La enfermedad segrega con el locus del gen y, posteriormente encontramos una expresión alélica diferencial. Por último en esta y en otra familia se encontró una mutación en el principio del exón 5 de APC mediante el estudio de cDNA. En un caso familiar pudimos estudiar varios miembros en la familia y se realizó un estudio de segregación con microsatélites que flanquean el locus del gen APC. Uno de los probandi que presentaba antecedentes de la enfermedad y un fenotipo severo, resultó portador de la mutación c.5790delA;pGln1930HisfsX40, en el extremo 3’ del gen APC (área asociada a fenotipos atenuados). Otro paciente con fenotipo severo y antecedentes familiares de poliposis presenta una mutación en el área de procesamiento alternativo en el intrón 5 imperceptible mediante secuenciación de DNA que fue encontrada tras el estudio en cDNA. Exon 5Exon 6 Poliposis Adenomatosa Familiar clásica no asociada a mutaciones en los genes APC y MUTYH: ¿Es una entidad con una base genética diferente? Rivera B 1, González S 2, Sánchez-Tomé E 1, Blanco I 2, Mercadillo F 1, Capellá G 2, Robledo M 3,4, Benítez J 1,3, Urioste M 1,3 1 Grupo de Genética humana, Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO), Madrid. 2 Institut Català d'Oncologia, L'Hospitalet de Llobregat, Barcelona. 3 Centro de Investigaciones en Red en Enfermedades Raras (CIBERER), Instituto de Salud Carlos III, Madrid;; y 4 HGrupo de Cáncer Endocrino, Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO), Madrid; España. Introducción y objetivos: La Poliposis Adenomatosa Familiar (PAF) se caracteriza por la presencia de más de 100 adenomas en colon, y por una herencia autosómica dominante asociada a mutaciones en APC. Existen casos de PAF con patrones de herencia recesivos que se deben a mutaciones bialélicas en el gen MUTYH. La tasa de detección de mutaciones germinales depende de las características clínicas del paciente y de la técnica utilizada. En un 80% de las PAF clásicas se detectan mutaciones en APC, mientras que solo en un 20-30% de los fenotipos atenuados. Las mutaciones en el gen MUTYH, son más comunes en las formas atenuadas pero explican también un 4-5% de las clásicas. Pacientes En un trabajo previo en el que se estudiaron 136 familias con PAF clásica, el 21% resultaron negativas para mutaciones en APC y MUTYH 1. Hemos comparado las características clínica entre los pacientes con mutación en APC y aquellos sin mutación ni en APC ni en MUTYH. * El grupo APC-positivo incluye mutaciones y grandes reordenamientos. ** Los casos se consideran severos cuando se desarrollan más de pólipos ; NS: No significativo; ME: Manifestations Extracolónicas. Objetivos : Nuestro objetivo actual se basa en determinar las bases moleculares de 28 familias APC/MUTYH- negativas. Primero descartando la implicación de los genes APC y MUTYH. Posteriormente estudiando otros genes implicados en la vía Wnt y tratando de identificar perfiles de expresión diferenciales mediante una matriz de tejido. CONCLUSIONES: Las familias APC/MUTYH- negativas constituyen un grupo de gran interés. Hemos ampliado el estudio convencional de los genes APC y MUTYH encontrando 4/28 ( 14.2%) de casos positivos. Estas familias negativas probablemente conforman un grupo genéticamente heterogéno lo que podría explicar las diferencias clínicas. En el momento actual continuamos el estudio de otros genes implicados en la vía Wnt y lo completaremos con una mtriz de tejido para analizar la expresión de proteínas implicadas en rutas de carcinogénesis colorrectal. Hemos estudiado por secuenciación directa los promotores 1A y 1B del gen APC encontrando una variante de significado desconocido en la que tenemos que realizar nuevos estudios para discernir su patogenicidad. Además hemos estudiado los patrones de metilación germinal de ambos promotores en 3 casos APC/MUTYH– que mostraron desbalance alélico o valores cercanos a los límites considerados positivos. Evaluamos 10 clones de cada muestra y no encontramos ningún patrón de metilación significativo. Concluimos aís que los cambios epigenéticos no son responsables de los desbalances alélicos en estas familias. Box 1: CASO FAMILIAR Box 2: ESTUDIO DE OTRAS REGIONES DEL GEN. Referencias: 1 B. Rivera et al. Clinical and genetic characterization of classical forms of familial adenomatous polyposis: a Spanish population study. Ann of Oncol (2010). Hemos evaluado un posible desbalance alélico mediante la técnica del SNaPshot. Previamente se determinaron los niveles de expresión en controles sanos junto con líneas celulares para establecer los niveles de expresión normal del gen APC. Dos casos APC+ y otro caso APC/MUTYH- (ver Box 1) mostraron un evidente desbalance alélico. Puntos de corte : 1.5 ASE positivo ASE borderline Box 3: ESTUDIOS DE DESBALANCE ALÉLICO