PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS INMUNOLOGIA 2009 Dra. Virginia Bolaños de Corzo Departamento de Microbiología FMVZ - USAC

Las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los antigenos inducen la producción especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antigeno – anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunológico.

El estudio de las inmunoreacciones se realiza mediante el empleo de técnicas inmunológicas basadas en la detección de y evaluación de la respuesta humoral ( anticuerpos y complemento) o de base celular (linfocitos T y fagocitos).

SEROLOGIA La medición de las interacciones Antigeno- Anticuerpo con fines diagnósticos. Se realizan en 2 vías: Utilización de anticuerpos específicos para detectar el antigeno.(diagnostico directo) Utilización de antigenos específicos para detectar anticuerpos. (diagnostico indirecto)

La reacción entre el Ag y el Ac es de naturaleza física y química. La fuerzas que los mantienen unidos, son de tipo no covalente, como la atracción electrostática, los puentes de hidrógeno y las fuerzas de Van der Waals y la exclusión del agua.

Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unión, entre un sitio de unión del anticuerpo y un determinante antigénico. Avidez: es la fuerza con la que el anticuerpo multivalente se une a un antígeno multivalente.

Especificidad; capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura química entre muchas. Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antígeno, cuando este y el antígeno que estimulo la producción del anticuerpo especifico comparten un epitopo idéntico o muy similar.

Se debe obtener en forma aséptica. No usar anticoagulante. REACTIVOS Muestra: suero. Se debe obtener en forma aséptica. No usar anticoagulante. Dejar coagular la sangre en forma inclinada. No refrigerar hasta que el coagulo se haya retraído. Transportar en refrigeración. Almacenar el suero en congelación.

La cantidad de sangre que se obtendrá depende de la especie animal: VOLUMEN RECOMENDADO La cantidad de sangre que se obtendrá depende de la especie animal: Bovinos 10 ml. Equinos 10 ml. Cerdos 5 ml. Ovinos y caprinos 5 ml. Pollos 1 ml. Gallinas 2 ml. Perros y gatos 2 – 3 ml.

Constituidos por el microorganismo o parásito. REACTIVOS ANTIGENOS. Constituidos por el microorganismo o parásito. Antigenos crudos: presentan el inconveniente de dar reacciones heteroespecificas. Antigenos puros. Antigenos altamente purificados: Anticuerpos monoclonales. Gérmenes recombinantes.

BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO Se debe leer con detenimiento los instructivos de la pruebas. Los sueros deben estar en buenas condiciones no hemolisados. El suero debe agitarse suavemente, pues los anticuerpos sedimentan. Los antigenos deberán conservarse en refrigeración. Realizar controles de calidad a los antigenos, periódicamente. Monitorear la temperatura del laboratorio (18 – 26 grados centigrados)

BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO El tiempo de incubación debe controlarse con precisión. No se debe mantener los reactivos a temperatura ambiente mas de lo necesario. Manejar los materiales que se usaron como si fueran infecciosos. Utilizar controles positivos y negativos. No se debe hacer modificaciones al protocolo de la prueba recomendado.

CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE INMUNODIAGNOSTICO Utilizar pequeñas cantidades de reactivos. Sensibles y especificas. Estandarizada y validada. Reproducible.(Ínter laboratorios) Antigenos inactivados. Sencilla. Equipo y reactivos accesibles, económicos.

CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS Pruebas de unión primaria. Miden la cantidad de inmunocomplejos (unión antigeno-anticuerpo), utilizando radioisótopos, colorantes fluorescentes o enzimas. Radioinmunoanalisis (RIA) ELISA Inmunofluorescencia.

Los anticuerpos o antígenos marcados reciben el nombre de conjugado Los anticuerpos o antígenos marcados reciben el nombre de conjugado. Los anticuerpos conjugados suelen ser monoclonales o antinmunoglobulinas especificas. Se les llama sistemas competitivos. Se establece competencia por los sitos de unión disponibles entre el reactivo conocido, (ag, o ac) añadido al ensayo a concentración limitada, y el elemento a investigar.

Pruebas de union secundaria Los complejos se agregan y originan fenómenos perceptibles visualmente. Son reacciones no reversibles. Dependen en gran medida del estado físico del antigeno, de la temperatura, de los electrolitos presentes en la reacción, de la afinidad y avidez en la interacción antigeno-anticuerpo, proporción entre ambos, tipo de inmunoglobulina presente.

CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS Pruebas de unión secundaria: La reacción antigeno – anticuerpo va seguida de una segunda reaccion. Si el antigeno es soluble la reacción que se da es de precipitación. Si el antigeno es particulado (suspensión) la reacción es de aglutinación.

Son de menor sensibilidad que las primarias, pero mas clásicas.

PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA Aglutinación: en placa, en tubo. Precipitación: Inmunodifusion en agar, inmunoelectroforesis Hemoaglutinación. Inhibición de la hemoaglutinación. Fijación de complemento. Neutralización y Seroneutralizacion realizadas in vitro.

CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS Pruebas de unión terciaria. Evalúan la capacidad de los anticuerpos de neutralizar la capacidad biológica de un antigeno ( virus, toxinas). Identificación de toxinas. Identificación de virus Medir la actividad de un anticuerpo para neutralizar a un microorganismo. Pruebas de protección (anticuerpos)

Se basan en la medición de las manifestaciones biológicas que el sistema inmune desarrolla frente a un antígeno en el animal, incluyendo la evaluación del efecto protector real de los anticuerpos o su capacidad de neutralizar la acción biológica del antígeno.

OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA Identificación de problemas de salud. Determinación de la distribución de una enfermedad. Determinación de la incidencia y prevalencia de una enfermedad. Evaluación del sistema inmune del individuo o de una población. Medición de la inmunidad materna. Programación de calendarios de vacunación. Evaluación de programas o campañas de vacunación.