación mediada por NO disfunción endotelial respuesta vasodilatadora lo que se observa tras el infarto al miocardio. MP a isquemia miocárdica y posterior oclusión coronaria.

MP llevan componentes citoplasmáticos como fosfolípidos aniónicos, con potencial procoagulante y los receptores de la superficie celular podrían ampliar el proceso de coagulación por interacción de estos con plaquetas o células proinflamatorias. Se ha hipotetizado que las MP podrían unirse a plaquetas formando agregados MPE-plaquetas el que contribuiría a la formación del trombo. Esto se ha comprobado in vitro y posteriormente en sangre periférica de sujetos con enfermedad coronaria estable e IAM. La formación de estos agregados sería calcio dependiente. Los sujetos con enfermedad coronaria estable muestran un gran número de estos agregados versus los sujetos control al relacionarlo al daño crónico.

PAI-1 puede promover la formación de MPE con potencial procoagulante. Estudios con animales de experimentación han mostrado que PAI-1 aumenta el número de MPE. Ratones deficientes en PAI-1 3 veces la expresión de estas MP Si a ratones deficientes se les administraba PAI-1 se ve recuperación en la expresión de MP. Este fenómeno requiere de cantidades suprafisiológicas de PAI-1, lo que se puede encontrar en pacientes con disfunción endotelial. Así PAI-1 podría servir in vivo como iniciador del proceso de formación de MP con actividad procoagulante la tasa de formación de trombina. Además trombina puede estimular la síntesis de PAI-1, lo que aumentaría aún más la liberación de estas MP a la circulación promoviendo así la formación de trombos.

Se ha sugerido que la hipertensión arterial (HTA) confiere un estado protrombótico caracterizado por anormalidades de la función endotelial y activación plaquetaria MP derivadas de endotelio o plaquetas, jugarían un rol en el daño o injuria vascular. Preston y col, realizaron un estudio en 3 grupos de sujetos HTA severa no controlada, leve no controlada y normotensos. MPE eran elevados en HTA severo y más bajos en HTA leve. Observó también una asociación positiva de MPE con el nivel absoluto de presión sistólica y diastólica. MPP se vieron elevadas en HTA severa pero no en HTA leve y el grupo normotenso. También se encontró correlación positiva de MPP con nivel absoluto de presión sanguínea, sugiriendo que las MPP pueden ser un marcador del efecto de la presión sanguínea sobre la actividad plaquetaria.

Métodos para determinar micropartículas Uno de los métodos más utilizados es el que utiliza AnexianV/protrombinasa captura micropartículas por unión a anexina V + calcio, Posterior a la captura se realiza una identificación del tipo de MP (MPP, MPE, etc) Inconveniente una proporción de MPE no se unen a anexina V. Otro método es el uso de centrifugación en gradientes de densidad. La citometría de flujo es hasta ahora la más utilizada esta se basa en los antígenos que quedan presentes en estas MP una vez que son liberadas. Inconveniente citometría de flujo, no detectan partículas de <0,1 um. Métodos para determinar micropartículas

Métodos para determinar micropartículas Un nuevo método el cual se basa en un ensayo inmunofluorimétrico que detecta el antígeno GPIIb. Usa anticuerpos monoclonales para GPIIb(CD41) conjugado con biotina y otro marcado con el ión europio obteniendo una amplia sensibilidad. Previo al ensayo se debe realizar una ultracentrifugación o filtración de plasma. Así lo que se verá principalmente es el antígeno ubicado en las partículas. Lo importante de esta metodología es que a diferencia de la citometría de flujo se pueden usar muestras congeladas y es independiente del tamaño de la partícula.