Seroprevalencia y Factores de Riesgo Asociados a Riquetsiosis (Rickettsia rickettsii) en Humanos en Ensenada, Baja California, México. DR. JORGE FIELD

INTRODUCCIÓN La riquetsiosis causada por Rickettsia rickettsii (bacteria intracelular obligada) es transmitida por la garrapata Rhipicepalus sanguineus en México y es capaz de infectar a vertebrados incluyendo a humanos.

INTRODUCCIÓN Los síntomas son: Fiebre, artralgias, mialgias, náuseas, vómitos, dolor abdominal, exantemas, signos neurológicos, manifestaciones hemorrágicas, epistaxis, trombocitopenia, elevación de transaminasas, leucocitosis, neutrofilia. La mortalidad puede ser del 30% en pacientes no tratados

En México los principales vectores son: Rhipicephalus sanguineus Amblyoma americanus

OBJETIVO Demostrar que existe riquetsiosis en Ensenada, Baja California ya que en un brote de riquetsiosis en Baja California en el 2008 y 2009 no se reportaron casos. Sospechosos – 1453 Probables – 734 Confirmados – 278 Mexicali – 96% Tijuana – 4% Ensenada - 0% Defunciones – sospechosos (13) Defunciones confirmadas por el CDC (8) Tijuana 4% Mexicali 96% Ensenada 0%

En base a lo anterior se planteó el siguiente objetivo: En Ensenada contamos con las condiciones geográficas, demográficas, epidemiológicas, socioeconómicas, marginación y pobreza, todo propicio para el desarrollo de riquetsiosis. En base a lo anterior se planteó el siguiente objetivo: Estimar la seroprevalencia para riquetsiosis (Rickettsia ricketsii) en humanos y medir su asociación a factores de riesgo en Ensenada, Baja California.

Material y Método Diseño: Es un estudio prospectivo, descriptivo, seccional, cruzado, efectuado de Octubre 2009-Agosto 2011. Se incluyeron pacientes mayores de un año de edad, que acudieron a uno de los 3 laboratorios en la zona urbana de Ensenada, Baja California.

Análisis de muestras: Se realizaron en el laboratorio de Ciencias Veterinarias de la UABC

Consideraciones éticas y criterios de inclusión Este estudio cumplió con los lineamientos de investigación y ética que establece la declaración de Helsinki. Se incluyeron pacientes mayores de un año de edad, de ambos sexos que acudieron por cualquier motivo y fue requisito que contaran con carta de consentimiento informado y autorizado por el padre.

Tamaño de la muestra 384 pacientes

Toma de muestra Se recolectó 2 ml de sangre en tubos de 3ml sin Etilen Diamino Tetra Acético (EDTA) por punción venosa radial cubital, previa asepsia. Las muestras fueron identificadas con números correspondientes al cuestionario aplicado a cada paciente.

Fueron centrifugadas a 3500 RPM por 10 minutos para obtener el suero para efectuar las pruebas de ELISA e IFA. El suero fue almacenado a -20 ºC hasta el momento de realizar las pruebas serológicas.

Análisis Serológico Los anticuerpos contra Rickettsia rickettsii fueron medidos por el Kit Rickettsia Rickettsi Elisa Helica Biosystem,Inc. SEPARAR EN 2 DIAPOSITIVASD

Análisis Serológico Este detecta y semicuantifica IgG con una sensibilidad de 99.5% y especificidad de 96% en perros

El Kit se adaptó para uso en humanos usando un conjugado anti-IgG humana a una dilución de 1: 40,000.

Las muestras fueron analizadas en un lector de ELISA, usando un lector de 450nm y de los resultados se estimó la seroprevalencia.

Para determinar la sensibilidad y la especificidad en humanos, se sometieron 32 muestras (12 seropositivas y 20 negativas tomadas al azar) a IFA por ser la prueba de ORO en pruebas serológicas. Se uso el estadístico Kappa para medir la concordancia entre IFA y ELISA.

VALOR DE CORTE Se obtuvo con el promedio de 20 sueros de personas clínicamente sanas sin datos de riquetsiosis ni mordeduras de garrapata más 2 desviaciones estándar, resultando  0.569  Densidad Óptica

Controles Positivos Se usaron 2 sueros: Uno del laboratorio de Parasitología del Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva y Salud Animal de la Universidad de Sao Paulo, Brazil.

Otro donado por ISESALUD declarado positivo por el INDRE Los sueros que resultaron positivos a ELISA fueron probados con IFA.

Factores de Riesgo y Signos Clínicos Para evaluar los factores de riesgo se aplicó un cuestionario al momento de tomar las muestras

Factores de Riesgo Colonia de residencia Edad Sexo Ocupación Perros en el hogar Antecedente de mordedura de garrapata Tipo de patio (tierra) Desparasitación de mascota contra garrapata Estancia del perro calle/hogar Poner imagen

Análisis Estadístico Se diseñó una base de datos usando el programa EXCEL (Microsoft) para la captura y manejo de información con los siguientes datos: Resultado de los análisis serológicos en humanos Resultados de los cuestionarios

Análisis Estadístico El valor de seroprevalencia se generó de la siguiente ecuación: Número de reactivos positivos Prevalencia: ----------------------------------------- x 100 Número total en el grupo

El valor generado de seroprevalencia fue mayor que cero (p<0.05) RESULTADOS El valor generado de seroprevalencia fue mayor que cero (p<0.05) La seroprevalencia ajustada de riquetsiosis fue de 3.9 (95% IC 0.8 – 5.3) De 384 pacientes, 49 fueron sospechosos o sea el 12.7% porque presentaron 4 o más de las siguientes manifestaciones clínicas: Fiebre, eritema, epistaxis, cefalea, vómito, edema o haber sido mordido por alguna garrapata

Ni en grupos de edad ni ocupación El valor de seroprevalencia entre hombres y mujeres no fue diferente (p>0.5) No se observó asociación entre factores de riesgo con los seropositivos Epistaxis, vómitos, artralgias y mialgias Si hubo asociación de la seropositividad con:

Prueba de Concordancia entre los Resultados de ELISA e IFA Los valores de sensibilidad generados por el Kit comercial Rickettsia Rickettsii Elisa Helica Biosystem Inc. fue de 84% Y la especificidad de 94%

La alta especificidad (94%) puede deberse a la calidad del antígeno fijado en las placas del kit, ya que la especificidad de ELISA dependerá de la calidad del antígeno que se fije en la placa. Existen unos lipopolisacaridos específicos de la capa externa de Rickettsia rickettsii que se han utilizado como antígeno en las placas de ELISA. La sensibilidad del 84% puede deberse al alto valor del punto de corte. Letra mas grande

Al confrontar los resultados de Elisa ( 12 seropositivos ) con los resultados de IFA  ( 11  seropositivos ) a través del estadístico, Kappa fue de 0.80 diferente a cero (p<0.05) que es alto. La concordancia entre ambas pruebas es que las dos detectan IgG

De 384 pacientes: 12  fueron seropositivos (8 hombres y 4 mujeres) presentando: Cefalea 66% Artralgias y mialgias 50% Dolor abdominal 41% Fiebre 25%

CONCLUSIONES Los resultados demostraron que existe evidencia SEROLÓGICA de Riquetsiosis en humanos en Ensenada, Baja California. Por lo tanto se debe incluir en los diagnósticos diferenciales en el sector salud por tener el 30% de mortalidad en pacientes no tratados.

Conclusiones Con el resultado de 0.80 para el estadístico Kappa entre ELISA y la prueba confirmatoria IFA se traduce una alta confiabilidad en el uso del kit comercial ELISA modificado en humanos para el diagnóstico, ya que es rápido y confiable. Las manifestaciones clínicas son inespecíficas y difíciles de evaluar en estudios serológicos ya que se presentan en las primeras 2 semanas de post infección y los anticuerpos se detectan en sangre hasta por 66 semanas.