Papel de la Farmacogenética en el Desarrollo de Fármacos Everson Nogoceke Congreso Nacional de la Sociedad Española de Farmacia Hospitalaria 30 de septiembre 2005

Sumario Promesas de la Farmacogenética Efectos Adversos Ejemplos Roche Center for Medical Genomics Roche Sample Repository (Programa de almacenamiento de muestras) 8

Farmacogenética en I+D Tiempo Invertido en Descubrimiento y Desarrollo Revisión FDA / aprobación Años 2 4 6 8 10 12 14 16 Fase de descubrimiento Tests preclínicos Fase I Post-Comercialización Fase III Aumento rendimiento / eficiencia Reducción de Tiempo Fase IV Fase II

Areas potenciales de uso en desarrollo farmacéutico Metabolismo de fármacos, Seguridad Eficacia; predicción de respuesta Farmacocinética, dosis-respuesta Mecanismo de acción Marcadores de identificación / seguimiento de la enfermedad Estrategia de rescate Soporte a la estrategia de publicaciones

Farmacogenética en la clínica Mejores productos y tratamientos para mejorar el manejo de la enfermedad  Seguridad;  Efectos Adversos  Eficacia (Mejor dosificación, Segmentación de pacientes)

Efectos Adversos de los Fármacos (EAs) Las reacciones adversas a medicamentos pueden ser graves o incluso con consecuencias fatales. Resultando en: Retirada del fármaco del mercado Sin eficacia terapéutica en algunos pacientes Coste excesivo Como resultado de las reacciones adversas a medicamentos, cada año se producen 100.000 muertes en USA y 2.2 millones de hospitalizaciones (Lazarou et. al, Lancet 1998) La dosificación subterapéutica, sobredosificación u olvido de dosis , tienen un coste en USA de más de 100 billones de $ al año en: Hospitalizaciones Pérdida de productividad Muerte prematura (Marshall Nat Biotechnol 1997)

Ejemplos Test diagnósticos farmacogenéticos: Anticipación de la respuesta individual a fármacos Amplichip P450 Pronóstico de la evolución de la enfermedad Amplichip p53 Test de Marcadores Tumorales : Her2/neu y Herceptin® EGFR y Tarceva®

Sólo un médico informado puede estar seguro Eliminando las suposiciones para los clínicos y los pacientes Nuevas herramientas de screening como el test Amplichip p53 pueden dar información For concept illustration purposes only. Not a real or intended diagnosis.

Prevalencia de las mutaciones en cáncer del p53 Distribución a nivel mundial de tumores y ratio de mutaciones en p53 PAÍSES EN DESARROLLO PAÍSES DESARROLLADOS Total de 14.273 mutaciones en p53 C. GALLOU, C. BÉROUD AND T. SOUSSI: p53 DATABASE 12/2001 ISSUE http://p53.curie.fr/p53%20site%20version%202.0/p53%20in%20cancer/p53_databaseANAL.html

AmpliChip p53 El test de mutaciones p53 esta diseñado para identificar pacientes de alto riesgo que necesitan una terapia más agresiva p53 está mutado en el 50% de todos lo tumores humanos. La mutación en p53 esta asociada con un pronóstico desfavorable ( p.e cancer de ovario y vejiga) y relacionado con una baja respuesta a ciertos tratamientos antitumorales, como ocurre en cáncer de mama El Amplichip p53 tendrá un importante papel en la estratificación de pacientes para la selección del tratamiento. Años 5 Media (población de pacientes no estratificada) 50% sobrevive 10 años 10 % Supervivencia 20 40 60 80 100 Subpoblación con mal pronóstico 50% supervivencia < 5 años Necesidad de tratamientos más agresivos TratamientoInicial estandar Subpoblación con buen pronóstico (90% supervicencia > 10 años) TTo estandar aceptable

El Test AmpliChip p53 Detectando el estatus de mutación del gen p53 Un sólo test para detectar > 6.500 posibles diferentes mutaciones Puede proporcionar información relevante sobre la función normal o anómala del guardián del genoma, el gen p53 El objetivo es proporcionar información al especialista útil en la toma de decisiones para mejorar el tratamiento de los pacientes

Secuenciación del gen p53 Unión secuencia DNA específica Cómo funciona el test … Prescripción del test DNA extraido del tumor del paciente Secuenciación del gen p53 del DNA del tumor Mutación en Codon # 248 N- Activación  en Prolina Unión secuencia DNA específica -C Tetramerización Regulación Secuencia Normal Mutación en Codon # 248 3’ 5’ T G G G C A T G A A C C A G A G G C C C A Mutación encontrada en p53 G T A C T T G G A C T C C G G G T G T A C T T G G C C T C C G G G T G T A C T T G G G C T C C G G G T Sondas en el chip G T A C T T G G T C T C C G G G T C G G G T A C T T G G -- C T C C G G G T

Pueden las mutaciones en p53 predecir resultados Pueden las mutaciones en p53 predecir resultados ? Podrían ser de utilidad clínica ? “…65/93 estudios encontraron que…mutaciones-p53 son un factor estadísticamente significativo de mal pronóstico en varios tipos de tumores …” “… [14 de] 19 estudios han encontrado que la presencia de una mutación en p53 estaba asociada a baja respuesta sen varios regímenes de quimioterapia o radioterapia en cáncer de mama, de cabeza y cuello, neoplasias hematológicas, cáncer colorectal, de esófago y ovario y en sarcomas de tejidos blandos” Olivier et al. PROGNOSTIC AND PREDICTIVE VALUE OF TP53 MUTATIONS IN HUMAN CANCER IN: “25 YEARS OF P53 RESEARCH”, KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS IN PRESS, EDITORS: P. HAINAUT & K. WIMAN (2005)

x La familia de receptores HER Claves en la proliferación celular, supervivencia y diferenciación Dominio Tyrosin- kinasa (TK) HER1 EGFR HER2 HER3 HER4 Dominio de unión al ligando x La familia HER, consiste en 4 receptores de transmembrana estrachamente relacionados : : HER1 (EGFR o erbB1), HER2 (erbB2 o neu), HER3 (erbB3) y HER4 (erbB4). Todos estos receptores tienen un dominio de unión al ligando extracelular, una región transmembrana y un dominio intracelular citoplasmático. El dominio citoplasmáticp tiene actividad tirosin-Kinasa que media la auto fosforilación y la fosforilación cruzada del receptor.1 La unión del ligando al receptor induce la dimerización del receptor, resultando en la formación tanto de homodímeros como de heterodímeros con los receptores HER.2 Los miembros de la familia HER tienen diferencias distintivas que afectan a sus funciones, a pesar de ser estructuralmente similares. Más aún, HER2 es una parte pivotal de la red, porque es el compañero/ asociado preferido para la heterodimerización para otros HERSs, aunque no se une a ningún ligando conocido. HER1, 3 y 4 pueden unirse a un rango de ligandos y su especificidad es diferente para cada ligando. HER3 posee muy poca o ninguna actividad tyrosin- kinase y por ello no puede iniciar señal de transducción en forma homodimérica.2 HER1 y HER2 son los receptores mejores estudiados . Ambos receptores están implicados en el crecimiento y diferenciación de las células normales. Sin embargo el descubrimiento de que muchos tumores tienen la expresión de estos receptores alterada o reforzada sugiere un papel en la tumorogénesis. SE han llevado a cabo numerosos estudios , que muestran que la señal disreguladora de HER1 y HER2, y posiblemente e HER3 y HER4, tiene un papel en el desarrollo y progresión de muchos tumores.3 Como resultado de la implicación de HER1 y HER2 en la patogénesis tumoral , se han constituido en targets para el desarrollo de nuevas terapias anticancer dirigidas. Adicionalmente al tipo salvaje de la familia , hay varias formas mutantes del receptor HER1 . La mutación más común es EGFRvIII, la cúal aparece en muchos cánceres humanos. EGFRvIII carece del dominio extracelular de unión al ligando y está constitucionalmente activado.Se piensa que esto desempeña un papel clave en la progresión de tumores altamente agresivos 4 1. Wells A. Int J Biochem Cell Biol 1999;31:637–43. 2. Yarden Y, Sliwkowski M. Nat Rev Mol Cell Biol 2001;2:127–37. 3. Salomon D, et al. Crit Rev Oncol Hematol 1995;19:183–232. 4. Pedersen M, et al. Ann Oncol 2001;12:745–60.

Vías tumorales clave activadas Ejemplo: dímeros HER2 – HER3 HER2 HER3 PLC g PI3K PKC PDK-1 Ras Sos PTEN AKT Grb2 Raf Shc p70 S6K JAK Bad/Bcl2 Mek GSK3 STAT Erk Myc p27 E2F KIP1 Jun/Fos Sp1 FKHR-L1 Elk1 PEA3 CyclinD1 Citri A, et al. Exp Cell Res 2003

Vías tumorales clave activadas Ejemplo: dímeros HER2 – HER3 HER2 HER3 MAPK AKT PLC g PI3K PKC PDK-1 Ras Sos PTEN AKT Grb2 Raf Shc p70 S6K JAK Bad/Bcl2 Proliferación Celular Superación de la apoptosis Mek GSK3 STAT Erk Myc p27 Jun/Fos E2F KIP1 Sp1 FKHR-L1 Elk1 PEA3 CyclinD1

Expresión normal de HER2 … En tejido mamario

Amplificación de HER2 … Lleva a la sobreexpresión de HER2

La unión de Herceptin® a HER2

Herceptin mejora la supervivencia en cáncer de mama metastásico (CMM) M77001 trial Marty et al., JCO 2005, 23

Tarceva Pequeña molécula inhibidora del HER1 (EGFR) tyrosin kinasa P Dominio Tyrosin kinasa Dominio de unión al ligando Membrana celular Signaling P

Tarceva Modo de acción antitumoral TarcevaTM P P ¯ Proliferación Signaling P P ¯ Proliferación ­ Apoptosis ¯ Invasión ­ Sensibilidad a quimioterapia ¯ Metástasis ¯ Adhesión ¯ Angiogénesis

Supervivencia Total: todos los pacientes (NSCLC) 1.00 0.75 0.50 0.25 42.5% de aumento de la mediana de supervivencia Función de distribución de supervivencia HR* = 0.73, p<0.001 BR.21 Los análisis pre-especificados en el plan de análisis estadístico para el estudio BR.21 incluían estratificaciones basadas en el performance status, tratamiento previo (incluyendo terapia con platino , respuesta a al tratamiento previo y de acuerdo al estatus HER1/EGFR . El tratamiento con Tarceva de pacientes con Cáncer de pulmón no microcíticos, tuvo como resultado una mejora estadísticamente significativa en el objetivo primario de supervivencia total versus placebo. El hazard ratio ( ratio de riesgo) ( fue 0.72 en el análisis univariable de todos los pacientes, (por ejemplo pacientes tratados con Tarceva tuvieron una probabilidad de supervivencia superior en un 28% que aquellos tratados con placebo). Los pacientes tratados con TarcevaTM (mediana de supervivencia = 6.7 meses) sobrevivieron un 30% más tiempo que los pacientes tratados con placebo (mediana de supervivencia = 4.7 meses). Con el tratamiento con Tarceva , el ratio de supervivencia al año aumentó en un 48% TarcevaTM es el único inhibidor de HER1/EGFR que ha demostrado prolongar la supervivencia de pacientes con cáncer avanzado de células no microcíticas. TarcevaTM Placebo 0 5 10 15 20 25 30 Tiempo de supervivencia (meses) *HR y valor de p ajustados por factores de estratificación a la randomización + estatus HER1/EGFR

Gen EGFR (5616 bp) 90 mutaciones somáticas C T del GGAATTAAGAGAAGC T G CCCCGGCGCAGCGCGGCCGCAGCAGCCTCCGCCCCCCGCACGGTGTGAGCGCCCGACGCGGCCGAGGCGGCCGGAGTCCCGAGCTAGCCCCGGCGGCCGCCGCCGCCCAGACCGGACGACAGGCCACCTCGTCGGCGTCCGCCCGAGTCCCCGCCTCGCCGCCAACGCCACAACCACCGCGCACGGCCCCCTGACTCCGTCCAGTATTGATCGGGAGAGCCGGAGCGAGCTCTTCGGGGAGCAGCGATGCGACCCTCCGGGACGGCCGGGGCAGCGCTCCTGGCGCTGCTGGCTGCGCTCTGCCCGGCGAGTCGGGCTCTGGAGGAAAAGAAAGTTTGCCAAGGCACGAGTAACAAGCTCACGCAGTTGGGCACTTTTGAAGATCATTTTCTCAGCCTCCAGAGGATGTTCAATAACTGTGAGGTGGTCCTTGGGAATTTGGAAATTACCTATGTGCAGAGGAATTATGATCTTTCCTTCTTAAAGACCATCCAGGAGGTGGCTGGTTATGTCCTCATTGCCCTCAACACAGTGGAGCGAATTCCTTTGGAAAACCTGCAGATCATCAGAGGAAATATGTACTACGAAAATTCCTATGCCTTAGCAGTCTTATCTAACTATGATGCAAATAAAACCGGACTGAAGGAGCTGCCCATGAGAAATTTACAGGAAATCCTGCATGGCGCCGTGCGGTTCAGCAACAACCCTGCCCTGTGCAACGTGGAGAGCATCCAGTGGCGGGACATAGTCAGCAGTGACTTTCTCAGCAACATGTCGATGGACTTCCAGAACCACCTGGGCAGCTGCCAAAAGTGTGATCCAAGCTGTCCCAATGGGAGCTGCTGGGGTGCAGGAGAGGAGAACTGCCAGAAACTGACCAAAATCATCTGTGCCCAGCAGTGCTCCGGGCGCTGCCGTGGCAAGTCCCCCAGTGACTGCTGCCACAACCAGTGTGCTGCAGGCTGCACAGGCCCCCGGGAGAGCGACTGCCTGGTCTGCCGCAAATTCCGAGACGAAGCCACGTGCAAGGACACCTGCCCCCCACTCATGCTCTACAACCCCACCACGTACCAGATGGATGTGAACCCCGAGGGCAAATACAGCTTTGGTGCCACCTGCGTGAAGAAGTGTCCCCGTAATTATGTGGTGACAGATCACGGCTCGTGCGTCCGAGCCTGTGGGGCCGACAGCTATGAGATGGAGGAAGACGGCGTCCGCAAGTGTAAGAAGTGCGAAGGGCCTTGCCGCAAAGTGTGTAACGGAATAGGTATTGGTGAATTTAAAGACTCACTCTCCATAAATGCTACGAATATTAAACACTTCAAAAACTGCACCTCCATCAGTGGCGATCTCCACATCCTGCCGGTGGCATTTAGGGGTGACTCCTTCACACATACTCCTCCTCTGGATCCACAGGAACTGGATATTCTGAAAACCGTAAAGGAAATCACAGGGTTTTTGCTGATTCAGGCTTGGCCTGAAAACAGGACGGACCTCCATGCCTTTGAGAACCTAGAAATCATACGCGGCAGGACCAAGCAACATGGTCAGTTTTCTCTTGCAGTCGTCAGCCTGAACATAACATCCTTGGGATTACGCTCCCTCAAGGAGATAAGTGATGGAGATGTGATAATTTCAGGAAACAAAAATTTGTGCTATGCAAATACAATAAACTGGAAAAAACTGTTTGGGACCTCCGGTCAGAAAACCAAAATTATAAGCAACAGAGGTGAAAACAGCTGCAAGGCCACAGGCCAGGTCTGCCATGCCTTGTGCTCCCCCGAGGGCTGCTGGGGCCCGGAGCCCAGGGACTGCGTCTCTTGCCGGAATGTCAGCCGAGGCAGGGAATGCGTGGACAAGTGCAACCTTCTGGAGGGTGAGCCAAGGGAGTTTGTGGAGAACTCTGAGTGCATACAGTGCCACCCAGAGTGCCTGCCTCAGGCCATGAACATCACCTGCACAGGACGGGGACCAGACAACTGTATCCAGTGTGCCCACTACATTGACGGCCCCCACTGCGTCAAGACCTGCCCGGCAGGAGTCATGGGAGAAAACAACACCCTGGTCTGGAAGTACGCAGACGCCGGCCATGTGTGCCACCTGTGCCATCCAAACTGCACCTACGGATGCACTGGGCCAGGTCTTGAAGGCTGTCCAACGAATGGGCCTAAGATCCCGTCCATCGCCACTGGGATGGTGGGGGCCCTCCTCTTGCTGCTGGTGGTGGCCCTGGGGATCGGCCTCTTCATGCGAAGGCGCCACATCGTTCGGAAGCGCACGCTGCGGAGGCTGCTGCAGGAGAGGGAGCTTGTGGAGCCTCTTACACCCAGTGGAGAAGCTCCCAACCAAGCTCTCTTGAGGATCTTGAAGGAAACTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTGGGCTCCGGTGCGTTCGGCACGGTGTATAAGGGACTCTGGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTTAAAATTCCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTCGATGAAGCCTACGTGATGGCCAGCGTGGACAACCCCCACGTGTGCCGCCTGCTGGGCATCTGCCTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCACGCAGCTCATGCCCTTCGGCTGCCTCCTGGACTATGTCCGGGAACACAAAGACAATATTGGCTCCCAGTACCTGCTCAACTGGTGTGTGCAGATCGCAAAGGGCATGAACTACTTGGAGGACCGTCGCTTGGTGCACCGCGACCTGGCAGCCAGGAACGTACTGGTGAAAACACCGCAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAATACCATGCAGAAGGAGGCAAAGTGCCTATCAAGTGGATGGCATTGGAATCAATTTTACACAGAATCTATACCCACCAGAGTGATGTCTGGAGCTACGGGGTGACCGTTTGGGAGTTGATGACCTTTGGATCCAAGCCATATGACGGAATCCCTGCCAGCGAGATCTCCTCCATCCTGGAGAAAGGAGAACGCCTCCCTCAGCCACCCATATGTACCATCGATGTCTACATGATCATGGTCAAGTGCTGGATGATAGACGCAGATAGTCGCCCAAAGTTCCGTGAGTTGATCATCGAATTCTCCAAAATGGCCCGAGACCCCCAGCGCTACCTTGTCATTCAGGGGGATGAAAGAATGCATTTGCCAAGTCCTACAGACTCCAACTTCTACCGTGCCCTGATGGATGAAGAAGACATGGACGACGTGGTGGATGCCGACGAGTACCTCATCCCACAGCAGGGCTTCTTCAGCAGCCCCTCCACGTCACGGACTCCCCTCCTGAGCTCTCTGAGTGCAACCAGCAACAATTCCACCGTGGCTTGCATTGATAGAAATGGGCTGCAAAGCTGTCCCATCAAGGAAGACAGCTTCTTGCAGCGATACAGCTCAGACCCCACAGGCGCCTTGACTGAGGACAGCATAGACGACACCTTCCTCCCAGTGCCTGAATACATAAACCAGTCCGTTCCCAAAAGGCCCGCTGGCTCTGTGCAGAATCCTGTCTATCACAATCAGCCTCTGAACCCCGCGCCCAGCAGAGACCCACACTACCAGGACCCCCACAGCACTGCAGTGGGCAACCCCGAGTATCTCAACACTGTCCAGCCCACCTGTGTCAACAGCACATTCGACAGCCCTGCCCACTGGGCCCAGAAAGGCAGCCACCAAATTAGCCTGGACAACCCTGACTACCAGCAGGACTTCTTTCCCAAGGAAGCCAAGCCAAATGGCATCTTTAAGGGCTCCACAGCTGAAAATGCAGAATACCTAAGGGTCGCGCCACAAAGCAGTGAATTTATTGGAGCATGACCACGGAGGATAGTATGAGCCCTAAAAATCCAGACTCTTTCGATACCCAGGACCAAGCCACAGCAGGTCCTCCATCCCAACAGCCATGCCCGCATTAGCTCTTAGACCCACAGACTGGTTTTGCAACGTTTACACCGACTAGCCAGGAAGTACTTCCACCTCGGGCACATTTTGGGAAGTTGCATTCCTTTGTCTTCAAACTGTGAAGCATTTACAGAAACGCATCCAGCAAGAATATTGTCCCTTTGAGCAGAAATTTATCTTTCAAAGAGGTATATTTGAAAAAAAAAAAAAGTATATGTGAGGATTTTTATTGATTGGGGATCTTGGAGTTTTTCATTGTCGCTATTGATTTTTACTTCAATGGGCTCTTCCAACAAGGAAGAAGCTTGCTGGTAGCACTTGCTACCCTGAGTTCATCCAGGCCCAACTGTGAGCAAGGAGCACAAGCCACAAGTCTTCCAGAGGATGCTTGATTCCAGTGGTTCTGCTTCAAGGCTTCCACTGCAAAACACTAAAGATCCAAGAAGGCCTTCATGGCCCCAGCAGGCCGGATCGGTACTGTATCAAGTCATGGCAGGTACAGTAGGATAAGCCACTCTGTCCCTTCCTGGGCAAAGAAGAAACGGAGGGGATGGAATTCTTCCTTAGACTTACTTTTGTAAAAATGTCCCCACGGTACTTACTCCCCACTGATGGACCAGTGGTTTCCAGTCATGAGCGTTAGACTGACTTGTTTGTCTTCCATTCCATTGTTTTGAAACTCAGTATGCTGCCCCTGTCTTGCTGTCATGAAATCAGCAAGAGAGGATGACACATCAAATAATAACTCGGATTCCAGCCCACATTGGATTCATCAGCATTTGGACCAATAGCCCACAGCTGAGAATGTGGAATACCTAAGGATAGCACCGCTTTTGTTCTCGCAAAAACGTATCTCCTAATTTGAGGCTCAGATGAAATGCATCAGGTCCTTTGGGGCATAGATCAGAAGACTACAAAAATGAAGCTGCTCTGAAATCTCCTTTAGCCATCACCCCAACCCCCCAAAATTAGTTTGTGTTACTTATGGAAGATAGTTTTCTCCTTTTACTTCACTTCAAAAGCTTTTTACTCAAAGAGTATATGTTCCCTCCAGGTCAGCTGCCCCCAAACCCCCTCCTTACGCTTTGTCACACAAAAAGTGTCTCTGCCTTGAGTCATCTATTCAAGCACTTACAGCTCTGGCCACAACAGGGCATTTTACAGGTGCGAATGACAGTAGCATTATGAGTAGTGTGGAATTCAGGTAGTAAATATGAAACTAGGGTTTGAAATTGATAATGCTTTCACAACATTTGCAGATGTTTTAGAAGGAAAAAAGTTCCTTCCTAAAATAATTTCTCTACAATTGGAAGATTGGAAGATTCAGCTAGTTAGGAGCCCACCTTTTTTCCTAATCTGTGTGTGCCCTGTAACCTGACTGGTTAACAGCAGTCCTTTGTAAACAGTGTTTTAAACTCTCCTAGTCAATATCCACCCCATCCAATTTATCAAGGAAGAAATGGTTCAGAAAATATTTTCAGCCTACAGTTATGTTCAGTCACACACACATACAAAATGTTCCTTTTGCTTTTAAAGTAATTTTTGACTCCCAGATCAGTCAGAGCCCCTACAGCATTGTTAAGAAAGTATTTGATTTTTGTCTCAATGAAAATAAAACTATATTCATTTCCACTCTAAAAAAAAAAAAAAAAA C T del GGAATTAAGAGAAGC T G T A 90 mutaciones somáticas

Precisión analítica del análisis de mutaciones Multiples variables complejas: Heterogeneicidad de tejido Limitada cantidad y calidad de la muestra (FFPE) Microdisección por laser (LCM) /macrodisección pre-amplification por PCR 2 amplificaciones por cada uno de los 4 exones Cómo manejar los abandonos ? Cómo manejar las mutaciones no replicadas – artefactuales o manifestaciones cuantitativas relativas a abundancia de mutaciones? Experiencia propia – utilizando diferentes algoritmos: Algoritmo 1: 6.1% (13 mut / 200 wt / 94 indeterminable) Algoritmo 2: 7.5% (15 mut / 186 wt / 106 indeterminable) Algoritmo 3: 9.9% (23 mut / 210 wt / 74 indeterminable)

Precisión analítica: secuenciación EGFR algunas veces, no tan sencillo … Wild type no ambigua wild t vs mutación? wild t vs mut vs artifactual? wild type ? Wild type Mut “conocida” Mut. “nueva” fallo wt Mut”conocida” Mut.“nueva” fallo wild type vs mutación? “mutación conocida” no ambigua Mut conocidad vs nueva vs ambas? mutación? Wild type Mut “conocida” Mut. “nueva” fallo 1ª PCR 2ª PCR wild t vs mut vs artifactual? Mut conocidad vs nueva vs ambas “ Mutación nueva” no ambigua Mutación nueva ? Wild type Mut “conocida” Mut. “nueva” fallo wild type ? Mutación conocida ? “Nueva mutación”? desconocido no ambiguo Wild type Mut “conocida” Mut. “nueva” fallo

Grupos de Trabajo en el Centro de Medicina Genómica de Roche (RCMG) Director: K. Lindpaintner Information Science Genetics Exploratory Research Applied Immunology Proteomics Protein Analytics Functional Genomics Roche Clinical Biomarker Center RSR BSR Partnerships RD/LCT Genética Genómica Funcional Inmunología Aplicada Proteómica Análisis de Proteinas Información científica Investigación Exploratoria Centro de biomarcadores clínicos Colaboradores en biomarcadores. Investigación y desarrollo/ Unidades de Marketing Centro de Almacenamiento de biomarcadores. Centro de Almacenamiento de muestras

Roche Sample Repository (RSR) Programa de almacenamiento de muestras Misión: Recoger y almacenar muestras biológicas de pacientes reclutados en Ensayos Clínicos promovidos por Roche. Las muestras del RSR son utilizadas para identificar factores genéticos, predictivos de la probabilidad de respuesta y tolerancia al tratamiento.. Política del Programa RSR : Las muestras y datos son anonimizados en los 6 meses siguientes al cierre de la base de datos del estudio. El ámbito de la investigación se restringe a : El fármaco y su indicación Problemas relacionados Las muestras se almacenan por un periodo máximo de 15 años Los datos del RSR se analizan de forma agregada No se obtienen resultados individuales La clave para llevar a cabo investigación framacogenética es tener acceso a muestras de AND procedente de pacientes tratados. Por esta razón, Roche ha establecido el programa RSR ( de almacenamiento de muestras) con e objetivo de recoger y almacenar muestras biológicas de los pacientes reclutados en Ensayos Clínicos sponsorizados por la Compañía Las muestras así conservadas, son utilizadas como fuente para identificar factores genéticos que puedan predecir la probabilidad de respuesta al tratamiento y su tolerancia.

Los Kits de muestras constituidos por contenedores con EDTA y etiquetas de códigos de barras, se envían al lugar del investigador, siendo necesaria la obtención de la aprobación por parte del Comité Ético y tener debidamente firmado el consentimiento informado por parte del paciente para su participación en el Ensayo Clínico. También se envía al investigador el protocolo de recogida de muestras ( programa RSR) y un consentimiento informado específico para la recogida de la muestra biológica del paciente. Por una parte, se introduce la información de los cuadernos de recogida de datos ( CRFs) del Ensayo Clínico, y si el paciente participa o no en el programa de recogida de muestras, en la Base de Datos Clínicos de Roche. Cuando el estudio se cierra se extrae la información sobre eficacia y seguridad y estos datos reciben un identificador anonimizado. Paralelamente, se recogen 9 ml de sangre total de cada paciente que consiente participar en el programa de recogida de muestras, que es enviada a Roche. Estas muestras se reciben y registran en la oficina central de muestras de Roche, siendo etiquetadas con un identificador anonimizado y almacenadas en el RSR. De estas muestras de sangre total se extrae el DNA y las muestras son genotipadas y anonimizadas. Los datos clínicos anonimizados se fusionan con los genotipos también anonimizados, realizándose entonces estudios estadísticos para testar las hipótesis farmacogenéticas

ANONIMIZACIÓN Oficina Central de Muestras Lugar del Investigador Muestra Identificada por el Nº de ID del Paciente Muestra Identificada por Identificador anonimizado Oficina Central de Muestras ANONIMIZACIÓN Roche Sample Repository Muestras de sangre Lugar del Investigador Extracción DNA y genotipado Datos Genéticos Datos Clínicos Base de Datos Ensayo Clínico Datos Clínicos Identificados por Identificador anonimizado Datos Clínicos identificados por el Nº de ID del Paciente

Gracias ! 8